基于SSR分子標記的裸花紫珠種質資源遺傳多樣性分析及DNA指紋圖譜構建

張紅瑞，李 鑫, ，陳振夏，胡文斌，李 偉，黃 梅*，于福來*，楊林立

基于SSR分子標記的裸花紫珠種質資源遺傳多樣性分析及DNA指紋圖譜構建

張紅瑞1，李 鑫1, 2，陳振夏2，胡文斌2，李 偉3，黃 梅2*，于福來2*，楊林立4

1. 河南農業大學農學院，河南 鄭州 450046 2. 中國熱帶農業科學院熱帶作物品種資源研究所農業農村部中藥材生物學與栽培重點實驗室/海南省熱帶藥用植物工程研究中心，海南 海口 571101 3. 海南九芝堂藥業有限公司，海南 海口 570311 4. 河南省中醫院，河南 鄭州 450053

研究裸花紫珠種質資源遺傳多樣性，為其種質資源鑒定及優異種質篩選提供依據。采用SSR分子標記技術，探究103份裸花紫珠種質遺傳多樣性，基于遺傳距離進行UPGMA聚類分析，以SSR擴增條帶為基礎建立供試材料擴增條帶DNA指紋圖譜。14對引物共擴增出92個等位基因（number of alleles，a），有效等位基因（effective number of alleles，e）占比39.37%。平均多態性信息含量（polymorphism information content，PIC）為0.468 2，6對引物具有高度多態性（PIC＞0.5），6對具有中度多態性（0.25＜PIC＜0.5）。平均Nei多樣性指數（Nei's gene diversity index，）和Shannon指數（Shannon’s information index，）分別為1.039 0、0.505 1，表現出較高的遺傳多樣性水平。聚類分析將材料分為2大類：類群I包括2份種質；類群II包含101份種質，并分為2個亞類。主坐標分析將材料分為3個類群，與聚類結果基本一致。構建的指紋圖譜通過引物組合能較好地將種質進行區分。103份裸花紫珠種質具有豐富的遺傳多樣性，并成功利用14對SSR引物構建裸花紫珠種質DNA指紋圖譜，可為裸花紫珠種質鑒定、親緣關系以及分子輔助育種提供科學依據。

裸花紫珠；SSR分子標記；遺傳多樣性；遺傳距離；聚類分析；主坐標分析；DNA指紋圖譜

裸花紫珠Hook. et Arn為馬鞭草科紫珠屬植物，干燥葉入藥，主產于海南、廣東、廣西等省份，是海南省道地藥材和黎藥大品種，為《中國藥典》2020年版唯一新增收載藥材，具有消炎、解腫毒、化濕濁、止血等功效[1]。課題組前期對海南島裸花紫珠種質資源進行調查，發現生產上尚無優勢品種，人工栽培種苗大部分來源于自留種，長期以來會導致種質混雜，藥材產量與質量參差不齊[2]，因此對現有種質資源進行鑒定、厘清種質種源親緣關系，對于后續指導裸花紫珠藥材新品種選育顯得尤為重要。

DNA分子標記是研究種質資源遺傳多樣性及分子輔助育種的重要手段，主要包括隨機擴增多態性DNA標記（random amplified polymorphic DNA，RAPD）、擴增片段長度多態性（amplified fragment length polymorphism，AFLP）、簡單重復序列（simple sequence repeats，SSR）等[3]。早期的RAPD、AFLP等傳統標記技術由于多態性信息含量低、分型不穩定、重復性差不適合做種質資源鑒定，而SSR分子標記因其多態性高、重復性好的特點被廣泛應用于遺傳多樣性分析和親緣關系鑒定等[4]。近年來，SSR分子標記逐步應用于裸花紫珠研究當中，于福來等[5]對裸花紫珠進行基因組調研及SSR特征分析，發現其單、雙、三核苷酸重復序列占比較高。彭云露[6]利用MISA軟件對6份裸花紫珠進行SSR位點搜索，篩選出22對引物進行多態性分析，發現在分子水平上的變異較小，因使用的樣本數量較少，難以全面反映出裸花紫珠基因型差異。

鑒于此，本研究擴大樣本數量，基于基因組和轉錄組信息，利用SSR分子標記對來自我國3省23縣（市）共計103份裸花紫珠種質進行遺傳多樣性分析，建立了裸花紫珠DNA指紋圖譜，為裸花紫珠種質鑒定、優異種質篩選以及分子輔助育種等提供理論依據，并為后續充分發掘利用裸花紫珠種質資源、選配育種親本等工作奠定基礎。

1 材料與儀器

1.1 材料

1.1.1 藥材 實驗樣品為來自3省23縣（市）的103份裸花紫珠野生種或半野生種，集中種植于農業部儋州熱帶藥用植物種質資源圃，由中國熱帶農業科學院熱帶作物品種資源研究所于福來副研究員鑒定為馬鞭草科紫珠屬植物裸花紫珠Hook. et Arn，其中93份來自于海南，5份來自于廣東，5份來自于廣西，具體信息見表1，103份種質中不同編號代表來自不同鄉鎮、村落的裸花紫珠種質。

1.1.2 試劑 2×Taq PCR Master Mix（美國基因泰克公司），DL 2000 DNA Marker（美國基因泰克公司），瓊脂糖（美國基因泰克公司），10 μL/200 μL移液吸頭（愛思進生物技術有限公司），96孔PCR板（愛思進生物技術有限公司），磁珠法基因組DNA提取試劑盒（天根生化有限公司），普通引物/熒光標記引物（天一輝遠有限公司），GeneScan 500 LIZ Size Standard（美國應用生物系統公司），POP-7 Polymer（美國應用生物系統公司），Hi-Di Formamide（美國應用生物系統公司）。

1.2 儀器

Mikro 120型臺式離心機（MIKRO公司），Veriti 96型PCR儀（美國應用生物系統公司），DYY-6C型電泳儀（北京六一生物科技有限公司），Gel Doc TM XR+型紫外分析儀（美國伯樂公司），King Fisher? Flex型核酸提取儀（賽默飛有限公司），3730XL型基因分析儀（美國應用生物系統公司）。

2 方法

2.1 總DNA提取與檢測

采集供試材料的幼嫩葉片，液氮冷凍保存，使用磁珠法基因組DNA提取試劑盒（天根生化）提取103份裸花紫珠嫩葉樣品的總DNA，使用Nano DROP 8000超微量分光光度計檢測核酸濃度和純度，260280均在1.8～2.0，表明DNA提取純度較高，最終調整DNA濃度為50～200 ng/L用于進一步研究。

2.2 SSR引物的合成、篩選與PCR擴增

依據課題組前期測序結果，由天一輝遠生物科技有限公司合成384對SSR引物。選擇編號分別為1、2、8、12、50、54、61、77、81、86的10份遺傳背景差異較大的裸花紫珠種質的混合DNA樣本，對合成的SSR引物進行初步篩選，并對初篩引物進行復篩和驗證，最終篩選出14對條帶清晰、多態性高及穩定性好的核心引物（表2）。

SSR的PCR擴增反應體系（10 μL）為：2×Taq PCR Master Mix 5.0 μL，基因組DNA（～20 ng）1 μL，上游引物（濃度10 pmol/μL）0.5 μL，下游引物（濃度10 pmol/μL）0.5 μL，ddH2O 3.0 μL。PCR反應在Veriti 96 PCR儀（Applied Biosystem）上進行。反應程序為：95 ℃預變性5 min；95 ℃變性30 s，62～52 ℃梯度退火30 s，72 ℃延伸30 s，10個循環，每個循環下降1 ℃；95 ℃變性30 s，52 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，25個循環；72 ℃延伸20 min，4 ℃保存。

2.3 擴增產物檢測

熒光PCR擴增完成后，取3 μL熒光PCR產物利用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，檢測PCR條帶是否單一、片段大小是否與預期一致。條帶單一且大小相符的，對照DNA Marker的濃度進行定量，將所有產物稀釋至相同的濃度范圍。取10 μL甲酰胺和0.5 μL內標混勻，加入1 μL PCR稀釋產物，上ABI 3730xl儀器進行毛細管電泳檢測。

表2 14對SSR引物序列信息

2.4 數據處理及分析方法

將電泳結果導入GeneMarker分析軟件中，進行基因型數據的讀取，并按位點名稱分別導出Excel基因型原始數據和PDF分型峰圖文件。利用GenALEx 6.502將SSR分子標記的結果轉化為txt文本格式。Popgene 32[7]計算各SSR位點的等位基因數（number of alleles，a）、有效等位基因數（effective number of alleles，e）、觀測雜合度（observed heterozygosity，o）、期望雜合度（expected heterozygosity，e）、Shannon's信息指數（shannon's information index，）以及基因多樣性指數（nei's gene diversity index，），PowerMarker 3.25[8]計算PIC值。NTSYS-version 2.10e[9]計算遺傳距離，并繪制遺傳距離三維圖。MEGA 6.06[10]繪制環形遺傳聚類圖譜。GenAlEx 6.502[11]繪制主坐標分析圖。

3 結果

3.1 SSR引物遺傳多樣性分析

對所篩選出的14對引物進行PCR擴增，通過DNA分析儀對擴增產物進行分析，準確獲得裸花紫珠不同種質在各位點等位基因的片段大小及相應的電泳圖，部分檢測結果如圖1所示。14對核心SSR引物參數見表3，103份樣品中共擴增92個a，平均每對引物擴增6.571 4個，變化范圍3～13個；e變化范圍在1.081 8～4.947 2，e變異占比39.37%；范圍在0.211 3～1.808 5，其中4對引物達到1.5以上；e變化范圍在0.076～0.801 8，平均為0.507 5（e＞0.5），提示供試材料遺傳多樣性較高[12]；o變化范圍在0.009 7～0.87，平均為0.357 0，僅1個引物的e小于o外，其余引物e均大于o，這說明供試種質內雜合子過剩現象少[13]；平均多態性信息含量（polymorphism information content，PIC）值變化范圍在0.074 7～0.768 4，平均為0.468 2，具有中度多態性（0.25＜PIC＜0.5），其中6對引物具有高度多態性（PIC＞0.5），6對引物為中度多態性（0.25＜PIC＜0.5）。本研究中，高PIC值的引物占42.9%，表明這些SSR位點可從分子水平解釋基因型差異，具有豐富的遺傳差異性，可作為有效標記來構建裸花紫珠種質DNA指紋圖譜。

部分裸花紫珠種質用CnH220引物擴增產物的毛細管電泳檢測圖示例，CnH220引物在所有樣品中共擴增多態性位點7個，分別是164、167、170、173、176、179、182 bp

表3 14對核心SSR引物遺傳多樣性分析

3.2 裸花紫珠種質資源遺傳距離分析

基于NTSYS-pc 2.10軟件計算103份裸花紫珠種質間遺傳距離及構建遺傳距離矩陣，繪制三維曲面圖（圖2），103份供試材料間遺傳距離范圍在0～2.791 7，大多數種質遺傳距離在0.5～1.0，平均遺傳距離為0.634 2，遺傳距離較大，表明各供試材料間具有豐富的遺傳多樣性。其中編號為93（海南昌江縣）的種質和編號為2（海南五指山市）的種質遺傳距離最大（2.791 7），表明2個種質間遺傳背景差異大，親緣關系遠。另外，來自廣東的種質平均遺傳距離為0.644 3，來自廣西的種質平均遺傳距離為0.661 3，來自海南的種質平均遺傳距離為0.616 5，3個省份供試材料間平均遺傳距離差異較小，表明遺傳距離分析準確性強，可信度高。

圖2 裸花紫珠種質資源的遺傳距離三維圖

3.3 裸花紫珠種質資源的聚類分析

根據種質間遺傳距離，利用UPGMA法對供試材料進行分類并得到聚類圖（圖3）。結果表明，101份裸花紫珠種質被有效區分，編號4和編號8的種質（均來自海南白沙）未被區分開，聚類在可信度0.3515處將103份種質分為2大類（類群I、類群II）。類群I包括2份裸花紫珠種質，分別是編號11和編號12（均來自海南五指山）；類群II被分為2個亞類群（II-1和II-2）：亞類群II-1包括編號2（海南白沙）與編號64（海南東方）的種質，亞類群II-2包括其他99份種質，在可信度0.093 7處再次將亞類群II-2分為3個小類群，小類群II-2-1包括編號為68和編號69的種質（均來自海南東方），小類群II-2-2包括編號為54（海南樂東）、66（海南萬寧）、57（海南海口）、82（廣西南寧）的種質，小類群II-2-3含括其他93份種質，包括來自廣西北海和廣西欽州的4份、廣東省5份以及海南省18市（縣）的84份種質。從聚類分析中可以看出，有些位于同一地區的種質并未完全聚在一起，而一些不同地區的則被聚為一類，這可能是由于不同地區種質進化來源相同，也有可能是不同種質在長期自然選擇過程中存在基因交流的現象。

圖3 103份裸花紫珠種質資源的聚類分析

3.4 裸花紫珠種質資源的主成分分析

為了更好地驗證裸花紫珠種質間的遺傳關系，利用GenAlEx 6.502對供試材料進行主成分分析，以第1主成分和第2主成分為二維坐標圖的橫坐標和縱坐標，構建二維主成分分析圖（圖4），其中主成分1解釋率為12.33%，主成分2解釋率為8.96%。主成分分析將103份種質劃分為3個類群，每一類群均分布在不同象限內。

第1類包括24份種質，主要分布在第2象限，其中包含聚類分析中類群I的2份種質、亞類群II-1的2份種質、小類群II-2-1的2份種質、小類群II-2-2的4份種質以及小類群II-2-3中的16份種質。第2類主要分布在第3象限，共聚集18份種質，包含小類群II-2-2中的1份種質以及II-2-3中的17份種質。第3類材料最為豐富，共61份種質，在4個象限中均有分布，但在第1、4象限分布較為集中，包括聚類分析小類群II-2-2中的3份種質以及II-2-3中的58份種質，其中來自廣東、廣西的10份種質被聚集在一起。主成分分析從不同角度直觀反映出供試材料間的親緣關系，且種質在主坐標二維圖中分布均勻，表明其遺傳多樣性較為豐富[15-16]，聚集在一起的裸花紫珠材料代表種質間遺傳背景相似，親緣關系較近。本研究將PCoA主成分分析與UPGMA聚類分析相結合，發現類群內對具體種質的分布高度一致，兩者分析結果可以相互佐證。

圖4 103份裸花紫珠種質SSR標記主成分分析的二維點散圖

3.5 構建裸花紫珠DNA指紋圖譜

DNA指紋圖譜表現形式采用閔學陽等[17]的方法，根據擴增結果將有條帶、無條帶分別記為“1”和“0”，根據Botstein[18]提出的理論，指紋分析無法僅用1對引物將某個種質與其他種質區分開，因此需要利用引物組合的方式進行區分。對14對引物進行多樣性分析后，選取具高度多態性的引物區分所有種質，如不能全部鑒別，增加一個引物進行區分，直到將所有種質區分開。從表3可以看出，CnH080、CnH107、CnH156、CnH182、CnH220、CnH304引物多態性信息含量高（PIC＞0.5），引用上述6對引物組合共區分出99個種質，還有4份種質未被區分。因此，綜合PIC值和等位基因數等因素，增加CnH078引物進行鑒別，共區分出101個種質，將14對引物全部轉換成指紋圖譜（表4），仍有2個種質（編號4和編號8）無法完全區分開，這與聚類分析結果一致，這表明該2份材料可能為同一種質，也可能與供試種質較多，引物鑒別力下降有關[19]。本研究首次利用14對引物構建出101份裸花紫珠種質資源DNA指紋圖譜代碼，使每份種質都有各自唯一的一套DNA指紋，可在分子水平上輔助解決裸花紫珠同名異種或者同種異名等種質混亂現象[20]，也使裸花紫珠種質鑒定更加準確高效。

表4 103份裸花紫珠DNA指紋圖譜

續表4

續表4

4 討論

4.1 SSR引物有效性評價

SSR標記是用來鑒定品種真實性和遺傳多樣性的有力工具[21]，遺傳多樣性水平高可代表物種群體健康、適應性強[22]，而SSR引物有效性高則可以更好地評價物種遺傳多樣性。本研究利用14對SSR引物對來自不同省份的103個裸花紫珠種質進行遺傳多樣性分析，較前人研究[6]極大的擴增了樣本數量，且來源幾乎涵蓋所有裸花紫珠的主產區，樣本具有較好的代表性。分析獲得的a平均值（6.571 4）和PIC平均值（0.468 2）較高，說明引物多態性高、有效性強，有利于不同遺傳背景供試種質的區分，在種質遺傳多樣性分析中表現出較大潛力。研究檢測到的a值較高（92個），e占比較大（39.37%），這可能與供試種質來源廣、類型豐富有關，且采用的方法精確、靈敏，能夠有效評價裸花紫珠遺傳多樣性。基于以上分析，本研究所篩選的引物有效性強，區分效果好，使得裸花紫珠種質鑒別更加準確，為后續裸花紫珠遺傳變異檢測及雜交育種奠定試驗基礎。

4.2 裸花紫珠遺傳關系

供試材料間的遺傳距離可以直觀反應種質的遺傳多樣性，間接體現出種質間遺傳背景相似度。趙雅楠等[23]利用10對多態性引物對92份內蒙古綠豆進行遺傳距離分析，發現內蒙古綠豆遺傳多樣性豐富，個體差異水平較高。鄭濤等[24]利用12對SSR引物對12份血葉蘭進行遺傳分析，發現種質間遺傳距離最大為0.74，研究有效驗證了種質間親緣關系與遺傳距離密切相關。本研究供試材料的遺傳距離在0～2.791 7，遺傳距離變異幅度大，遺傳背景差異明顯。少部分來源相同的種質遺傳距離較近，如來自海南三亞的102號和103號種質遺傳距離為0.052 7，來自廣西欽州的83號和84號種質遺傳距離僅為0.032 3，原因可能是一些地理來源較近的種質經過長時間自然馴化，導致遺傳變異下降。可見SSR分子標記能夠在一定程度上反應種質地理來源情況。從遺傳距離分析，有些來源不同的種質遺傳距離卻比較接近，如來自海南臨高的13號種質與來自海南儋州的89號種質遺傳距離僅為0.160 2，這可能與種質具有相似的環境背景或常年引種有關，導致個別種質在進化過程中出現DNA分子差異水平下降的情況。因此，在今后的育種工作中一方面要結合分子標記技術開展各地方種質遺傳多樣性研究，發掘親緣關系相對較遠的種質；另一方面要加大種質資源的收集及保存，拓寬裸花紫珠育種的遺傳背景。

4.3 裸花紫珠類群結構

物種的群體遺傳結構與物種的起源進化、自然分布等有很大關系，對研究物種之間的進化關系有很大幫助[25]。Feng等[26]運用SSR技術對40份野生黃精進行聚類分析，認為野生黃精群體間遺傳差異小，主坐標分析有效地驗證了聚類分析的結果。Iqbal等[27]運用SSR技術對13個橄欖品種進行聚類分析及主坐標分析，明確了13份材料間親緣關系的遠近，證明橄欖品種間遺傳變異在一定程度上收到地理環境的影響。本研究將UPGMA聚類分析及主坐標分析相結合，發現各類群呈現一定地域相關性，即相近地區材料間遺傳關系較近，來自同一地區的種質聚集在一起的幾率較大，如圖3中類群II-2-3將來自廣東省的所有種質以及廣西省的4份種質均聚集在了一起，圖4的主成分分析將廣東的5份種質聚為一類。不同地區來源種質也存在相互聚集的情況，如類群II-2-2中聚集了海南島的3份種質和廣西的1份種質，主成分將廣東的5份種質和廣西的5份種質聚集在一起，這體現出該種質可能來源于相同（相似）的祖先，或在發展種植過程中不同地理來源的種質為適應環境從而發生基因交流的現象。未被聚集在一起的種質代表種質間親緣關系較遠，遺傳背景差異大，因此，在今后對裸花紫珠進行種質改良時，可以利用親緣關系遠、品質性狀優的種質進行雜交選育，既可獲得遺傳差異豐富的后代，又能在一定程度上提高裸花紫珠種質遺傳多樣性。

4.4 裸花紫珠DNA指紋圖譜構建

目前，構建植物分子指紋圖譜主要有特征譜帶法、引物組合法和單引物法3種方式[28]。其中，引物組合法一般用于種質數量多的指紋圖譜構建，該方法不僅可以高效、快速地鑒別種質，而且極大地提高引物的鑒別能力。目前，SSR標記在裸花紫珠指紋圖譜構建中的應用尚未見報道，鑒于此，本次研究運用SSR標記技術，利用14對高多態性引物，采用引物組合法，首次構建了103份裸花紫珠種質DNA指紋譜圖，并精準鑒別出101份裸花紫珠種質。然而研究中選用的14對引物并未將103個種質全部區分，4號種質與8號種質的指紋圖譜不具備唯一性（表4）。究其原因，一方面可能是由于多態性引物的開發還不夠全面，另一方面可能與所收集的該種質地理來源相近、種質間遺傳背景相似有關。

未來隨著裸花紫珠種質收集范圍的逐漸擴大與種質信息的不斷更新，本研究中的SSR引物可能會無法全部鑒別，因此應進一步優化SSR引物或采用更多的多態性引物組合，為DNA指紋圖譜應用于裸花紫珠種質鑒別提供方便快捷的記錄方式的同時，擴展更加完善的指紋圖譜。

本研究利用14對SSR標記對裸花紫珠種質資源進行遺傳多樣性分析，結果表明，每個SSR標記平均6.571 4個a，PIC平均為0.468 2，說明引物多態性較高，鑒別能力強，能夠精準評價所有種質的遺傳多樣性。對供試材料進行遺傳距離分析發現，遺傳距離在0～2.791 7，遺傳變異幅度大，遺傳背景差異明顯。聚類分析將供試材料分為2大類群，類群II又分為2個亞類，與主成分分類結果基本一致，兩者有效驗證了種質間親緣關系的遠近。利用14對引物組合首次建立103份裸花紫珠DNA指紋圖譜，能夠精準鑒定101份種質，區分全面并具代表性，對裸花紫珠種質溯源管理及原產地保護具有重要意義。

綜上所述，本研究印證了SSR標記技術應用于裸花紫珠遺傳多樣性分析的可行性，這些SSR標記不僅為裸花紫珠遺傳多樣性分析和DNA指紋圖譜構建提供有價值的候選標記，也為后續裸花紫珠種質分子鑒別、優良種質的分子輔助育種提供分子技術手段。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Genetic diversity analysis and DNA fingerprints construction ofgermplasm resources based on SSR markers

ZHANG Hong-rui1, LI Xin1, 2, CHEN Zhen-xia2, HU Wen-bin2, LI Wei3, HUANG Mei2, YU Fu-lai2, YANG Lin-li4

1. College of Agriculture, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450046, China 2. Tropical Crops Genetic Resources Institute, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences/Key Laboratory of Biology and Cultivation of Herb Medicine (Haikou), Ministry of Agriculture and Rural Affairs/Hainan Provincial Engineering Research Center for Tropical medicinal plants, Haikou 571101, China 3. Hainan Jiuzhitang Pharmaceutical Co., Ltd., Haikou 570311, China 4. Henan Province Hospital of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450053, China

To study the genetic diversity and genetic relationship of Luohuazizhu (Hook. et Arn.) germplasm resources, provide the basis for identification of germplasm resources and screening of excellent germplasm resources.Genetic diversity of 103 germplasm resources was explored by SSR molecular marker technique, UPGMA cluster analysis was carried out based on genetic distance, and DNA fingerprints of amplified bands of tested materials were established based on SSR amplified bands.A total of 92 alleles (a) were amplified by 14 pairs of primers, effective number of alleles (e) accounted for 39.37%. The average polymorphism information content (PIC) was 0.468 2, six pairs of primers were highly polymorphic (PIC＞0.5) and six pairs were moderately polymorphic (0.25＜PIC＜0.5). The average Nei’s gene diversity index () and Shannon’s information index () were 1.0390 and 0.5051, showing a high level of genetic diversity. Cluster analysis divided the materials into two categories: Group I included two germplasm; Group II contains 101 germplasm resources and is divided into two subclasses. Principal coordinate analysis divided the materials into three groups, which were basically consistent with the clustering results. The constructed fingerprint can distinguish germplasm by primer combination.A total of 103 germplasms have rich genetic diversity. The DNA fingerprint ofgermplasms was successfully constructed by 14 pairs of SSR primers. The results can provide scientific basis for germplasm identification, genetic relationship and molecular assisted breeding ofgermplasms.

Hook.et Arn.; SSR molecular marker; genetic diversity; genetic distance; cluster analysis; principal coordinate analysis; DNA fingerprinting

R286.12

A

0253 - 2670(2023)12 - 3971 - 12

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.12.023

2022-12-06

海南省重大科技計劃項目（ZDKJ2021001）；海南省自然科學基金項目（322QN393）

張紅瑞，碩士生導師，教授，研究方向為中藥資源與栽培。E-mail: zhanghongrui2003@126.com

通信作者：于福來，博士，研究員，主要從事中藥（南藥）資源定向培育研究。E-mail: fulai.yu@163.com

黃 梅，碩士，助理研究員，主要從事南藥種質資源評價及規范化栽培。E-mail: huangmei122@126.com

[責任編輯 時圣明]