基于PI3K/Akt/NF-κB信號通路探討升陽益胃湯對肺癌大鼠免疫力的影響

王宏君，孫星星，張潤蓮

肺癌是一種異質性惡性疾病，是全球癌癥相關死亡的主要原因之一。化療是肺癌常用的治療方法，但化療藥物在有效殺傷腫瘤細胞的同時也會造成免疫系統功能損傷［1］；肺癌免疫微環境中的免疫細胞對肺癌的發生、發展有很大影響［2］。因此，提高肺癌患者免疫力具有重要意義。磷酸肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/核因子-κB（NF-κB）信號通路在腫瘤細胞凋亡和肺癌靶向藥物的發現中起著至關重要的作用［3-4］。腫瘤細胞中PI3K/Akt/NF-κB通路的激活與腫瘤免疫和炎癥反應有關，可增加腫瘤細胞增殖水平［5-6］；PI3K/Akt/NF-κB信號通路的抑制可抑制腫瘤生長和腫瘤免疫逃逸［7］。因此，PI3K/Akt/NF-κB 信號通路可能是腫瘤免疫治療的重要靶點。

升陽益胃湯源于李東垣的《內外傷辨惑論》，有健脾祛濕、升陽益胃的功效。研究顯示，升陽益胃湯具有抗炎、抗氧化和增強免疫的作用，在肺系統疾病和癌癥中具有較高應用價值［8］。如在脾虛型胃癌患者中，升陽益胃湯聯合奧沙利鉑可以提高患者自身免疫力，有利于其后期康復且無明顯不良反應［9］；在慢性支氣管炎患者中，升陽益胃湯可顯著抑制炎癥反應，提高機體免疫力，改善患者肺功能［10］；升陽益胃湯對治療肺癌發熱也十分有效［11］。然而，升陽益胃湯對肺癌患者免疫力的影響及具體藥理作用機制尚不清楚。有研究認為，升陽益胃湯主要通過PI3K/Akt 信號通路參與抗炎、抗纖維化和免疫調節［12］。本研究旨在通過動物實驗探討升陽益胃湯對肺癌大鼠免疫力的影響及潛在機制，以期為肺癌治療提供新的參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SPF 級Wistar 大鼠72 只，6～8 周齡，體質量（200±20）g，雌雄各半，購自中國科學院上海藥物研究所，動物生產許可證號：SCXK（滬）2020-0005，飼養在溫度（24±2）℃、濕度50%～60%、12 h光照/12 h黑暗的環境中，自由食水。

1.2 主要試劑與儀器

升陽益胃湯（黃芪30 g、人參15 g、半夏10 g、甘草5 g、防風10 g、白芍10 g、羌活10 g、獨活10 g、陳皮10 g、茯苓10 g、澤瀉10 g、柴胡10 g、白術10 g、黃連10 g）由河北北方學院附屬第一醫院制劑室提供，加10 倍量蒸餾水浸泡30 min，按常規煎藥法煎煮2次，每次30 min，過濾藥液并濃縮至每毫升含原藥材2 g，高壓滅菌冷卻，保存于4 ℃冰箱中備用，使用時稀釋至所需濃度。3-甲基膽蒽（3-Methylcholanthrene，MCA；純度98%）、二乙基亞硝胺（diethylnitrosamine，DEN；純度≥99.0%）和CelLytic ?NuCLEAR ?提取試劑盒均購自美國Sigma-Aldrich 公司。碘化油注射液購自上海旭東海普藥業有限公司；740 Y-P（PI3K 激活劑，純度99.03%）購自美國MedChemExpress 公司。白細胞介素（IL）-6、腫瘤壞死因子α（TNF-α）和免疫球蛋白（Ig）G、IgA、IgM 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒購自上海酶聯生物科技有限公司。兔源PI3K、磷酸化PI3K（p-PI3K）一抗購自美國Thermo Fisher Scientific 公司；兔源Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、NF-κB p65、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）、核纖層蛋白B1（Lamin B1）一抗和辣根過氧化物酶（HRP）標記的山羊抗兔IgG二抗購自美國Cell Signaling Technology 公司。高分辨小動物數字X線機（美國KUBTEC公司）；Synergy LX多功能酶標儀（美國BioTek公司）；Mx3005P 實時熒光定量PCR 儀（美國Stratagene 公司）；BX53光學顯微鏡（日本Olympus公司）。

1.3 實驗方法

1.3.1 模型制備

100 g/L MCA、0.1 g/L DEN 分別溶解在碘化油中。大鼠適應性喂養后，將動物按隨機數字表法分為對照組12只和造模組60只。造模組參考文獻［13］方法，采用氣管內灌注致癌碘化油溶液法建立肺癌模型：大鼠麻醉后，將其以仰臥位固定在傾斜的手術板上，用固定線掛住大鼠上頜門齒；呼氣結束時，在額鏡直視下將0.1 mL 含致癌物質（100 g/L MCA、0.1 g/L DEN）的碘化油通過鈍的ZY 型12 號針頭經左肺支氣管緩緩注入到大鼠的左肺，肺內出現碘化油時為灌注成功，3周后用高分辨小動物數字X線機進行胸部影像學檢查，當觀察到肺部有重物形成時，則表示模型制備成功，所有大鼠均造模成功。對照組同法將0.1 mL 不含任何致癌物質的碘化油注入左肺。肺內若可見碘化油即為灌注成功。

1.3.2 分組與給藥

造模1 周后將建模成功的60 只大鼠按隨機數字表法分為模型組、順鉑組（5 mg/kg）、升陽益胃湯組（14 g/kg）、740 YP 組（10 mg/kg）［14］、升陽益胃湯+740 Y-P 組，每組12 只。順鉑和740 Y-P 采取腹腔注射給藥，升陽益胃湯采取灌胃給藥，均1次/d，連續28 d。灌胃升陽益胃湯的大鼠每日給藥劑量為14 g/kg 體質量（根據人與大鼠的體表面積換算法計算得出）。

1.3.3 流式細胞術檢測外周血T淋巴細胞亞群

末次干預后24 h，麻醉各組大鼠，從其眼眶取外周血2 mL，置于15 mL 離心管（含1 mL 抗凝劑）中，加入磷酸緩沖鹽溶液（PBS）稀釋，采用Ficoll密度梯度離心法分離外周血單個核細胞，PBS洗滌并重懸后，加入含10μL T細胞表面標志物異硫氰酸熒光素（FITC）-CD3、藻紅蛋白（PE）-CD4、別藻藍蛋白（APC）-CD8 單抗的離心管中，4 ℃下避光孵育10 min，利用流式細胞儀分析T 淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+占比，并計算CD4+/CD8+比值。

1.3.4 ELISA檢測血清炎性因子和免疫球蛋白水平

腹主動脈采血2 mL，室溫靜置30 min，3 000×g離心10 min，分離血清，按照ELISA試劑盒檢測說明書，經溫育、加酶、顯色、終止后，于450 nm 波長處測定吸光度（A）值，根據標準曲線計算血清IL-6、TNF-α和IgG、IgA、IgM水平。

1.3.5 肺、脾和胸腺指數檢測

腹主動脈采血完成后，處死大鼠，取肺、脾和胸腺并稱質量，計算肺、脾、胸腺指數。肺、脾、胸腺指數=［肺、脾、胸腺質量（mg）/大鼠體質量（g）］。

1.3.6 HE染色觀察肺組織病理學變化

取大鼠左側肺組織并分為兩部分，一部分于-80 ℃冰箱中保存備用，另一部分用10%中性甲醛固定，梯度乙醇脫水，石蠟包埋，連續切5μm 厚切片行常規HE 染色。封片后，光鏡下觀察肺組織病理學變化。

1.3.7 實時熒光定量PCR（qPCR）檢測基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）和細胞間黏附分子-1（ICAM-1）mRNA表達

使用Trizol試劑從凍保存的肺組織中分離總RNA。RNA濃度使用分光光度計測定。隨后使用PrimeScript RT Master Mix生成mRNA的互補DNA（cDNA）。qPCR反應體系（25μL）：SYBR Green qPCR Master Mix 12.5μL、正向引物和反向引物各0.5μL、cDNA 模板2.0μL、ddH2O 9.5μL。反應條件：95 ℃預變性10 min；95 ℃變性15 s，60 ℃退火60 s，循環40次；72 ℃延伸60 s。MMP-9引物：上游5'-CATTCGCGTGGATAAGGA GT-3'，下游5'-CACTGCAGGAGGGTCGTAGG-3'；ICAM-1引物：上游5'-CGCAAGTCCAATTCACACTGA-3'，下游5'-CCAGAGCGGCAGAGCAA-3'；GAPDH引物：上游5'-GGTTG AGCAGGTACTTT-3'，下游5'-AGCAAGAGCACAAGAGGAA G-3'。以GAPDH 為內參，采用2-ΔΔCt法定量分析ICAM-1、MMP-9的mRNA相對表達水平。

1.3.8 Western blot 法檢測肺組織PI3K/Akt/NF-κB 通路相關蛋白表達

使用RIPA裂解液（含有1%蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑）提取肺組織中的蛋白質，并采用核蛋白提取試劑盒提取核蛋白（用于檢測NF-κB p65水平）。測定蛋白濃度后，將等量蛋白質（50μg）上樣到10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠上并進行電泳以分離目標蛋白質，轉移到聚偏二氟乙烯膜上后，使用5%脫脂奶粉在室溫下封閉蛋白質2 h。將膜與一抗PI3K（1∶1 000）、p-PI3K（1∶1 000）、Akt（1∶1 000）、p-Akt（1∶1 000）、NF-κB p65（1∶500）、Lamin B1（1∶1 000）、GAPDH（1∶2 000）在4 ℃下孵育過夜。然后，將膜洗滌后與HRP 偶聯的山羊抗兔IgG 二抗（1∶4 000）在室溫下孵育1 h。使用增強型化學發光試劑（ECL）檢測試劑顯色，并進行半定量分析，用GAPDH條帶進行標準化。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0軟件進行數據分析。符合正態分布的計量資料以±s表示，多組間比較用單因素方差分析，組間多重比較用SNK-q法。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組肺癌大鼠外周血T淋巴細胞亞群比較

與對照組比較，模型組CD3+、CD4+占比和CD4+/CD8+均降低，CD8+占比升高（P＜0.05）；與模型組比較，順鉑組和740 Y-P 組CD3+、CD4+占比及CD4+/CD8+比值降低，CD8+占比升高（P＜0.05），而升陽益胃湯組CD3+、CD4+占比和CD4+/CD8+比值升高，CD8+占比降低（P＜0.05），其中升陽益胃湯組CD3+、CD4+占比和CD4+/CD8+比值較順鉑組升高（P＜0.05）；與740 Y-P 組比較，升陽益胃湯+740 Y-P 組CD3+、CD4+占比和CD4+/CD8+比值升高，CD8+占比降低（P＜0.05）。見表1。

Tab.1 Comparison of the proportion of CD3+,CD4+,CD8+and CD4+/CD8+proportion of T lymphocyte subsets in peripheral blood of rats between the six groups表1 各組大鼠外周血T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+占比與CD4+/CD8+比值比較 （n=12，±s）

Tab.1 Comparison of the proportion of CD3+,CD4+,CD8+and CD4+/CD8+proportion of T lymphocyte subsets in peripheral blood of rats between the six groups表1 各組大鼠外周血T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+占比與CD4+/CD8+比值比較 （n=12，±s）

＊＊P＜0.01；a與對照組比較，b與模型組比較，c與順鉑組比較，d與740 Y-P組比較，均P＜0.05。

組別對照組模型組順鉑組升陽益胃湯組740 Y-P組升陽益胃湯+740 Y-P組F CD3+/%72.64±7.31 48.19±5.24a 36.30±4.07b 59.57±7.16bc 32.24±4.35b 45.61±5.29d 82.799＊＊CD4+/%65.23±7.12 42.18±6.49a 30.43±4.80b 54.90±6.32bc 27.60±4.28b 39.08±3.56d 80.689＊＊組別對照組模型組順鉑組升陽益胃湯組740 Y-P組升陽益胃湯+740 Y-P組F CD8+/%27.34±3.25 38.11±5.16a 46.56±5.2b 32.31±6.85bc 49.24±5.40b 40.83±3.62d 41.064＊＊CD4+/CD8+2.38±0.17 1.10±0.13a 0.65±0.10b 1.68±0.15bc 0.55±0.09b 0.96±0.12d 344.714＊＊

2.2 各組肺癌大鼠肺、脾和胸腺指數比較

與對照組比較，模型組脾和胸腺指數均降低，肺指數升高（P＜0.05）；與模型組比較，順鉑組肺、脾和胸腺指數均降低（P＜0.05），而740 Y-P 組脾和胸腺指數降低，肺指數升高（P＜0.05），升陽益胃湯組脾和胸腺指數升高，肺指數降低（P＜0.05），其中升陽益胃湯組脾和胸腺指數較順鉑組升高（P＜0.05）；與740 Y-P 組比較，升陽益胃湯+740 Y-P 組脾和胸腺指數升高，肺指數降低（P＜0.05）。見表2。

Tab.2 Comparison of lung index,spleen index and thymus index of rats between the six groups表2 各組大鼠肺指數、脾指數和胸腺指數比較（n=12，mg/g，±s）

Tab.2 Comparison of lung index,spleen index and thymus index of rats between the six groups表2 各組大鼠肺指數、脾指數和胸腺指數比較（n=12，mg/g，±s）

＊＊P＜0.01；a與對照組比較，b與模型組比較，c與順鉑組比較，d與740 Y-P組比較，均P＜0.05。

組別對照組模型組順鉑組升陽益胃湯組740 Y-P組升陽益胃湯+740 Y-P組F肺指數2.75±0.34 4.83±0.56a 3.50±0.41b 3.62±0.49b 5.87±0.62b 4.90±0.53d 62.721＊＊脾指數4.91±0.57 2.52±0.33a 2.03±0.28b 3.40±0.36bc 1.81±0.25b 2.39±0.30d 120.021＊＊胸腺指數2.56±0.31 2.04±0.27a 1.69±0.22b 2.45±0.30bc 1.42±0.24b 1.81±0.23d 33.981＊＊

2.3 各組肺癌大鼠血清IL-6、TNF-α水平比較

與對照組比較，模型組IL-6、TNF-α 水平升高（P＜0.05）；與模型組比較，740 Y-P 組IL-6、TNF-α水平升高（P＜0.05），而順鉑組和升陽益胃湯組IL-6、TNF-α 水平降低（P＜0.05），且升陽益胃湯組IL-6、TNF-α 水平低于順鉑組（P＜0.05）；與740 Y-P 組比較，升陽益胃湯+740 Y-P 組IL-6、TNF-α 水平降低（P＜0.05）。見表3。

Tab.3 Comparison of serum IL-6 and TNF-α levels in rats between the six groups表3 各組大鼠血清IL-6和TNF-α水平比較（n=12，ng/L，±s）

Tab.3 Comparison of serum IL-6 and TNF-α levels in rats between the six groups表3 各組大鼠血清IL-6和TNF-α水平比較（n=12，ng/L，±s）

＊＊P＜0.01；a與對照組比較，b與模型組比較，c與順鉑組比較，d與740 Y-P組比較，均P＜0.05。

組別對照組模型組順鉑組升陽益胃湯組740 Y-P組升陽益胃湯+740 Y-P組F IL-6 34.26±6.45 61.47±8.39a 50.15±7.62b 39.22±6.18bc 93.40±10.34b 70.83±9.56d 85.268＊＊TNF-α 24.45±4.20 56.29±7.86a 43.31±6.45b 32.06±5.29bc 81.52±8.37b 62.48±7.56d 115.121＊＊

2.4 各組肺癌大鼠血清IgG、IgA、IgM水平比較

與對照組比較，模型組IgG、IgA、IgM 水平降低（P＜0.05）；與模型組比較，順鉑組和740 Y-P 組IgG、IgA、IgM 水平降低（P＜0.05），升陽益胃湯組IgG、IgA、IgM 水平升高（P＜0.05）；升陽益胃湯組IgG、IgA、IgM 水平較順鉑組升高（P＜0.05）；與740 Y-P 組比較，升陽益胃湯+740 Y-P 組IgG、IgA、IgM水平升高（P＜0.05）。見表4。

Tab.4 Comparison of serum IgG,IgA and IgM levels in rats between the six groups表4 各組大鼠血清IgG、IgA、IgM水平比較（n=12，g/L，±s）

Tab.4 Comparison of serum IgG,IgA and IgM levels in rats between the six groups表4 各組大鼠血清IgG、IgA、IgM水平比較（n=12，g/L，±s）

＊＊P＜0.01；a與對照組比較，b與模型組比較，c與順鉑組比較，d與740 Y-P組比較，均P＜0.05。

組別對照組模型組順鉑組升陽益胃湯組740 Y-P組升陽益胃湯+740 Y-P組F IgG 0.48±0.05 0.30±0.04a 0.21±0.03b 0.39±0.05bc 0.15±0.03b 0.27±0.04d 103.680＊＊IgA 0.081±0.011 0.052±0.007a 0.041±0.006b 0.067±0.008bc 0.032±0.005b 0.048±0.006d 69.151＊＊IgM 0.37±0.05 0.24±0.03a 0.15±0.03b 0.31±0.04bc 0.10±0.02b 0.23±0.04d 89.924＊＊

2.5 各組肺癌大鼠肺組織病理學變化比較

對照組大鼠肺組織結構正常，未見明顯病變；模型組肺組織左葉增生、肺泡囊擴張、上皮細胞明顯破損、鱗狀上皮化生、大量腫瘤細胞呈片狀或條索狀，排列紊亂，伴有較多炎性細胞浸潤；740 Y-P組上述病變較模型組加重，伴有組織腫脹、氣管黏膜充血；順鉑組和升陽益胃湯組上述肺組織病變較模型組減輕，肺組織腫脹不明顯，肺泡囊及上皮細胞結構基本清晰；而升陽益胃湯+740 Y-P組上述肺組織病變較升陽益胃湯組加重，較740 Y-P組減輕。見圖1。

2.6 各組肺癌大鼠肺組織ICAM-1 和MMP-9 mRNA水平比較

與對照組比較，模型組肺組織ICAM-1和MMP-9 mRNA水平升高（P＜0.05）；與模型組比較，740 YP組肺組織ICAM-1和MMP-9 mRNA水平升高（P＜0.05），而順鉑組和升陽益胃湯組肺組織ICAM-1 和MMP-9 mRNA 水平降低（P＜0.05），其中升陽益胃湯組肺組織ICAM-1和MMP-9 mRNA水平較順鉑組降低（P＜0.05）；與740 Y-P 組比較，升陽益胃湯+740 Y-P 組肺組織ICAM-1 和MMP-9 mRNA 水平降低（P＜0.05）。見表5。

Tab.5 Comparison of ICAM-1 mRNA and MMP-9 mRNA levels in lung tissue of rats between the six groups表5 各組大鼠肺組織ICAM-1 mRNA和MMP-9 mRNA水平比較（n=12，±s）

Tab.5 Comparison of ICAM-1 mRNA and MMP-9 mRNA levels in lung tissue of rats between the six groups表5 各組大鼠肺組織ICAM-1 mRNA和MMP-9 mRNA水平比較（n=12，±s）

＊＊P＜0.01；a與對照組比較，b與模型組比較，c與順鉑組比較，d與740 Y-P組比較，均P＜0.05。

組別對照組模型組順鉑組升陽益胃湯組740 Y-P組升陽益胃湯+740 Y-P組F ICAM-1 mRNA 1.00±0.00 2.15±0.31a 1.72±0.20b 1.36±0.18bc 3.20±0.35b 2.34±0.30d 115.551＊＊MMP-9 mRNA 1.00±0.00 2.38±0.29a 1.79±0.24b 1.45±0.21bc 3.56±0.38b 2.50±0.33d 134.376＊＊

2.7 各組肺癌大鼠肺組織PI3K/Akt/NF-κB 通路相關蛋白表達比較

與對照組比較，模型組肺組織p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 比值和核NF-κB p65 蛋白水平升高（P＜0.05）；與模型組比較，740 Y-P 組肺組織p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值和核NF-κB p65蛋白水平升高（P＜0.05），而順鉑組和升陽益胃湯組肺組織p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 比值和核NF-κB p65 蛋白水平降低（P＜0.05），且升陽益胃湯組肺組織上述指標水平與順鉑組比較差異無統計學意義（P＞0.05）；與740 Y-P 組比較，升陽益胃湯+740 Y-P 組肺組織p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 比值和核NF-κB p65 蛋白水平降低（P＜0.05）。見圖2、表6。

Fig.2 Western blot result of PI3K/Akt/NF-κB pathway in lung tissue of rats in each group圖2 各組大鼠肺組織PI3K/Akt/NF-κB通路蛋白印跡圖

Tab.6 Comparison of p-PI3K/PI3K，p-Akt/Akt ratio and nuclear NF-κB p65 protein level in lung tissue of rats between the six groups表6 各組大鼠肺組織p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值和核NF-κB p65蛋白水平比較 （n=12，±s）

Tab.6 Comparison of p-PI3K/PI3K，p-Akt/Akt ratio and nuclear NF-κB p65 protein level in lung tissue of rats between the six groups表6 各組大鼠肺組織p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值和核NF-κB p65蛋白水平比較 （n=12，±s）

＊＊P＜0.01；a與對照組比較，b與模型組比較，c與順鉑組比較，d與740 Y-P組比較，P＜0.05。

組別對照組模型組順鉑組升陽益胃湯組740 Y-P組升陽益胃湯+740 Y-P組F p-PI3K/PI3K 0.20±0.04 0.51±0.07a 0.40±0.06b 0.38±0.05b 0.70±0.08b 0.54±0.06d 91.720＊＊p-Akt/Akt 0.15±0.03 0.42±0.06a 0.31±0.05b 0.30±0.05b 0.62±0.07b 0.47±0.06d 105.187＊＊核NF-κB p65/Lamin B1 0.12±0.02 0.35±0.05a 0.27±0.04b 0.24±0.04b 0.56±0.08b 0.41±0.05d 110.736＊＊

3 討論

手術、放療、化療、分子靶向治療等在肺癌治療中均發揮著重要作用，但存在器官功能受損、耐藥、腫瘤復發和轉移等不良反應，患者生存期仍處于較低水平［15-16］。因此，提高患者免疫力對延長患者生存期、抑制腫瘤生長和改善生存質量具有積極意義。

化療藥在抗腫瘤時會損害患者的免疫力，而中藥復方制劑可通過調節機體免疫細胞及細胞因子的含量和活性，增強機體免疫監視，減弱腫瘤細胞的免疫逃逸，進而達到抑瘤效果。例如，益氣化痰方可升高非小細胞肺癌患者外周血CD3+、CD4+占比及CD3+/CD4+比值，調節機體細胞免疫力［17］；益氣健脾方能減緩晚期肺癌化療患者T 淋巴細胞的下降速度，提高患者免疫力，減輕化療的不良反應［18］。升陽益胃湯方劑中黃芪、人參、半夏、白術、茯苓、甘草均為治療肺癌中藥復方中的常用中藥。黃芪、人參是扶正補益之要藥，具有抗肺癌、肝癌、胃癌等惡性腫瘤的作用，作用機制可能主要與提高機體免疫力有關［19］；白術可通過調節腫瘤微環境和調控機體免疫力，發揮抗腫瘤活性［20］；茯苓中的茯苓多糖能夠增強肺癌對化療的敏感性，同時減少放化療引起的不良反應，其作用機制可能與增強免疫因子表達，調節機體免疫有關［21］。基于此，筆者推測升陽益胃湯可能通過調節機體免疫力達到治療肺癌的效果。

T 淋巴細胞分為輔助性T 細胞（如CD4+）、抑制性T 細胞（如CD8+）和毒性T 細胞（CTL），其中CD4+和CD8+在癌癥治療中發揮重要作用［22］。本研究采用含致癌物質的碘化油誘導肺癌模型，發現升陽益胃湯可升高肺癌大鼠CD3+、CD4+占比和CD4+/CD8+比值，降低CD8+占比，并且上調血清IgG、IgA、IgM水平和脾、胸腺指數，表明升陽益胃湯能夠提高肺癌大鼠免疫力。此外，IL-6、TNF-α是腫瘤炎癥反應的關鍵標志物，通常與腫瘤細胞的遷移、侵襲有關。在本研究中，模型組大鼠血清IL-6和TNF-α水平較對照組升高，表明肺癌大鼠體內存在嚴重的炎癥反應；而升陽益胃湯能有效抑制炎性因子水平，表明升陽益胃湯可有效抑制肺癌大鼠體內炎癥反應，提示升陽益胃湯可通過調節免疫力和炎癥反應，從而在肺癌大鼠中發揮腫瘤抑制作用。

PI3K/Akt 信號通路在T細胞發育中具有關鍵作用，可調節CD4+/CD8+T 細胞分化比，而NF-κB 的活性受PI3K/Akt 通路的影響［23］。研究表明，PI3K/Akt/NF-κB 通路參與肺癌的發生、發展［24］。另有報道顯示，黃芩素可通過抑制PI3K/Akt/NF-κB通路來增加A549肺腺癌細胞對順鉑的敏感性［25］；下調顱內動脈瘤中PI3K/Akt/NF-κB 信號通路活性可維持Th17/Treg平衡［26］。PI3K活化可誘導Akt磷酸化，Akt可降解IκB，促使NF-κB 核轉位，啟動其靶基因表達，促進細胞存活；而NF-κB 的活化可上調ICAM-1 表達并誘導MMP-9表達，從而促進腫瘤免疫逃逸［27］。本研究結果顯示，肺癌大鼠肺組織中PI3K/Akt/NF-κB通路相關蛋白水平升高，并伴隨著ICAM-1 mRNA和MMP-9 mRNA水平升高，表明肺癌大鼠PI3K/Akt/NF-κB 信號通路被激活。給予升陽益胃湯干預后，肺癌大鼠肺組織PI3K/Akt/NF-κB 相關蛋白表達降低，ICAM-1 mRNA和MMP-9 mRNA水平降低，并且在使用PI3K 激活劑740 Y-P 的基礎上，加用升陽益胃湯干預可明顯抑制PI3K/Akt/NF-κB信號通路，下調ICAM-1 和MMP-9 水平，增強肺癌大鼠免疫力，提示升陽益胃湯可能通過抑制PI3K/Akt/NF-κB 信號通路活化而發揮免疫調節作用。

綜上所述，升陽益胃湯可增強肺癌大鼠T 淋巴細胞免疫力，抑制腫瘤免疫逃逸，其機制可能與抑制PI3K/Akt/NF-κB 信號通路活化有關。本研究為升陽益胃湯應用于肺癌治療提供了新的理論依據。然而，肺癌的發生、發展過程涉及多種通路，升陽益胃湯對肺癌的治療作用是否與其他機制有關，有待進一步探討。此外，升陽益胃湯是否會影響肺癌細胞的增殖及浸潤，也是下一步研究的重點方向。