人單核細胞株巨細胞病毒編碼miR-US25-1-3p過表達后蛋白質組學變化分析*

周萬青,王成,丁小宇,牛冬梅,沈瀚,張春妮(.南京大學醫學院附屬鼓樓醫院檢驗科,南京0008;.南京大學醫學院附屬金陵醫院檢驗科,南京000;.南京中醫藥大學附屬南京中醫院檢驗科, 南京 00)

蛋白質組學(proteomics)在微小核糖核酸(miRNA)調控細胞靶蛋白的鑒定和量化研究中具有重要價值[1-2]。人巨細胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在人群中感染率極高,對于免疫受損人群危害極大,其參與疾病發生發展的病理功能尚不完全清楚,HCMV編碼miRNA可能發揮重要作用。單核細胞是HCMV主要感染和潛伏細胞,在病毒感染免疫中發揮多種功能[3]。基于人單核細胞細胞株(THP-1)為模型細胞,對miRNA作用蛋白靶點的研究目前已有報道,如miR-618通過下調THP-1細胞環腺苷酸調節的磷酸化蛋白-19表達抑制細胞增殖、促進細胞凋亡[4];miR-203a-3p可靶向抑制THP-1中IL-24表達,發揮抗炎作用[5]。同時,THP-1細胞也是HCMV編碼miRNA功能研究重要細胞載體[3]。本課題組前期研究發現,在HCMV激活感染人群外周血中有較高水平hcmv-miR-US25-1-3p表達[6],提示其可能在病毒感染過程中發揮重要作用,但其作用靶點不明確。目前,利用蛋白質組學技術分析HCMV miRNA作用單核細胞后蛋白質表達譜的研究尚未見報道。因此,本研究采用串聯質譜標簽(tandem mass tag,TMT)標記聯合液相色譜-串聯質譜(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)對hcmv-miR-US25-1-3p過表達THP-1細胞進行蛋白質組學分析,通過生物信息學分析潛在靶基因及其參與炎癥、疾病及信號轉導等方面功能。

1 材料與方法

1.1細胞株 THP-1人單核細胞株購自上海生物科學院細胞所。

1.2主要儀器與試劑 ABI 7500熒光定量PCR儀(美國ABI公司),T100梯度PCR儀、Trans-Blot Turbo全能型蛋白轉印……