長沙地區(qū)血小板供者基因數(shù)據(jù)庫理論建模分析*

蔣義,陽智芬,曹麗群,陳潔,楊妞,康甜,謝毓濱(長沙血液中心輸血研究所,長沙410001)

單采血小板輸注主要用于預(yù)防和治療血小板減少或血小板功能異常引起的出血,然而免疫性血小板無效輸注(platelet transfusion refractoriness,PTR)在長期血小板輸注的患者中發(fā)生率為10%～70%,遠(yuǎn)高于其他輸血不良反應(yīng)的發(fā)生率[1]。免疫性PTR主要由人類白細(xì)胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)抗體及人類血小板抗原(human platelet antigen,HPA)抗體引起,而HLA及HPA抗原具有遺傳多態(tài)性,在不同地區(qū)和不同人群中分布有所差異[2]。因此,建立本地區(qū)血小板供者已知HLA/HPA基因數(shù)據(jù)庫,可為臨床提供與患者HLA/HPA相匹配的單采血小板,大大降低免疫性PTR的發(fā)生,提高臨床血小板輸注的有效性。目前,長沙地區(qū)已建立了血小板供者已知HLA/HPA基因數(shù)據(jù)庫,但建立多大的庫存規(guī)模可滿足本地區(qū)臨床基因匹配單采血小板的供應(yīng)尚在摸索實踐中,本研究通過對已知數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,探討建設(shè)規(guī)模與匹配程度的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1研究對象 長沙地區(qū)無親緣關(guān)系的單采血小板捐獻(xiàn)者1 029名,年齡18～45歲,所有志愿者均簽署加入血小板資料庫知情同意書。本研究已通過長沙血液中心倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2主要儀器與試劑 Ion Gene StudioTMS5二代測序儀,A24811 PCR儀、Q5熒光定量PCR儀及AllTypeTMNGS HLA分型試劑(美國賽默飛世爾科技公司),Epoch酶標(biāo)儀(美國BioTek公司)。全血基因組DNA提取試劑盒(北京天根公司),熒光PCR法HPA基因分型試劑盒(江蘇偉禾公司)。

1.3方法

1.3.1DNA提取 按照試劑盒說明書提取外周血DNA,其濃度≥30 ng/μL,A260 nm/A280 nm值1.6～2.0。

1.3.2HPA基因分型 采用多重?zé)晒釶CR法,按照試劑說明書進(jìn)行HPA-1～6、10、15及21的基因分型,針對HPA系統(tǒng)多態(tài)性位點設(shè)計擴(kuò)增引物和熒光探針,利用Taq酶5′端外切的特性,分離探針上的淬滅熒光基團(tuán)和報告熒光基團(tuán),依據(jù)熒光強(qiáng)度直接分析產(chǎn)物情況。……