氣相色譜法測定甲氧芐啶原料藥中的6種殘留溶劑

張 琳 ，任文杰 ，劉葵葵 ，于 亮 ，劉夢瑤 ，李 欣 ，邢雪敏 *

（1. 山東省藥學科學院 山東省化學藥物重點實驗室，山東 濟南 250101；2. 山東福瑞達醫藥集團有限公司，山東 濟南 250101；3. 山東省黏膜與皮膚給藥技術重點實驗室，山東 濟南 250101）

甲氧芐啶為廣譜、高效、低毒的抗菌和殺菌劑，抗菌譜與磺胺藥相近。國內開發了一條以天然資源五倍子為起始原料提取制備3, 4, 5-三甲氧基苯甲酸甲酯，經酞臍化、鐵氛化鉀氧化制得關鍵中間體3, 4, 5 -三甲氧基苯甲醛，再經與3-甲氧基丙腈縮合、與甲醇加成與環合而得，并實現規模化生產。隨著生產規模增大，國內開始尋找可突破五倍子天然資源限制的合成路線。目前，多采用以β-甲氧基丙腈與3, 4, 5-三甲氧基苯甲醛（TMB）為原料經“單甲醚”、“二甲醚”制備甲氧芐啶，或以3,5-二溴-4-羥基苯甲醛為起始原料，經甲氧化、甲基化、縮合、環合反應制得[1-5]。

然而，無論采用何種合成路線，在合成過程中均用到大量的有機溶劑，如苯胺、硫酸二甲酯、丙烯腈、二甲胺、二甲亞砜（DMSO）和N,N-二甲基甲酰胺（DMF）等。其中苯胺、二甲胺屬于有毒物[6-7]，DMSO和DMF屬于第三類溶劑，均在合成工藝后3步中采用，應被嚴格控制。另外，雖然丙烯腈與硫酸二甲酯并非合成工藝最后一步使用的溶劑，但二者屬于劇毒物[8-9]，亦應在甲氧芐啶檢測時對其進行嚴格控制。本文建立硫酸二甲酯、丙烯腈、二甲胺、DMSO、DMF和苯胺等6種溶劑的檢查方法，對甲氧芐啶合成過程中的殘留溶劑檢查提供依據。

1 材料

1.1 儀器

氣相色譜儀（Agilent 7890B），氫化火焰離子化檢測器（FID），氮磷檢測器（NPD），Agilen HP-5毛細管色譜柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm），Agilent DB-WAX毛細管色譜柱（30 m×0.32 mm，0.32 μm)，Agilent DB-1毛細管色譜柱（30 m×0.32 mm，0.33 μm)。

1.2 藥品與試劑

甲氧芐啶（山東榮源藥業，批號：20070002，20070003，20070004）、硫酸二甲酯（分析純）、丙烯腈（分析純）、40 %二甲胺水溶液（分析純）、DMSO（分析純），DMF（分析純）、苯胺（分析純）。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

2.1.1 對照品溶液 取硫酸二甲酯適量，精密稱定，用甲醇定量稀釋制成0.1 mg/ml的溶液作為硫酸二甲酯對照品溶液；取丙烯腈、40 %二甲胺水溶液各適量，精密稱定，分別用DMF定量稀釋制成0.1 mg/ml的溶液，作為丙烯腈、二甲胺對照品溶液；取DMSO適量，精密稱定，用DMF定量稀釋制成0.5 mg/ml的溶液作為DMSO對照品溶液；取DMF適量，精密稱定，用DMSO定量稀釋制成0.1 mg/ml的溶液作為DMF對照品溶液；取苯胺適量，精密稱定，用甲基叔丁基醚定量稀釋制成0.01 mg/ml的溶液，作為苯胺對照品溶液。

2.1.2 線性溶液 取2.1.1項下各對照品溶液，精密量取50 μl，200 μl，1 ml，2 ml，5 ml，分別置入10 ml量瓶，用各對照品溶液制備對應的稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為各對照品的線性溶液。

2.1.3 樣品溶液 取甲氧芐啶約1.0 g，精密稱定，置入10 ml量瓶，加表1中對應的稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為樣品溶液。

表1 不同殘留溶劑檢查方法色譜條件表

2.2 色譜條件

6種殘留溶劑檢查所采用方法的色譜條件均略有不同，各色譜條件見表1。在各色譜條件下，取對應的對照品溶液和樣品溶液各1 μl進樣測定，記錄色譜圖。

2.3 專屬性

分別取2.1.1項下各對照品溶液和其對應稀釋劑各1 μl注入氣相色譜儀，照2.2項色譜條件進行檢測，記錄色譜圖，圖譜見圖1。

圖1 專屬性試驗HPLC圖譜

由圖1可見，各色譜條件下，6種殘留溶劑與其稀釋劑均可較好分離，稀釋劑不干擾檢測，方法專屬性良好。

2.4 線性試驗

精密量取2.1.1項和2.1.2項下各溶液1 μl注入氣相色譜儀，在各色譜條件下進樣測定，記錄峰面積。以各溶劑濃度（X，μg/ml）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標，進行線性回歸，求得標準曲線方程。結果表明，6種殘留溶劑在各自范圍內，線性相關系數均大于0.999，結果見表2。

表2 6種殘留溶劑的線性范圍、線性方程、相關系數、檢測限和定量限

2.5 檢測限和定量限

取2.1.2項下各對照品線性溶液的最低濃度進行逐級稀釋，依法測定，取S/N≈3時的溶液濃度作為檢測限，取S/N≈10時的溶液濃度作為定量限，結果見表2。另取各溶劑的定量限濃度溶液，連續進樣6次，硫酸二甲酯、丙烯腈、DMF、DMSO、二甲胺和苯胺峰面積的RSD依次為4.2 %，3.9 %，6.8 %，7.2 %，4.4 %，5.3 %。實驗結果表明，本方法用于測定6種溶劑的靈敏度較好，定量限精密度較好。

2.6 精密度試驗

取2.1.1項下各對照品溶液1 μl注入氣相色譜儀，在各色譜條件下進樣測定，連續進樣5次，硫酸二甲酯、丙烯腈、DMF、DMSO、二甲胺和苯胺峰面積的RSD分別為0.61 %，0.02 %，3.86 %，2.14 %，1.89 %，2.40 %。

2.7 加樣回收率試驗

取甲氧芐啶約1.0 g，精密稱定，置入10 ml量瓶，再取2.1.1項下各對照品溶液適量，分別加入樣品中，平行制備9份含各溶劑高、中、低3種濃度的溶液，照各溶劑色譜條件測定，外標法以峰面積計算各待測溶劑的回收率，6種溶劑樣品配制濃度和加樣回收測定結果見表3和表4。

表3 加樣回收樣品制備濃度

表4 加樣回收率試驗測定結果

2.8 樣品測定

取甲氧芐啶3批樣品，照各溶劑色譜條件進行檢查，測定結果表5。

表5 甲氧芐啶3批樣品中殘留溶劑測定結果

3 結論

甲氧芐啶在生產過程中代入的6種溶劑均可采用氣相色譜法測定。所采用的色譜條件簡便、準確、有效，適用于甲氧芐啶在生產過程中的溶劑殘留的檢查，為該品種的生產、質檢其相關研究提供一定的依據。