異丙酚對缺氧/復氧誘導PC12 細胞損傷的影響及其分子機制

許 杰 王 暉 溫 洪 張 艦

首都醫科大學附屬北京朝陽醫院麻醉科，北京 100020

腦卒中是最常見的臨床腦血管疾病之一[1]。缺血性腦卒中可導致腦損傷和神經功能障礙[2]。腦缺血/再灌注雖可挽救死亡細胞，但也可能加重細胞損傷[3]。因此，有必要探究影響腦卒中進程的病理機制，尋找緩解腦缺血/再灌注損傷的有效策略。目前，缺氧/復氧（hypoxia/reoxygenation，H/R）誘導的大鼠PC12 細胞已經被廣泛用于模擬腦卒中體外模型[4]，這為開展腦卒中的相關研究提供了方便。異丙酚是一種高脂溶性麻醉藥物[5]，被發現可緩解缺血/再灌注誘導的腦損傷[6]。此外，異丙酚被證實可改善神經炎癥損傷，并可能作為腦卒中神經保護的有效策略[7-8]。因此，揭示異丙酚調控腦卒中進程的分子機制至關重要。微RNA（microRNA，miRNA）是腦卒中進程的關鍵調控子。研究顯示，miR-1246 在缺血性腦卒中患者血清中高表達[9]。然而，異丙酚是否通過影響miR-1246 表達調控腦卒中進程尚不清楚。因此，本實驗研究異丙酚是否通過調控miR-1246 表達影響H/R 誘導的PC12 細胞損傷，為腦卒中的治療提供潛在分子靶點。

1 材料與方法

1.1 材料

PC12 細胞（貨號：CL-0412）購自中國武漢procell；異丙酚（貨號：2078-54-8）購自Sigma-Aldrich；DMEM 培養基（貨號：11965092）、胎牛血清（貨號：10100147）購自Gibco；Lipofectamine3000（貨號：L300-0075）、Trizol 試劑（貨號：15596026）購自Invitrogen；逆轉錄（貨號：RR047A）和熒光定量試劑盒（貨號：DRR041A）購自TaKaRa；RIPA 裂解液（貨號：P0013B）、BCA 試劑盒（貨號：P0012S）、MTT試劑盒（貨號：C0009S）、Annexin V-FITC/PI 凋亡檢測試劑盒（貨號：C1062S）購自上海碧云天生物技術有限公司；酶聯免疫吸附試驗（enzyme-linked immunoadsordent assay，ELISA）試劑盒（貨號：ml002813、ml028514、ml002859、ml028510）購自上海酶聯生物科技有限公司；miR-1246 模擬物及抑制劑（miR-1246 和anti-miR-1246）購自上海吉瑪制藥技術有限公司；……