橫經席藥材的生藥學研究及有效成分測定

林雀躍，張穎婷，梁柳春，姚 力，鐘小清，唐 倩，羅 軼*

橫經席藥材的生藥學研究及有效成分測定

林雀躍1，張穎婷1，梁柳春1，姚 力1，鐘小清2，唐 倩2，羅 軼1*

1. 廣西壯族自治區食品藥品檢驗所，廣西 南寧 530021 2. 桂林三金藥業股份有限公司，廣西 桂林 541004

對廣西民族藥材橫經席進行基原調查和生藥學研究，并對有效成分進行測定。通過查閱文獻厘清橫經席的歷史使用沿革及植物分布情況，野外實地調研橫經席的植物基原，采集并制作臘葉標本，通過藥材性狀、顯微特征等方法進行生藥學研究，采用島津液相色譜儀Nexera LC-40，島津Shim-pack GIST C18-AQ HP色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.9 μm），乙腈-0.4%甲酸水為流動相，體積流量0.3 mL/min，梯度洗脫，柱溫35 ℃，PDA檢測器，檢測波長275 nm，建立橫經席藥材中穗花杉雙黃酮和異棘苷的含量測定方法。橫經席的野外資源日益匱乏，市場上常見東南亞進口的紅厚殼屬植物與橫經席混用，采用建立的方法能夠有效地鑒別橫經席藥材。所建立的含量測定方法穩定性和重復性良好，線性范圍寬（5.360～379.800 μg/mL）、線性較好（2＞0.999），平均回收率在98.3%～99.0%。為完善橫經席藥材質量標準和藥合理應用提供依據。

橫經席；基原調查；性狀鑒別；顯微鑒別；穗花杉雙黃酮；異棘苷；UPLC

橫經席為藤黃科紅厚殼屬植物薄葉紅厚殼Gardn. et Champ.的干燥全株，具有祛風濕、壯筋骨、補腎強腰、活血止痛的功效，常用于治療風濕骨痛、跌打損傷、月經不調等癥[1-3]。橫經席現行質量標準見《廣西中藥材標準》1990年版、《廣西壯族自治區壯藥質量標準》第一卷以及《廣西壯族自治區瑤藥材質量標準》第一卷，不僅是廣西民間常用草藥[4-18]，也是成方制劑“正骨水”“婦炎凈膠囊”“婦炎凈片”等的原料藥，年需求量較大。課題組在藥材市場上發現，除正品橫經席藥材外，有部分從東南亞進口的紅厚殼屬植物也充當橫經席售賣，造成了品種混亂。目前，關于橫經席的研究多集中在化學成分分析[19-22]上，無任何有關其植物基原、生藥學研究及含量測定方面的報道，而藥材的現行質量標準也僅有性狀的描述，需要增加顯微等其他鑒別特征以更好地鑒別橫經席正品與偽品，增加指標性成分的含量測定以評價橫經席藥材質量的優劣。為解決上述問題，課題組對橫經席進行了野外調研、生藥學及含量測定的研究，厘清了橫經席藥材的植物基原，建立了橫經席專屬性檢驗方法，為完善橫經席藥材質量標準和藥廠橫經席藥材收購提供理論依據。

1 材料與試劑

1.1 材料

橫經席藥材正品通過野外采集獲得，經廣西中醫藥研究院黃云峰主任藥師鑒定均為薄葉紅厚殼Gardn. et Champ.，樣品編號為S1～S10，均有對應的植物臘葉標本，標本保存于廣西壯族自治區食品藥品檢驗所中藥標本室。橫經席偽品為玉林藥材市場購買，由于未收集到花、果等繁殖器官部位，只能鑒定到屬級，經黃云峰主任藥師鑒定為紅厚殼屬sp.植物，樣品編號為S13～S16。

對照品穗花杉雙黃酮（批號MUST-22111022）購自成都曼斯特生物科技有限公司，異棘苷（批號TS22C063-DT11）購自上海詩丹德標準技術服務有限公司，質量分數均≥98%。

1.2 試劑

島津Nexera LC-40超高壓液相色譜儀，島津Shim-pack GST C18-AQ HP色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.9 μm），CP224S型電子分析天平（德國賽多利斯公司），XS205型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司），KQ-600E型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），Milli-Q型超純水機（美國Millipore公司）。G12型數碼相機（佳能公司），BM2000型顯微鏡（南京江南永新光學有限公司）。

乙腈（色譜純）購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司，甲醇（批號20221026）、醋酸乙酯（批號20221227）、環己烷（批號20211102）、冰醋酸（批號20140422）、丙三醇（批號20220814）均為分析純，購自國藥集團化學試劑有限公司。

2 方法

2.1 橫經席藥材資源情況

紅厚殼屬植物在我國一共分布有4個種，除了橫經席的原植物為薄葉紅厚殼外，還有紅厚殼、滇南紅厚殼和蘭嶼紅厚殼。4種植物在我國的分布地域較為集中，薄葉紅厚殼僅分布在廣西和廣東的南部以及海南地區，紅厚殼僅分布在海南及臺灣地區，滇南紅厚殼僅分布在云南南部地區，蘭嶼紅厚殼僅分布在臺灣東部地區。課題組在廣西全區范圍進行了野外調研，共采集了10個不同區域的植物臘葉標本及對應的10批橫經席藥材（樣品編號S1～S10），植物臘葉標本見圖1。

圖1 薄葉紅厚殼植物標本圖

野外調研發現，橫經席野生資源在廣西境內分布呈片區狀，主要分布在桂東、桂東南及桂南地區，東經108°0'～110°55'，北緯21°42'～24°7'，海拔56～609 m），包括梧州、賀州、欽州、桂平、貴港、玉林、防城港、東興等多個市（縣）行政區域，但資源量較小，種群呈零星分布。橫經席多生長于八角林、竹林、馬尾松林、雜木林等疏林或密林中，位于林分中下層，常伴有芒萁(Houttuyn) Nakaike、九節Wall.、粗葉榕Vahl、半邊旗L.sp.、南方紫金牛D. Don.、石柑子(Raf.) Merr.、求米草(Arduino) Beauv.、莎草屬sp.等植物。橫經席植株生長緩慢，呈低矮小灌木狀，根為直根系，主根發達，須根少，在土層肥厚，疏松肥沃的壤土、砂壤土中生長較好，澇洼地或土壤貧瘠生境中生長不良。

玉林藥材市場調研發現，橫經席為小宗藥材，隨機詢問50家草藥售賣商鋪，共有6家售賣橫經席藥材，分別購買6批橫經席藥材，經本實驗建立的方法進行檢驗，發現2批為正品（樣品編號為S11、S12），4批為偽品（樣品編號S13～S16）。運用DNA條形碼的方法，擴增了野外采集的10批正品（編號S1～S10）的rbcL序列與4批偽品（樣品編號S13～S16）的進行對比[23-24]，發現4批偽品的峰圖呈現一定程度的底峰和一定數量的SNP位點，與正品序列不一致，提示其植物基原可能不是我國分布的品種，與商家提供的從國外進口的信息一致。

2.2 橫經席藥材生藥學鑒定研究

2.2.1 性狀鑒別 本品主根呈長圓錐形或圓柱形，粗細不等，表面棕色至淡棕色，有細縱皺紋，栓皮脫落處呈棕紅色。莖圓柱形，表面灰綠色至灰褐色。幼枝四棱形，有翅，黃綠色。單葉對生，薄革質，長圓形長圓狀或披針形，長6～12 cm，寬1.5～4 cm，黃綠色至灰綠色，兩面有光澤，無毛，頂端漸尖，急尖或尾狀漸尖，基部楔形，邊緣全緣，微反卷，中脈兩面凸起，側脈多而細密，排列整齊，與中脈近垂直。有時可見核果生于葉腋，長圓形，直徑約8 mm。根、莖質堅硬，難折斷，斷面纖維性。氣微，味苦、澀。見圖2。偽品與正品相比，區別在于部分小枝可見密被銹紅色柔毛，葉革質，質地比正品厚，上表面主脈處的毛常脫落，下表面主脈被銹紅色柔毛，相鄰兩條側脈寬度相較于正品更小。見圖3。

2.2.2 顯微鑒別 橫經席藥材根橫切面為木栓層細胞數列，黃棕色。皮層有大型分泌道散在，直徑可達200 μm，薄壁細胞中含草酸鈣方晶和簇晶。韌皮部纖維束壁薄，有分泌道分布，韌皮射線明顯，有時可見韌皮射線延伸至皮層。木質部射線細胞多為1列，導管單個散在或數個相聚，斷續排列成放射狀。見圖4。

橫經席藥材莖橫切面為表皮或殘存，細胞一列，外壁角質增厚。木栓細胞數列。皮層窄，薄壁細胞含淀粉粒和草酸鈣方晶，分泌道散在，橢圓形，直徑可達150 μm。韌皮部纖維束壁薄，有分泌道分布，韌皮射線明顯。木質部寬廣，木射線多為1列。髓部類方形，髓薄壁細胞有的含淀粉粒、草酸鈣方晶和簇晶，分泌道散在，直徑約50 μm。見圖5。

1-藥材全貌 2-根 3-莖 4-小枝 5-葉 6-葉側脈

1-藥材全貌 2-莖 3-葉 4-小枝 5-葉中脈 6-葉側脈

圖4 橫經席根橫切面顯微圖

圖5 橫經席莖橫切面顯微圖

橫經席葉橫切面為上下表皮細胞一列，外側角質層增厚。柵欄組織不發達，細胞1列，類方形，排列緊密，占葉肉組織1/6，不通過主脈；海綿組織發達，排列疏松。主脈維管束類半月形，木質部位于上部，導管扇形排列，下部韌皮部狹小，外側纖維束壁薄；薄壁細胞含草酸鈣方晶和簇晶，分泌道散在，直徑約50 μm。見圖6。

圖6 橫經席葉橫切面顯微圖

橫經席粉末顯微特征為莖表皮細胞黃棕色，長方形或類多角形。葉下表皮細胞垂周壁波浪狀彎曲，氣孔不定式。纖維成束或散在，直徑約8～20 μm，壁稍木化。淀粉粒甚多，類圓形，直徑4～15 μm；復粒由2～3分粒組成。見圖7。

1-莖表皮細胞 2-葉表皮細胞 3-纖維束 4-淀粉粒

橫經席藥材偽品的根、莖、葉橫切面顯微特征與正品較為相似，區別僅在于偽品葉橫切面有時可觀察到非腺毛。偽品粉末顯微特征與正品有一定差異，體現在偽品粉末可觀察到較多石細胞及非腺毛（圖8）。

圖8 橫經席藥材偽品粉末圖

3 橫經席的定量測定

3.1 色譜條件

UPLC-UV分析，流動相為0.4%甲酸水溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脫：0～2 min，45% B，2～15 min，45%～90% B，15～18 min，90% B，18～20 min，90%～45% B；島津Shim-packGST C18-AQ HP色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.9 μm），檢測波長275 nm，柱溫35 ℃，進樣量2 μL。色譜圖見圖9。

1-穗花杉雙黃酮 2-異棘苷

3.2 對照品溶液的制備

分別取穗花杉雙黃酮、異棘苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成混合對照品母液，并逐級稀釋成5個質量濃度，待用。

3.3 供試品溶液的制備

取本品約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入甲醇20 mL，密塞，稱定質量，超聲處理（功率360 W，頻率45 kHz）30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

3.4 線性關系考察

取稀釋好的混合對照品溶液，每個濃度進樣2 μL，按上述“3.1”項下的條件進樣分析，以峰面積為縱坐標，以各對照品的質量濃度為橫坐標建立標準曲線。計算2個對照品的線性回歸方程、相關系數、線性范圍、定量限和檢測限見表1。結果表明穗花杉雙黃酮和異棘苷2個成分均具有良好的線性范圍和線性關系，且檢測靈敏度較高。

3.5 精密度試驗

取供試品溶液（S3），按“3.1”項下條件連續進樣6次，穗花杉雙黃酮和異棘苷色譜峰峰面積的RSD分別為1.26%、1.59%。

3.6 穩定性試驗

取供試品溶液（S3），按“3.1”項下條件分別于0、2、4、8、16、24 h進樣2 μL分析，計算穗花杉雙黃酮和異棘苷色譜峰峰面積的RSD分別為1.85%、1.67%。

3.7 重復性試驗

精密平行稱取6份S3樣品1 g，按“3.3”項下制備供試品溶液，按“3.1”項下條件進樣分析，計算穗花杉雙黃酮和異棘苷含量的RSD值分別為1.67%、1.95%。

3.8 加樣回收率試驗

精密稱定已測定的S3樣品6份，各0.5 g，按照1∶1的質量比例分別加入單一對照品，按“3.3”項下條件制備，按“3.1”項下條件進樣分析，計算加樣回收率，穗花杉雙黃酮、異棘苷的加樣回收率分別為98.3%、99.0%，RSD分別為1.70%、2.33%。

表1 2種化學成分的線性方程、相關系數、線性范圍、定量限和檢測限

3.9 樣品含量測定

對12批橫經席正品及4批橫經席偽品進行含量測定分析，結果見表2。

表2 12批橫經席正品及4批橫經席偽品中2種化學成分含量測定結果

4 討論

從植物基原上看，橫經席藥材的來源只有薄葉紅厚殼一個種，該植物在我國地理分布區域較窄，僅見于廣西、廣東及海南部分地區，其野生資源已呈匱乏態勢。薄葉紅厚殼為灌木或小喬木，與其同屬另外3種植物在原植物形態（均為喬木）上差別較大，特別是在葉子的大小及形狀上有明顯的區別，因此，僅我國分布的其他3種紅厚殼植物基原與橫經席藥材基原發生混用的機率不高。但隨著橫經席藥材國內資源的匱乏及國際貿易頻次的增加，越來越多來自東南亞國家的紅厚殼屬其他種植物也以橫經席藥材的名義出現在市場中，且從性狀上看，與橫經席藥材較為相似，不易于區別，造成了目前橫經席藥材使用品種的混亂。

從生藥學研究結果來看，橫經席正品與偽品具有差異，性狀特征主要體現在葉子的形狀、質地及側脈間距上，顯微特征體現在偽品的粉末中可觀察到石細胞及非腺毛（正品均無）。

從含量測定的結果來看，橫經席正品異棘苷含量較高，異棘苷為橫經席藥材主要化學成分之一，但橫經席偽品幾乎不含異棘苷，可通過測定異棘苷的含量來評價橫經席藥材質量的優劣。

橫經席野生資源已經不能滿足目前醫藥產業的需求，開展橫經席藥材仿野生馴化和良種選育迫在眉睫，同時，建立橫經席種質資源庫對于橫經席藥材資源的保護和可持續開發利用具有重要意義。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 廣西壯族自治區中藥材標準(1990版) [S]. 南寧: 廣西科學技術出版社, 1990: 92-93.

[2] 廣西壯族自治區壯藥質量標準（第一卷） [S]. 南寧: 廣西科學技術出版社, 2008: 204.

[3] 廣西壯族自治區瑤藥質量標準(第一卷) [S]. 南寧: 廣西科學技術出版社, 2014: 220.

[4] 梧州市革命委員會生產指揮部衛生組. 梧州草藥及常見病多發病處方選 [M]. 梧州: 梧州市革命委員會生產指揮部衛生組, 1969: 958-959.

[5] 梧州專區各縣革委會衛生組. 梧州地區中草藥[M]. 梧州: 梧州專區革委會衛生服務站, 1970: 469-470.

[6] 廣西壯族自治區革命委員會衛生管理服務站. 廣西中草藥（第2冊）[M]. 南寧: 廣西人民出版社, 1970: 204-205.

[7] 廣西壯族自治區醫藥研究所革委會. 廣西壯族自治區醫藥研究所標本園藥用植物名錄征求意見稿（第1冊）[M]. 南寧: 廣西醫藥研究所藥用植物園, 1973: 50.

[8] 廣西醫藥研究所藥用植物園. 廣西醫藥研究所藥用植物園藥用植物名錄[M]. 南寧: 廣西醫藥研究所藥用植物園, 1974: 113.

[9] 廣西壯族自治區革命委員會衛生局. 廣西本草選編 [M]. 南寧: 廣西人民出版社, 1974: 1554-1555.

[10] 方鼎. 廣西藥用植物名錄 [M]. 南寧: 廣西人民出版社, 1986: 172.

[11] 黃燮才. 實用中草藥原色圖譜-二 [M]. 南寧: 廣西科學技術出版社, 1996: 144-145.

[12] 梁啟成, 鐘鳴. 中國壯藥學 [M]. 南寧: 廣西民族出版社, 2005: 235.

[13] 龐聲航. 實用瑤藥學 [M]. 南寧: 廣西科學技術出版社, 2008: 72.

[14] 唐弟光. 廣西特色中草藥 [M]. 南寧: 廣西科學技術出版社, 2009: 98.

[15] 滕紅麗, 梅之南. 中國壯藥資源名錄 [M]. 北京: 中醫古籍出版社, 2014: 84.

[16] 韋浩明, 藍日春, 滕紅麗. 中國壯藥材 [M]. 第2版. 南寧: 廣西民族出版社, 2016: 85.

[17] 林春蕊, 許為斌, 黃俞淞, 等. 廣西恭城瑤族端午藥市藥用植物資源 [M]. 南寧: 廣西科學技術出版社, 2016: 76.

[18] 覃迅云, 李彤. 中國瑤醫學 [M]. 北京: 民族出版社, 2001: 26-29.

[19] 陳光英, 吳曉鵬, 戴春燕, 等. 薄葉紅厚殼根的化學成分研究(I) [J]. 中山大學學報: 自然科學版, 2009, 48(4): 52-56.

[20] 陳光英, 韓長日, 宋小平, 等. 薄葉紅厚殼葉化學成分研究(I) [J]. 林產化學與工業, 2003, 23(2): 73-76.

[21] 趙軍, 陳光英, 蔣宗林, 等. 薄葉紅厚殼根中的酮類成分研究[A] // 第七屆全國天然有機化學學術研討會論文集[C]. 成都: 中國化學會, 2008: 60.

[22] 虞俊, 宋鑫明, 陳光英, 等. 薄葉紅厚殼根的呫噸酮成分[J]. 中國天然藥物, 2010, 8(6): 433-435.

[23] 陳士林. 中國藥典中藥材DNA條形碼標準序列[M].北京: 科學出版社, 2015: 63.

[24] 譚麗盈, 鄭婕. 基于rbc L序列鑒別十大功勞葉及其偽品[J]. 北方藥學, 2012, 9(4): 1-2.

Pharmacognostic identification and determination of active ingredient of

LIN Que-yue1, ZHANG Ying-ting1, LIANG Liu-chun1, YAO Li1, ZHONG Xiao-qing2, TANG Qian2, LUO Yi1

1. Guangxi Institute for Food and Drug Control, Nanning 530021, China 2. Gulin Sanjin Pharmaceutical Co., Ltd., Guilin 541004, China

To study present resource situation and establish methods for the pharmacognostic identification and determination of the active ingredient of Hengjingxi ().To investigate the original plant sources and the folk useby referring to the herbal literature. The original plants ofwere surveyed and the original plant specimens were collected through field investigation. The pharmacognosy ofwas studied by morphologic characteristics, character identification, microscopic identifications and TLC identification. A UPLC-UV method for simultaneous determination amentoflavone and isoapetalic acid inwas established by using Shimadzu Shim-pack GIST C18-AQ HP column (100 mm × 2.1 mm, 1.9 μm), acetonitrile-0.4% formic acid water as mobile phase, gradient elution with the flow rate of 0.3 mL/min, the column temperature was 35 ℃, and the detection wavelength of PDA detector was 275 nm.The wild resource ofhad reduced gradually. The other plants of genuswhich imported from Southeast Asia were mixed with. The established method can be used for the identification of. The two compounds have good separation, stability and repeatability, with wide linear range (5.360—379.8 μg/mL) and good linearity (2＞0.999). The average recovery was 98.3%—99.0%.The pharmacognostic identification can provide a theoretical basis for quality control and medical material supply offor pharmaceutical factory.

; original plant survey; character identification; microscopic identifications; amentoflavone; isoapetalic acid; UPLC

R286.2

A

0253 - 2670(2023)12 - 4012 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.12.027

2022-11-09

國家藥監局藥品注冊司專項“特色民族藥檢驗方法的示范性研究”（NIFDC-TCM2021-047-MZY009）；廣西科技重大專項“80種桂產特色中藥材配方顆粒制備工藝與質量標準及產品開發研究”（桂科AA22096019）

林雀躍（1983—），女，副主任藥師，碩士研究生，從事中藥質量研究。E-mail: linqueyue@163.com

通信作者：羅 軼（1972—），女，主任藥師，學士，從事中藥質量研究。E-mail: luoyi20010211@163.com

[責任編輯 時圣明]