不同免疫檢驗法對乙肝病毒感染血清標志物檢測的效果分析

石永林

摘要：目的 探討不同免疫檢驗法對乙肝病毒感染血清標志物檢測的效果。方法 選取我院2021年5月～2023年3月接收的40例疑似乙肝病毒感染患者為研究對象，均實施ECL檢測（電化學發光法檢測）及ELISA檢測（酶聯免疫吸附試驗），將實時熒光定量多聚酶鏈反應（PCR）檢測結果作為金標準。比較乙肝病毒感染血清標志物檢測結果陽性率、HBV-DNA水平和檢測成本。結果 開展不同免疫檢驗法后，ECL檢測對于檢出乙肝病毒感染血清標志物陽性率有明顯提升（P＜0.05）；同時，HBV-DNA水平及檢測成本也有較大差異（P＜0.05）。結論 對比ELISA檢測方法，ECL檢測檢出乙肝病毒感染血清標志物陽性率更高，臨床應用價值顯著。

關鍵詞：電化學發光法檢測；酶聯免疫吸附試驗；乙肝病毒感染；血清標志物

乙肝是由乙型肝炎病毒引起的一種傳染性疾病。乙肝病毒主要通過血液和體液傳播，包括性傳播、血液傳播（如共用注射器、輸血和器官移植）、母嬰傳播（妊娠期間、分娩或母乳喂養）以及通過其他感染者的打孔皮膚、黏膜接觸傳播。乙肝病毒是DNA病毒，包裹在核心顆粒和表面抗原上。病毒的表面抗原（HBsAg）是診斷乙肝感染的關鍵標志物。在癥狀和并發癥方面，乙肝感染者可能在起初階段沒有明顯的癥狀，也可能表現為疲勞、食欲不振、惡心、嘔吐、腹痛等，而長期慢性感染可能導致肝硬化、肝癌等嚴重并發癥。乙肝是一種需要高度關注和管理的重要傳染病，可以通過預防措施和適當的醫療干預減少感染的風險，防止病情惡化。本文旨在探討不同免疫檢驗法檢測乙肝病毒感染血清標志物的效果。

1研究對象和方法

1.1 研究對象

選取我院2021年5月～2023年3月接收的40例疑似乙肝病毒感染患者為研究對象，男26例，女14例，年齡22～64歲，平均（43.12±0.33）歲。

1.2 研究方法

1.2.1 ECL檢測

（1）準備樣本：獲取合適類型的乙肝病毒樣本，如血液、血清或血漿。確保樣本收集過程遵循相關的安全和無菌操作規范。（2）樣本處理：根據需要，進行必要的預處理步驟，如離心和去除雜質，獲得純凈的樣本。（3）準備試劑與設備：準備電化學發光法檢測所需的試劑盒和儀器設備。按照操作手冊中的說明，正確配制試劑，并將其預熱至適當溫度。（4）標準品與質控品：根據要求，配制并標記乙肝病毒檢測的標準品和質控品。（5）操作步驟：按照所用試劑盒和儀器的操作指南，進行相應的實驗步驟，包括樣品加入、試劑加入、孵育時間和溫度等。（6）電化學發光測定：將處理好的樣本和試劑加載至電化學發光儀器中。根據儀器操作指南設置適當的參數，執行電化學發光測定，并記錄結果。（7）數據分析與解讀：根據儀器自動生成的測定數據，進行數據分析和結果解讀。檢測結果可以定性或定量方式表示，根據需要確定閾值和判斷標準。（8）結果報告：根據實驗室或醫療機構的要求，將乙肝病毒的檢測結果記錄并報告給相關人員。在進行電化學發光法檢測乙肝病毒樣本之前，請確保儀器和試劑的正常工作狀態，并嚴格按照操作手冊中的指導進行操作。此外，及時清理廢棄物。需要注意的是，具體的操作步驟和要求可能因試劑盒和儀器的不同而有所變化。因此，在進行電化學發光法檢測乙肝病毒樣本前，應當仔細閱讀和遵循相關試劑盒和儀器的操作手冊。

1.2.2 ELISA檢測

酶聯免疫吸附試驗是一種常用的生物醫學檢測技術，用于測定體液中特定抗原或抗體的存在和濃度。

（1）樣品處理：收集待檢測的樣本，包括血清、尿液、唾液或其他體液，離心除去固體顆粒。（2）吸附：將待檢測的抗原或抗體溶液加入微孔板中，使其吸附在孔板表面上。通常使用多孔板，每個孔內都有特定的吸附劑，用于捕獲待檢測物質。（3）阻斷：為了防止非特異性吸附，需要將孔板中的空白孔款進行阻斷處理。一般使用類似牛血清蛋白或牛血清的無關蛋白質，添加到孔中，以減少非特異性結合。（4）反應：將待檢測樣本加入包含抗原或抗體的孔中，使其與吸附的抗體或抗原發生特異性結合。經過一定的反應時間，待檢測物質與孔中的抗原或抗體發生免疫反應。（5）清洗：在反應完成后，需要對孔板進行清洗，以去除非特異性結合物質。多次用緩沖液或洗滌溶液洗滌，以減少干擾。（6）酶標記：加入酶標記的二抗或單抗溶液，其可以識別目標分子的另外一個表位，并與其發生特異性結合。這些二抗或單抗通常與酶（如辣根過氧化物酶）結合，使得使用底物后能夠產生可量化的酶反應產物。（7）底物反應：加入底物溶液，被酶催化反應后產生可觀察和測定的信號。常見的底物包括TMB或ABTS。（8）反應停止：加入停止溶液，終止酶反應，使其產生的顏色發生變化或停止。（9）讀取結果：使用酶標儀讀取吸光度（OD）值，通過比較樣品與標準曲線的關系，可以確定待檢測分子的濃度或陽性與陰性結果。需要注意的是，細節和具體的實驗步驟可能會因不同的ELISA類型、廠家或試劑組合而有所不同。

1.3 觀察指標

觀察不同檢測方法乙肝病毒感染血清標志物檢測結果陽性率、HBV-DNA水平和檢測成本。

1.4 統計學方法

數據處理采用SPSS 28.0統計學軟件，計量資料以（±s）表示，采用ｔ檢驗，計數資料用比率表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2結果

2.1 乙肝病毒感染血清標志物檢測陽性率比較

ECL檢測乙肝病毒感染血清標志物檢測結果陽性率高于ELISA檢測，P＜0.05。見表1。

2.2 HBV-DNA水平比較

ECL檢測HBV-DNA水平高于ELISA檢測，P＜0.05。見表2。

2.3 檢測成本比較

ECL檢測檢測成本高于ELISA檢測，P＜0.05。見表3。

3討論

乙肝極易出現肝硬化等諸多問題，未得到及時治療可能會發展為肝癌，嚴重威脅患者身體健康，降低生活品質[1]。因此，面對乙肝病毒感染人員應秉持早診斷、早治療的原則，采取適宜的干預方法，優化治療效果。酶聯免疫吸附試驗（ELISA）廣泛應用于乙肝病毒感染血清標志物檢測。ELISA對乙肝病毒感染血清中的抗原或抗體具有高度敏感性，可以檢測到低濃度的乙肝病毒標志物[2]。ELISA使用特異性的抗體與乙肝病毒感染血清中的抗原或抗體結合，因此具有較高的特異性，可以準確區分乙肝病毒感染和其他相關疾病。ELISA可以同時檢測多個不同的乙肝病毒標志物，包括乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝病毒e抗原（HBeAg）、乙肝病毒核心抗體（HBcAb）等，從而提供更全面的信息[3]。通過對比待測樣本與標準曲線上的標準品的反應程度，可以得出乙肝病毒標志物在血清中的濃度，為疾病的診斷和監測提供定量結果[4]。但ELISA通常需要一定的實驗時間，包括樣本處理、孔板吸附、反應、洗滌和染色等步驟。因此，無法實現實時或快速的結果檢測。ELISA通常是批量進行的，需要同時處理多個樣本，這可能會增加實驗的復雜性和手工操作的風險[5]。ELISA主要用于檢測乙肝病毒感染血清中的抗體或抗原，可能無法直接檢測其他類型的乙肝病毒相關標志物，如核酸。ELISA需要具備特定的實驗室設施、試劑和設備，操作要求較為嚴格。對初學者或非專業人員而言，可能需要一定的培訓才能正確進行實驗[6]。總之，ELISA在乙肝病毒感染血清標志物檢測方面具有高度敏感性、特異性強和多參數檢測的優點，然而也存在不能即時檢測、批量化操作和特定實驗條件要求等缺點。

電化學發光法是一種常用于檢測乙肝病毒感染血清標志物的方法。與傳統的酶聯免疫吸附試驗（ELISA）相比，電化學發光法可以檢測非常低濃度的乙肝病毒指標，具有優異的靈敏度，可提供高準確性的結果，并能夠檢測早期感染或低病毒載量的情況[7]。電化學發光法具有較寬的線性測量范圍，可以適應不同樣本中乙肝病毒指標的廣泛濃度，能在同一份樣本中同時檢測高濃度和低濃度的病毒抗原或抗體。電化學發光法具有快速的分析速度和高通量測試的能力，可以在較短時間內處理大批樣本，適用于臨床診斷實驗室或大規模篩查項目。通過使用特異性的抗原-抗體反應體系，電化學發光法可以準確檢測乙肝病毒指標，而不受其他物質的干擾[8]，確保了檢測結果的準確性和可靠性。電化學發光法可以與自動化的儀器平臺集成，使得操作更加簡便、快捷和標準化，有助于提高實驗室工作效率，減少人為誤差的風險。電化學發光法可同時檢測多個乙肝病毒指標，如乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝核心抗體（anti-HBc）等，對全面評估乙肝感染狀態和監測治療效果有很高的應用價值。

綜上所述，電化學發光法在乙肝病毒感染的檢測中具有高靈敏度、寬線性范圍、快速高通量、特異性、自動化和多指標檢測等應用優勢。對比ELISA檢測方法，ECL檢測檢出乙肝病毒感染血清標志物陽性率更高，臨床應用價值顯著。

參考文獻

[1] 李鑫，李志勤，蘇彬彬，等.不同免疫檢驗方法檢測乙肝病毒感染血清標志物的效果分析[J].醫學食療與健康，2022，20（17）：59-61.

[2] 楊婷，陳正徐.不同免疫檢驗法對乙肝病毒感染血清標志物檢驗的效果評價研究[J].大醫生，2020，5（16）：101-103.

[3] 郜燕，欒和偉，田園，等.探究不同免疫檢驗法對乙肝病毒感染血清標志物檢驗的效果[J].系統醫學，2023，8（1）：77-80.

[4] 關玲.不同免疫檢驗法對乙肝病毒感染血清標志物檢驗的效果分析[J].醫學食療與健康，2021，19（15）：192，194.

[5] 吳義忠，蹇國.血清標志物在乙型肝炎病毒感染相關原發性肝癌中的臨床應用及診斷價值[J].實用檢驗醫師雜志，2022，14（4）：424-427.

[6] 林敏全，黎麗紅，麥偉圖，等.化學發光（吖啶酯發光）與ELISA在乙肝病毒血清學檢驗中的應用價值探討[J].基層醫學論壇，2022，26（13）：31-33.

[7] 王慧，代燕玲.不同乙肝病毒載量與乙肝血清標志物模式、Pre-S1抗原定性結果的相關性分析[J].基層醫學論壇，2023（10）：55-58，74.

[8] 王旭旭，劉媛.不同免疫檢驗方法對乙肝病毒感染血清標志物的檢測探究[J].中外女性健康研究，2022（24）：179-181.