山核桃寡核苷酸探針開發及其應用*

苑 軻 黃堅欽 王克濤 夏國華 張啟香 徐川梅

（浙江農林大學 省部共建亞熱帶森林培育國家重點實驗室 杭州 311300）

山核桃屬（Carya）是胡桃科（Juglandaceae）的一個重要的屬，是珍貴的經濟林樹種，具有極高經濟價值，特別是其中的山核桃（Carya cathayensis）和薄殼山核桃（C. illinoinensis），在浙江省干果產業中占重要的地位。山核桃屬包括約18 個種，分為北美山核桃種和東亞山核桃種兩大組，其中北美山核桃種約11 個種，包括薄殼山核桃、卵形山核桃（C. ovata）及佛羅里達山核桃（C. floridana）等，主要分布在北美；中國山核桃種約6 個種，包括山核桃、云南山核桃（C. tonkinensis）、湖南山核桃(C. hunanensis)、 大別山山核桃(C.dabieshanensis)、貴州山核桃（C. kweichowensis）及喙核桃（C. sinensis）等，分別分布于浙江、云南、湖南、安徽及貴州等省的偏遠山區（Zhanget al.，2013；劉茂春等，1984）。目前，山核桃屬植物相關的細胞遺傳學研究多為在染色體計數及傳統的核型分析等初級細胞遺傳學水平，大部分山核桃種的細胞遺傳學研究尚未開展（Chenet al.，1993；呂芳德等，2002；徐川梅，2017）。山核桃屬植物染色體數目較多，且染色體形態較小，一些染色體極易斷裂，染色體斷片與一些小染色體在形態上非常相似，極難區分，嚴重干擾山核桃屬植物染色體計數（徐川梅，2017）。山核桃屬植物染色體物理標記非常缺乏，已成為制約山核桃屬植物細胞遺傳學研究的技術瓶頸。

寡核苷酸熒光原位雜交技術（oligonucleotide fluorescence in situ hybridization, Oligo-FISH）是一項新的熒光原位雜交技術（fluorescence in situ hybridization,FISH），該技術以長約幾十堿基的單鏈寡核苷酸為探針，可實現對基因組、染色體和特定染色體區段進行精確鑒定和分析，具有簡單、經濟和高效的特點（Hanet al.，2015；……