頂空GC法測定鹽酸馬普替林中6種殘留溶劑

王瑞芬，康鵬偉

（1. 濮陽市食品藥品檢驗檢測中心，河南 濮陽 457000；2. 濮陽市食品監(jiān)督所，河南 濮陽 457000）

鹽酸馬普替林（maprotiline hydrochloride）, 化學(xué)名N-甲基-9,10-橋亞乙基蒽-9（10H）-丙胺鹽酸鹽，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式見圖1，為白色或類白色的結(jié)晶性粉末，無臭，味苦，微溶于水，易溶于甲醇或三氯甲烷，不溶于正庚烷，熔點230～232 ℃，屬四環(huán)類抗抑郁新藥，該藥首先由Ciba-Geigy公司開發(fā)上市，適用于內(nèi)因性、反應(yīng)性、更年期等各種類型的抑郁性神經(jīng)癥，同時兼有抗焦慮、鎮(zhèn)靜、抗膽堿作用。由于其作用快，副作用小，療效顯著而作為廣譜抗抑郁藥。

圖1 鹽酸馬普替林化學(xué)結(jié)構(gòu)式

鹽酸馬普替林傳統(tǒng)合成工藝[1-2]主要以蒽酮為起始原料，通過氰乙基化、水解、選擇性還原、加成環(huán)合、酰胺化、還原等反應(yīng)得到。董俊峰等[3]對傳統(tǒng)合成工藝進行改良，直接以蒽為原料，經(jīng)甲酰化反應(yīng)、與乙烯基乙醚和甲酸三甲酯加成重排反應(yīng)、“一鍋煮”工藝（先與乙烯加成環(huán)合，然后與甲胺溶液生產(chǎn)亞胺，再經(jīng)過氫化還原得到馬普替林游離堿）、鹽酸酸化最終得到鹽酸馬普替林產(chǎn)品。在上述生產(chǎn)合成過程中，可能會用到甲醇、乙醇、乙醚、異丙醇、叔丁醇和四氫呋喃等有機溶劑。根據(jù)人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)理事會（ICH）指導(dǎo)原則和《中國藥典》2020年版四部通則0861“殘留溶劑測定法”中的有關(guān)規(guī)定，甲醇、四氫呋喃屬于第二類應(yīng)該限制使用的溶劑；乙醇、乙醚、異丙醇、叔丁醇是第三類藥品GMP或其他質(zhì)量要求限制使用的溶劑，所以在原料藥的生產(chǎn)合成過程中需要嚴格控制原料藥中這些有機溶劑的殘留量在安全范圍內(nèi)，以確保藥品的用藥安全。目前，國內(nèi)有關(guān)鹽酸馬普替林原料藥中殘留有機溶劑的研究文獻有報道。本文參考相關(guān)文獻[4-10]，采用頂空氣相色譜法同時測定鹽酸馬普替林原料藥中6種有機溶劑的殘留量，以期為該原料藥的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 7890B 型氣相色譜儀，7697A頂空進樣器、氫火焰離子化檢測器（美國 Agilent 公司），METTLER TOLEDO XS205DU 電子分析天平（梅特勒-托利多）。

甲醇、乙醇、乙醚、叔丁醇和四氫呋喃（國藥集團化學(xué)試劑公司，均為分析純，含量≥99.5 %），異丙醇（上海麥克林生化，含量≥99.5 %，分析純），二甲基亞砜（德國默克公司，含量≥99.9 %，色譜純）。鹽酸馬普原料藥（購自上海某公司，批號：RH243317，RH243319，RH243322）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent DB-624毛細管柱（30 m×0.53 mm，3.0 μm)；進樣口溫度：220 ℃；氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度：260 ℃；升溫程序：初始溫度40 ℃（保持10 min）， 以10 ℃/min速率升溫至160 ℃（保持3 min）；分流比：5:1；載氣為高純氮氣，流速：2.5 ml/min；頂空進樣量：1.0 ml，平衡溫度：80 ℃，平衡時間：30 min。

2.2 溶液制備

精密稱取甲醇191.2 mg、乙醇250.3 mg、乙醚250.2 mg、異丙醇252.5 mg、叔丁醇250.6 mg和四氫呋喃43.2 mg，置入50 ml量瓶，加適量二甲基亞砜溶劑溶解，稀釋至刻度，搖勻，得混合對照品儲備液。精密移取上述混合對照品儲備液2 ml置入20 ml量瓶，加二甲基亞砜溶劑稀釋并定容至刻度，搖勻，得混合對照品溶液，精密移取5 ml置入20 ml頂空瓶，壓蓋密封。取鹽酸馬普替林原料藥約1.0 g，精密稱定，置入10 ml量瓶，加適量二甲基亞砜溶劑，振搖使溶解，定容至刻度，搖勻，得供試品溶液，精密移取5 ml置入20 ml頂空瓶，壓蓋密封。

2.3 線性關(guān)系、檢出限與定量限考察

精密吸取2.2項下混合對照品儲備液0.1，0.2，0.5，1.0，2.0 ml，分別置10 ml量瓶中，加二甲基亞砜溶劑稀釋并定容至刻度，搖勻，得系列濃度混合對照品溶液。取上述溶液適量，按2.1項下色譜條件分析測定，記錄峰面積，以待測有機溶劑的質(zhì)量濃度（μg/ml）X為橫坐標，峰面積Y為縱坐標進行線性回歸，得線性回歸方程（結(jié)果見表1）。取混合對照品溶液逐級稀釋后，頂空進樣分析測定，記錄不同濃度下色譜圖。以信噪比（S/N）為3時的相應(yīng)待測有機溶劑的濃度確定檢測限（LOD），信噪比（S/N）為10時相應(yīng)待測有機溶劑的濃度確定定量限（LOQ）（結(jié)果見表1）。

表1 6種成分的線性關(guān)系、檢出限與定量限結(jié)果

2.4 系統(tǒng)適用性試驗

分別取2.2項下混合對照品溶液、供試品溶液和二甲基亞砜溶劑各5 ml，置入20 ml頂空瓶，壓蓋密封，按1.1項下色譜條件分析測定，記錄色譜圖。結(jié)果表明，在該色譜條件下，各待測成分色譜峰均能達到基線分離，分離度均大于1.5，理論塔板數(shù)以乙醇峰計算大于30 000，二甲基亞砜溶劑對測定無干擾，溶劑峰和各待測成分色譜峰之間分離度良好（見圖2）。

圖2 混合對照品（A），供試品（B），空白溶劑（C）的氣相色譜圖

2.5 精密度試驗

取5.0 ml混合對照品溶液置入20 ml頂空瓶，壓蓋密封，平行配制5份，按2.1項下色譜條件下進樣測定，記錄峰面積，測得甲醇、乙醇、乙醚、異丙醇、叔丁醇和四氫呋喃峰面積的RSD分別為1.19 %，1.26 %，1.12 %，1.80 %，0.46 %，0.15 %（n=5），表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗與中間精密度試驗

取鹽酸馬普替林原料藥（批號：RH243317），按2.2項下方法制備5份供試品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，甲醇、乙醇、叔丁醇和四氫呋喃未檢出，乙醚、異丙醇殘留量分別為0.019 %，0.23 %，RSD分別為2.04 %，1.57 %（n=5），表明該方法的重復(fù)性良好。

另取鹽酸馬普替林原料藥（批號：RH243317），由2名分析人員在不同時間采用不同儀器，按2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定各溶劑殘留量，分別平行測定5份，計算10份供試品溶液殘留量的平均值。甲醇、乙醇、叔丁醇和四氫呋喃未檢出，乙醚、異丙醇殘留量分別為0.02 %，0.23 %，RSD分別為2.25 %，1.34 %（n=10），表明該方法的中間精密度良好。

2.7 回收率試驗

取鹽酸馬普替林原料藥（批號：RH243317）約0.5 g，共9份，置入20 ml頂空瓶，分別加入5 ml濃度為80 %，100 %，120 % 的混合標準溶液，各制備3份平行樣。按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，計算加樣回收率。結(jié)果甲醇、乙醇、乙醚、異丙醇、叔丁醇和四氫呋喃的平均加樣回收率分別為97.96 %，98.93 %，100.13 %，98.20 %，97.45 %，99.86 %，RSD分別為2.08 %，2.25 %，1.56 %，2.38 %，1.87 %，1.92 %。表明該方法用于檢測鹽酸馬普替林原料藥中的殘留溶劑準確度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

取混合對照品溶液5 ml置入20 ml頂空瓶，制備5份平行樣，分別于室溫下放置0，2，4，8，12 h后，按2.1項下色譜條件依次分析測定，測得甲醇、乙醇、乙醚、異丙醇、叔丁醇和四氫呋喃峰面積的RSD分別為1.96 %，2.04 %，2.57 %，1.75 %，1.36 %，1.81 %（n=5），結(jié)果表明，溶液在室溫下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 耐用性試驗

取2.2項下混合對照品溶液，按2.1項下色譜條件分析測定，分別調(diào)整載氣流速、柱溫、進樣口與檢測器溫度，程序升溫的初始溫度與升溫速率，選用不同品牌的色譜柱，依法測定，考察各待測成分色譜峰的分離度。結(jié)果表明，測定條件的微小變動能滿足系統(tǒng)適用性試驗的要求，該方法穩(wěn)定可靠，耐用性良好。

2.10 樣品中殘留有機溶劑的測定

取3批鹽酸馬普替林原料藥（批號：RH243317，RH243319，RH243322），按2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件分析測定，記錄峰面積，計算有機溶劑殘留量，結(jié)果見表2。

表2 鹽酸馬普替林原料藥殘留溶劑測定結(jié)果

3 討論

由于鹽酸馬普替林微溶于水，易溶于二甲基亞砜等有機溶劑，且在分析過程中，二甲基亞砜色譜峰與各待測溶劑色譜峰之間可實現(xiàn)完全分離，溶劑峰對原料藥分析測定無干擾，本文選擇二甲基亞砜為分析檢測溶劑。

本文檢測的6種有機溶劑中，甲醇、四氫呋喃為藥典規(guī)定的第二類限制使用溶劑，限度分別為0.3 %，0.072 %；乙醇、乙醚、異丙醇和叔丁醇為藥品GMP或其他質(zhì)量要求限制使用溶劑，限度為0.5 %。本試驗測得的3批原料藥中乙醚、異丙醇的殘留量均低于藥典規(guī)定的限度要求，其余有機溶劑未檢出，原料藥殘留溶劑檢測項目結(jié)果符合中國藥典2020年版四部通則“0861 殘留溶劑測定法”標準規(guī)定。本文建立了一種氣相色譜測定鹽酸馬普替林原料藥中殘留溶劑的新方法，具有高效、快捷、準確、便捷等優(yōu)點，可滿足現(xiàn)行藥典對于殘留溶劑項目檢測的技術(shù)要求，同時為該原料藥和相應(yīng)制劑生產(chǎn)質(zhì)量控制提供技術(shù)參考。