丹參酮IIA通過抑制miR-376b-5p降低急性心肌梗死大鼠致炎細胞因子分泌并減輕心肌損傷研究

胡月華，陳 強，邢海生，陳麗珠，郭曉華，任星星

丹參酮IIA通過抑制降低急性心肌梗死大鼠致炎細胞因子分泌并減輕心肌損傷研究

胡月華1，陳 強2*，邢海生3，陳麗珠2，郭曉華2，任星星2

1. 內蒙古科技大學包頭醫學院，內蒙古 包頭 014000 2. 內蒙古科技大學包頭醫學院第一附屬醫院 心血管內科，內蒙古 包頭 014000 3. 內蒙古科技大學包頭醫學院第一附屬醫院 急診科，內蒙古 包頭 014000

研究丹參酮IIA改善大鼠急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）作用機制。將SD大鼠隨機分為假手術組、模型組、丹參酮IIA（5 mL/kg）組、miR-376b-5p mimics＋丹參酮IIA組和miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組，每組10只。除假手術組外，其他各組采用大鼠冠狀動脈前降支結扎法建立AMI模型，給予藥物干預12周后，qRT-PCR檢測大鼠心肌組織中基因表達；采用蘇木素-伊紅（HE）和Masson染色觀察心肌組織病理變化和纖維化程度；ELISA檢測血清炎癥因子水平；免疫組化檢測心肌組織中I型膠原蛋白（collagen type I，Col1）、III型膠原蛋白（collagen type III，Col3）和α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）表達；Western blotting檢測心肌組織中轉化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）/Smad和同源基因家族成員A（Ras homolog gene family member A，RhoA）/Rho相關螺旋卷曲蛋白激酶（Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase，ROCK）信號通路相關蛋白表達。與假手術組比較，模型組大鼠心肌組織中miR-376b-5p表達和血清中白細胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平及磷酸肌酸激酶同工酶（creatine kinase-myocardial band，CK-MB）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）活性均顯著升高（＜0.05）；心肌細胞排列不齊，間隙大，可見明顯膠原纖維沉積；心肌組織Col1、Col3、α-SMA、TGF-β1、磷酸化Smad2/3（phosphorylated Smad2/3，p-Smad2/3）、RhoA、ROCK1/2和纖連蛋白（fibronectin，FN）蛋白表達均顯著升高（＜0.05），Smad7蛋白表達顯著降低（＜0.05）。與模型組比較，丹參酮IIA組和miR-376b-5p抑制劑＋丹參酮IIA組心肌組織細胞形態及纖維化程度得到明顯改善，血清中IL-1β、TNF-α水平和CK-MB、LDH活性顯著降低（＜0.05），心肌組織Col1、Col3、α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/3、RhoA、ROCK1/2和FN蛋白表達顯著降低（＜0.05），Smad7蛋白表達顯著升高（＜0.05）。丹參酮IIA可能通過抑制心肌組織中表達和TGF-β1/Smad、RhoA/ROCK信號通路活化，從而對AMI模型大鼠心室重構起到保護作用。

丹參酮IIA；急性心肌梗死；miR-376b-5p；轉化生長因子-β1/Smad信號通路；RhoA/ROCK信號通路；炎癥反應；心室重構

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是由遺傳因素和環境因素共同作用引起的一種常見的心血管疾病，具有高患病率、高死亡率和高致殘率的特點，已超過癌癥成為威脅人類健康和生命最大的疾病[1-3]。目前臨床治療AMI方法雖取得一定療效，但AMI致死率和致殘率仍然很高，治療結果仍不理想。究其主要原因是AMI患者心室重構導致患者心臟功能不可逆損害[4-5]。因此，目前迫切需要尋找抑制AMI患者心室重構的新靶點及其藥物，為治療AMI提供新的臨床策略和思路。

微小RNA（microRNA，miRNA）是一類非編碼小分子RNA，是轉錄后水平基因表達調控過程中重要的調節因子。miRNA參與生物多種生理過程的調節，如細胞增殖、分化、凋亡等，且廣泛參與生命過程與疾病發生和發展[6-7]。miRNA還可參與心肌纖維化、心肌肥厚等心血管疾病的病理生理變化過程，促進或抑制心肌細胞死亡，調節缺血后新血管形成。目前大量的miRNA被發現參與了心室重構的發生發展過程，包括miR-144、miR-133、miR-99a、miR-30及miR-34等[8-9]。Pan等[10]發現M3亞型乙酰膽堿受體可通過抑制miR-376b-5p來發揮心肌保護作用。研究報道，iv miR-144能夠調控細胞自噬，降低纖維化，進而對AMI小鼠心室重構具有促進作用[11]。炎癥反應能引起AMI病理過程中的心室重構。炎癥是AMI患者的心室重構和心肌纖維化的主要病理機制之一。研究表明，心肌梗死后會導致內源性免疫系統激活，導致炎性介質的大量釋放，進而促使炎性細胞的遷移，加速心肌細胞的再次損傷，釋放大量的炎性物質，加速心肌組織纖維化和心肌細胞凋亡[12-13]。這為其他miRNA緩解或防治AMI小鼠心室重構提供了理論和實驗基礎。

丹參酮IIA[14-15]靶向miRNA對多種心血管疾病頗具療效，這為治療AMI心室重構提供了新的視角和機遇。本課題組前期研究發現，miR-376b-5p在逆轉老年自發性高血壓大鼠大鼠左室重構中發揮重要作用，且已證實過表達miR-376b-5p可消除丹參酮對自發性高血壓大鼠大鼠心室重構的改善效果，表明miR-376b-5p表達是大鼠心室重構重要途徑，這為miR-376b-5p在AMI大鼠心室重構提供了研究基礎[16]。因此，miR-376b-5p可作為治療AMI大鼠心室重構重要靶點。但miR-376b-5p調控AMI大鼠心室重構具體機制尚不清楚。因此，本研究擬探究丹參酮IIA以及miR-376b-5p在改善AMI大鼠心室重構中的作用及其作用機制。

1 材料

1.1 動物

SPF級雄性SD大鼠50只，8周齡，體質量220～240 g，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司，合格證號SCXK（瀘）2020-0007。SD大鼠于內蒙古科技大學包頭醫學院第一附屬醫院動物實驗中心SPF級實驗動物室飼養，每籠5只，溫度22～25 ℃，相對濕度60%～70%，自由進食飲水。動物實驗經內蒙古科技大學包頭醫學院第一附屬醫院醫學倫理委員會批準（批準號BYYFY-2022-0008）。

1.2 藥品與試劑

丹參酮IIA磺酸鈉注射液（批號H31022558）購自上海上藥第一生化藥業有限公司；腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）試劑盒（批號H052-1-1）、白細胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）試劑盒（批號H002-1-1）、磷酸肌酸激酶同工酶（creatine kinase-myocardial band，CK-MB）試劑盒（批號H197-1-1）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）試劑盒（批號A020-2-2）均購自南京建成生物科技有限公司；兔抗I型膠原蛋白（collagen type I，Col1）抗體（批號YT6135）、兔抗α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）抗體（批號YT5053）、兔抗SMAD家族成員2（SMAD family member 2，Smad2）抗體（批號YM3364）、兔抗Smad3抗體（批號YT4334）、兔抗磷酸化SMAD2（phosphorylated Smad2，p-Smad2）抗體（批號YP0362）、兔抗p-Smad3抗體（批號YP0585）、兔抗Smad7抗體（批號YN2330）、兔抗Rho相關螺旋卷曲蛋白激酶1（Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase 1，ROCK1）抗體（批號YT4162）、兔抗ROCK2抗體（批號YT4163）、兔抗纖連蛋白（fibronectin，FN）抗體（批號YM3137）、兔抗轉化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）抗體（批號YT4632）、兔抗同源基因家族成員A（Ras homolog gene family member A，RhoA）抗體（批號YT4077）、鼠抗III型膠原蛋白（collagen type III，Col3）抗體（批號YM6374）、鼠抗β-actin抗體（批號YM3028）均購自ImmunoWay Biotechnology公司；HRP標記的山羊抗兔IgG抗體（批號D110058）、HRP標記的山羊抗鼠IgG抗體（批號D110087）、HRP標記的鏈霉卵白素工作液（批號D111054）、牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA，批號B600036）、BCA蛋白測定試劑盒（批號C503021）、二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）試劑盒（批號C520017）均購自上海生工生物工程（上海）股份有限公司；高表達miR-376b-5p的慢病毒載體購自上海譽宴生物技術服務中心；miR-376b-5p模擬物（miR-376b-5p mimics：F: 5’-GGGTGGATATTCC- TTCTA-3’，R: 5’-TTTGGCACTAGCACATT-3’）、miR-376b-5p抑制物（miR-376b-5p inhibitor：5’-AAACAUAGAAGGAAUAUCCACG-3’）由上海吉凱基因公司合成。

1.3 儀器

BH-2型光學顯微鏡（日本Olympus公司）；QuantStudio 6 Flex qRT-PCR儀（美國ABI公司）；MultiskanGo 1510型全波段酶標儀（美國Thermo公司）；Power Pac 1645050型免疫印跡組件、TransBlotSD 1703940型垂直電泳轉印系統、Universal Hood-II型凝膠成像儀（美國Bio-Rad公司）。

2 方法

2.1 AMI大鼠模型建立、分組和給藥

SD大鼠適應性飼養1周后，隨機分成假手術組、模型組、丹參酮IIA（5 mL/kg）組、miR-376b-5p mimics＋丹參酮IIA組和miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組，每組10只。采用大鼠冠狀動脈前降支結扎法構建AMI大鼠模型，假手術組除不結扎外其余步驟均同造模組。AMI心室重構模型成功后，丹參酮IIA組ig丹參酮IIA磺酸鈉注射液，1次/d，連續12周；miR-376b-5p mimics＋丹參酮IIA組和miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組分別先將大鼠轉染miR-376b-5p mimics載體和miR-376b-5p inhibitor載體，按上述造模方法構建動物模型，以標準飼料喂養，造模成功后ig丹參酮IIA磺酸鈉注射液，同時尾iv 0.1 mL miR-376b-5p mimics載體或miR-376b-5p inhibitor載體，1次/d，連續12周[16]。

2.2 ELISA檢測大鼠血清中炎癥因子水平

給藥結束后，按照Hou等[17]方法收集各組大鼠腹主動脈血清，按照ELISA試劑盒說明書檢測血清中TNF-α、IL-1β水平和LDH、CK-MB活力。

2.3 大鼠心臟組織病理及纖維化程度觀察

處死大鼠，每組隨機選取5只大鼠摘取左心室，用4%多聚甲醛固定后分離并包埋在石蠟中，4 μm切片。隨后按照Shi等[18]方法將心臟樣本分別進行蘇木素-伊紅（HE）染色和Masson染色，于顯微鏡下觀察并拍照，評估心臟組織病理變化和心肌細胞纖維化程度。

2.4 免疫組化檢測心肌組織Col1、Col3和α-SMA蛋白表達

取心肌組織切片，脫蠟、水化，滴加30 mol/L過氧化氫于室溫下孵育10 min；切片置于枸櫞酸鹽緩沖液中，95 ℃加熱10 min后室溫冷卻；用3%雙氧水孵育30 min，1% BSA孵育30 min，分別滴加兔抗Col1抗體（1∶300）、兔抗Col3抗體（1∶200）和兔抗α-SMA抗體（1∶200），37 ℃孵育1 h；然后在37 ℃下加入HRP標記的二抗孵育1 h，利用DAB檢測免疫反應活性。切片用蘇木素染色，利用光學顯微鏡進行拍照，采用Image J 13.0軟件測定染色陽性細胞吸光度（）值。

2.5 qRT-PCR檢測心肌組織miR-376b-5p表達

按照試劑盒說明書提取心肌組織總RNA并合成cDNA，進行qRT-PCR分析。引物序列：上游引物5’-GGGTGGATATTCCTTCTA-3’，下游引物5’-TTTGGCACTAGCACATT-3’；上游引物5’-ACGGCAAGTTCAACGGCACAG-3’，下游引物5’-GACGCCAGTAGACTCCACGACA-3’。

2.6 Western blotting檢測心肌組織TGF-β1/Smad和RhoA/ROCK信號通路相關蛋白表達

取各組大鼠心肌組織，加入RIPA裂解液提取蛋白，采用BCA蛋白測定試劑盒測定蛋白濃度。蛋白樣品經十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉至PVDF膜，加入一抗4 ℃孵育過夜后，孵育二抗，采用凝膠成像儀拍照。

2.7 統計學分析

3 結果

3.1 丹參酮IIA抑制AMI大鼠心肌組織中miR-376b-5p表達

如圖1所示，與假手術組比較，模型組大鼠心肌組織中mRNA表達顯著升高（＜0.05）；與模型組比較，丹參酮IIA組和miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組心肌組織中mRNA表達水平顯著降低（＜0.05），且miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組mRNA表達量接近假手術組，miR-376b-5p mimics＋丹參酮IIA組mRNA表達水平無顯著差異，表明丹參酮IIA能夠顯著抑制AMI大鼠心肌組織中mRNA表達。

3.2 丹參酮IIA抑制AMI大鼠血清中TNF-α、IL-1β水平和CK-MB、LDH活性

如圖2所示，與假手術組比較，模型組大鼠血清中TNF-α、IL-1β水平和CK-MB、LDH活性均顯著升高（＜0.05）；與模型組比較，丹參酮IIA組和miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組血清中TNF-α、IL-1β水平和CK-MB、LDH活性均顯著降低（＜0.05），且miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組接近假手術組，miR-376b-5p mimics＋丹參酮IIA組以上指標無顯著差異。

A-假手術組 B-模型組 C-丹參酮IIA組 D-miR-376b-5p mimics＋丹參酮IIA組 E-miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組 與假手術組比較：#P＜0.05；與模型組比較：*P＜0.05，下圖同

圖2 丹參酮IIA對AMI大鼠血清中IL-1β、TNF-α水平和CK-MB、LDH活力的影響(, n = 8)

3.3 丹參酮IIA改善AMI大鼠心肌組織形態變化

如圖3所示，HE染色可見假手術組大鼠心肌組織形態正常，心肌細胞排列規則、整齊、細胞間隙小；模型組大鼠心肌組織中心肌細胞排列紊亂，心肌纖維斷裂、細胞間隙大；丹參酮IIA組心肌組織的病理學變化得到了顯著改善；miR-376b-5p＋丹參酮IIA組心肌組織的病理改變較模型組并沒有明顯變化；miR-376b-5p抑制劑＋丹參酮IIA組心肌組織的病理改變接近假手術組，且較丹參酮IIA組的改善效果更佳，表明丹參酮IIA能夠抑制AMI大鼠心肌組織的病理改變。

Masson染色可見，假手術組大鼠心肌組織未見膠原纖維增多；模型組大鼠心肌組織有明顯的膠原纖維增生、沉積；丹參酮IIA組心肌組織膠原沉積明顯減少，顯示出丹參酮IIA對AMI大鼠心肌組織的保護作用。miR-376b-5p mimics＋丹參酮IIA組心肌組織膠原纖維沉積較模型組無明顯變化；miR-376b-5p抑制劑＋丹參酮IIA組心肌組織膠原纖維沉積接近假手術組，且較丹參酮IIA組的改善效果更佳，表明丹參酮IIA能夠抑制AMI大鼠心肌組織膠原纖維沉積形成。

3.4 丹參酮IIA降低AMI大鼠心肌組織Col1、Col3和α-SMA蛋白表達

如圖4所示，與假手術組比較，模型組大鼠心肌組織中Col1、Col3和α-SMA蛋白表達均顯著升高（＜0.05）；與模型組比較，丹參酮IIA組和miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組心肌組織中Col1、Col3和α-SMA蛋白表達均顯著降低（＜0.05），且miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組接近假手術組，miR-376b-5p mimics＋丹參酮IIA組以上蛋白表達無顯著差異。

圖3 丹參酮IIA對AMI大鼠心肌組織的病理改變和纖維化程度的影響 (×400)

圖4 丹參酮IIA對AMI大鼠心肌組織中Col1、Col3和α-SMA蛋白表達的影響(×400; , n = 6)

3.5 丹參酮IIA調控AMI大鼠心肌組織中TGF-β1/SMAD和RhoA/ROCK信號通路相關蛋白表達

如圖5所示，與假手術組比較，模型組大鼠心肌組織中TGF-β1、p-Smad2/3、RhoA、ROCK1、ROCK2和FN蛋白表達水平均顯著升高（＜0.05），Smad7蛋白表達水平顯著降低（＜0.05）；與模型組比較，丹參酮IIA組和miR-376b-5p inhibitor＋丹參酮IIA組心肌組織中TGF-β1、p-Smad2/3、RhoA、ROCK1、ROCK2和FN蛋白表達水平均顯著降低（＜0.05），Smad7蛋白表達水平顯著升高（＜0.05），miR-376b-5p mimics＋丹參酮IIA組以上蛋白表達無顯著差異。

圖5 丹參酮IIA對AMI大鼠心肌組織中TGF-β1/Smad和RhoA/ROCK相關蛋白表達的影響(, n = 6)

4 討論

AMI是一種嚴重的冠狀動脈心臟病，每年死亡人數約占全球死亡人數的1/3；而心室重構是AMI基本病理過程，會造成大量心肌細胞纖維化，導致心臟功能障礙，最終導致患者死亡[19-20]。研究表明，丹參酮IIA能夠可降低心肌細胞凋亡，逆轉AMI心肌細胞損傷[21-22]。本研究發現，丹參酮IIA能夠改善AMI模型大鼠心肌組織病理形態，減輕心肌組織纖維化程度的發生。心肌細胞凋亡和纖維化是心室重構的一種重要病理改變，表明丹參酮IIA可以改善心肌纖維化和心肌損傷進而抑制心室重構。然而，當同時給予AMI模型大鼠miR-376b-5p抑制劑時，AMI模型大鼠心肌組織表達顯著降低，心肌細胞凋亡和纖維化程度明顯改善，表明丹參酮IIA與miR-376b-5p抑制劑聯合應用能夠明顯改善AMI模型大鼠心肌組織病理性改變。

在炎癥反應中，IL-1β和TNF-α等炎性細胞因子是啟動級聯炎癥反應的關鍵因素。細胞釋放IL-1β和TNF-α能誘發心肌細胞活力下降和凋亡，加速心肌組織分泌大量膠原蛋白和心肌纖維化，損傷心肌功能，誘發CK-MB和LDH的過表達，CK-MB和LDH是心肌損傷的重要標志物，進而造成心室重構等[23-25]。研究表明，miRNA參與心室重構的發生發展過程。本課題組前期已經發現miR-376b-5p在逆轉老年自發性高血壓大鼠左室重構中發揮重要作用。本研究發現，丹參酮IIA能夠調節AMI模型大鼠心肌組織的表達，并能夠改善心肌組織細胞的形態，抑制AMI模型大鼠血清中IL-1β、TNF-α水平及CK-MB、LDH活力，減少心肌組織Col、Col3和α-SMA蛋白表達。然而，當同時給予AMI模型大鼠miR-376b-5p抑制劑時，AMI模型大鼠的炎癥因子、心肌損傷標志物、膠原蛋白和α-SMA蛋白表達同時降低，表明丹參酮IIA與miR-376b-5p抑制劑具有類似效果。

在心室重構的生理過程和病理過程中，TGF-β1/Smad信號通路都發揮著重要作用[26]。TGF-β1能夠促進組織纖維化，加速組織損傷。研究表明，Smad7是TGF-β1/SMAD信號通路的關鍵調節蛋白。TGF-β1的磷酸化能夠促進Smad2/3的磷酸化，進而抑制SMAD7參與心室重構[27-28]。同樣，RhoA/ROCK信號通路也是調控肌動蛋白骨架的組裝、增殖、分化等過程的關鍵途徑。研究表明，心肌損傷后RhoA蛋白能夠介導機體ROS的產生，加速機體心肌細胞損傷的惡性循環，并能夠誘導核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）的活化，進一步激活TGF-β1、IL-6等炎癥因子的分泌，又可加速TGF-β1/Smad信號通路的活化，加速惡性循環，導致大量炎癥因子堆積[29-30]。本研究顯示，丹參酮IIA能夠調節AMI大鼠心肌組織中TGF-β1/Smad和RhoA/ROCK 2條信號通路中相關蛋白的表達；當同時給予AMI模型大鼠miR-376b-5p抑制劑時，AMI模型大鼠心肌組織中TGF-β1/SMAD信號通路和RhoA/ROCK信號通路相關蛋白表達與僅給予丹參酮IIA結果一致。這表明丹參酮IIA改善AMI可能是通過調節的表達，進而發揮作用的。

綜上，本研究聯合丹參酮IIA和miR-376b-5p抑制劑治療發現，丹參酮IIA和miR-376b-5p抑制劑具有類似效果，能夠抑制miR-376b-5p表達、心肌細胞損傷和纖維化，并能夠同時抑制機體炎癥、TGF-β1/Smad和RhoA/ROCK信號通路活化，進而改善心室重構。丹參酮IIA可能通過調節，在改善心室重構過程中發揮重要作用。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] Reed G W, Rossi J E, Cannon C P. Acute myocardial infarction [J]., 2017, 389(10065): 197-210.

[1] Shah A H, Puri R S, Kalra A. Management of cardiogenic shock complicating acute myocardial infarction: A review [J]., 2019, 42(4): 484-493.

[2] 孔德慧. 北京地區寒潮—熱浪和極端濕度對急性心肌梗死住院的影響研究 [D]. 北京: 北京協和醫學院, 2020.

[3] Tamis-Holland J E, Jneid H, Reynolds H R,. Contemporary diagnosis and management of patients with myocardial infarction in the absence of obstructive coronary artery disease: A scientific statement from the American heart association [J]., 2019, 139(18): e891-e908.

[4] 孫佳藝, 張倩, 趙冬, 等. 北京市2007—2012年急性心肌梗死住院患者30天病死率變化趨勢分析 [J]. 中華流行病學雜志, 2018, 39(3): 5.

[5] Saliminejad K, Khorram Khorshid H R, Soleymani Fard S,. An overview of microRNAs: Biology, functions, therapeutics, and analysis methods [J]., 2019, 234(5): 5451-5465.

[6] Cui J, Zhou B Y, Ross S A,. Nutrition, microRNAs, and human health [J]., 2017, 8(1): 105-112.

[7] Li Q L, Xie J, Li R T,. Overexpression of microRNA-99a attenuates heart remodelling and improves cardiac performance after myocardial infarction [J]., 2014, 18(5): 919-928.

[8] Liu X X, Deng Y F, Xu Y F,. MicroRNA-223 protects neonatal rat cardiomyocytes and H9c2 cells from hypoxia-induced apoptosis and excessive autophagy via the Akt/mTOR pathway by targeting PARP-1 [J]., 2018, 118: 133-146.

[9] Pan Z Y, Guo Y P, Qi H P,. M3 subtype of muscarinic acetylcholine receptor promotes cardioprotection via the suppression of miR-376b-5p [J]., 2012, 7(3): e32571.

[10] Li J, Cai S X, He Q,. Intravenous miR-144 reduces left ventricular remodeling after myocardial infarction [J]., 2018, 113(5): 36.

[11] Fonseca F A, Izar M C. Role of inflammation in cardiac remodeling after acute myocardial infarction [J]., 2022, 13: 927163.

[12] Liu Y Y, Guan R C, Yan J Z,. Mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicle-shuttled microRNA-302d-3p represses inflammation and cardiac remodeling following acute myocardial infarction [J]., 2022, 15(4): 754-771.

[13] Jia S, Ma W D, Zhang C Y,. Tanshinone IIAattenuates high glucose induced human VSMC proliferation and migration through miR-21-5p-mediated tropomyosin 1 downregulation [J]., 2019, 677: 108154.

[14] Chen L Y, Wei L L, Yu Q Y,. Tanshinone IIAalleviates hypoxia/reoxygenation induced cardiomyocyte injury via lncRNA AK003290/miR-124-5p signaling [J]., 2020, 21(1): 20.

[15] 陳強, 陳麗珠, 郭曉華. 丹參酮通過抑制miR-376b-5p逆轉自發性高血壓大鼠左室重構 [J]. 中國老年學雜志, 2016, 36(22): 5549-5551.

[16] Hou J Q, Wang C, Ma D,. The cardioprotective and anxiolytic effects of Chaihujialonggumuli Granule on rats with anxiety after acute myocardial infarction is partly mediated by suppression of CXCR4/NF-κB/GSDMD pathway [J]., 2021, 133: 111015.

[17] Shi J Y, Hou J Q, Sun Y Z,. Chaihujialonggumulitang shows psycho-cardiology therapeutic effect on acute myocardial infarction with comorbid anxiety by the activation of Nrf2/HO-1 pathway and suppression of oxidative stress and apoptosis [J]., 2022, 153: 113437.

[18] Blas-Valdivia V, Moran-Dorantes D N, Rojas-Franco P,. C-Phycocyanin prevents acute myocardial infarction-induced oxidative stress, inflammation and cardiac damage [J]., 2022, 60(1): 755-763.

[19] Yan J K, Guo J, Wang Y Z,. Acute myocardial infarction therapy using calycosin and tanshinone co-loaded mitochondria targeted lipid-polymer hybrid nano-system: Preparation, characterization, and anti myocardial infarction activity assessment [J]., 2022, 155: 113650.

[20] Wang X Y, Wang Y, Jiang M,. Differential cardioprotective effects of salvianolic acid and tanshinone on acute myocardial infarction are mediated by unique signaling pathways [J]., 2011, 135(3): 662-671.

[21] 馮軍鵬, 梁梅芳, 王有恒, 等. 丹參酮IIA磺酸鈉聯合重組人腦利鈉肽治療心肌梗死的效果、心功能改善情況和預后 [J]. 藥物評價研究, 2019, 42(8): 1576-1579.

[22] Song W M, Dai B, Dai Y T. Influence of ginsenoside Rh2on cardiomyocyte pyroptosis in rats with acute myocardial infarction [J]., 2022, 2022: 5194523.

[23] Cheng X D, Zhang R Z, Wei S L,. Dexamethasone alleviates myocardial injury in a rat model of acute myocardial infarction supported by venoarterial extracorporeal membrane oxygenation [J]., 2022, 10: 900751.

[24] Khalifa A A, El Sokkary N H, Elblehi S S,. Potential cardioprotective effect of octreotide via NOXs mitigation, mitochondrial biogenesis and MAPK/ERK1/2/STAT3/NF-κB pathway attenuation in isoproterenol-induced myocardial infarction in rats [J]., 2022, 925: 174978.

[25] Wei X, Zheng Y, Zhang W L,. Ultrasound?targeted microbubble destruction?mediated galectin?7?siRNA promotes the homing of bone marrow mesenchymal stem cells to alleviate acute myocardial infarction in rats [J]., 2021, 47(2): 677-687.

[26] Zhao W Y, Zhang L Y, Wang Z C,. The compound losartan cream inhibits scar formation via TGF-β/Smad pathway [J]., 2022, 12(1): 14327.

[27] Yang S J, Feng X, Wang Y,. Protective effect of combined moxibustion and decoction therapy on bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats under nuclear factor-κB/transforming growth factor-β1/Smads signaling pathway [J]., 2022, 68(6): 48-55.

[28] Liang J Q, Zeng X W, Halifu Y,. Blocking RhoA/ROCK inhibits the pathogenesis ofby suppressing oxidative stress and apoptosis through TAK1/NOD2-mediated NF-κB pathway [J]., 2017, 436(1): 151-158.

[29] Yan J Y, Tang Y X, Zhong X,. ROCK inhibitor attenuates carbon blacks-induced pulmonary fibrosis in mice via Rho/ROCK/NF-kappa B pathway [J]., 2021, 36(7): 1476-1484.

Tanshinone ⅡA reduces secretion of inflammatory cytokines and alleviates myocardial injury in rats with acute myocardial infarction by inhibiting miR-376b-5p

HU Yue-hua1, CHEN Qiang2, XING Hai-sheng3, CHEN Li-zhu2, GUO Xiao-hua2, REN Xing-xing2

1. Baotou Medical College, Inner Mongolia University of Science and Technology, Baotou 014000, China 2. Department of Cardiovascular Medicine, the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College, Inner Mongolia University of Science and Technology, Baotou 014000, China 3. Department of Emergency, the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College, Inner Mongolia University of Science and Technology, Baotou 014000, China

To study the mechanism of tanshinone IIAin improving acute myocardial infarction (AMI) in rats.SD rats were randomly divided into sham operation group, model group, tanshinone IIA(5 mL/kg) group, miR-376b-5p mimics + tanshinone IIAgroup and miR-376b-5p inhibitor + tanshinone IIAgroup, with 10 rats in each group. Except sham operation group, AMI models were established by ligating the anterior descending coronary artery in rats in other groups. After 12 weeks of drug intervention, the expression ofgene in myocardial tissue of rats was detected by qRT-PCR. HE and Masson staining were used to observe the pathological changes and fibrosis degree of myocardial tissue. Levels of inflammatory factors in serum were detected by ELISA. The expressions of collagen type I (Col1), collagen type III (Col3) and α-smooth muscle actin (α-SMA) in myocardial tissue were detected by immunohistochemistry. Western blotting was used to detect transforming growth factor-β1 (TGF-β1)/Smad and Ras homolog gene family member A (RhoA)/Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase (ROCK) signal pathway related protein expressions in myocardial tissue.Compared with sham operation group, the expression ofin myocardial tissue and levels of IL-1β, TNF-α, activities of creatine kinase isoenzyme (CK-MB) and lactate dehydrogenase (LDH) were significantly increased (< 0.05), myocardial cells were arranged irregularly, with large gaps, and obvious collagen fiber deposition could be seen; The expressions of Col1, Col3, α-SMA, TGF-β1, phosphorylated Smad2/3 (p-Smad2/3), RhoA, ROCK1/2 and fibronectin (FN) in myocardial tissues were significantly increased (< 0.05), and Smad7 protein expression was significantly decreased (< 0.05). Compared with model group, tanshinone IIAgroup and miR-376b-5p inhibitor + tanshinone IIAgroup significantly improved the cellular morphology and fibrosis degree of myocardial tissue, levels of IL-1β, TNF-α and activities of CK-MB, LDH in serum were significantly decreased (< 0.05), Col1, Col3, α-SMA, TGF-β1, p-Smad2/3, RhoA, ROCK1/2 and FN protein expressions in myocardial tissues were significantly decreased (< 0.05), p-Smad7 protein expression was significantly increased (< 0.05).Tanshinone IIAmay protect the ventricular remodeling in AMI model rats by inhibiting the expression ofand the activation of TGF-β1/Smad and RhoA/ROCK signal pathways in myocardial tissue.

tanshinone IIA; acute myocardial infarction; miR-376b-5p; TGF-β1/Smad signaling pathways; RhoA/ROCK signaling pathways; inflammation response; ventricular remodeling

R285.5

A

0253 - 2670(2023)12 - 3887 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.12.015

2023-03-14

包頭醫學院科學研究基金資助項目（BYJJ-ZRQM202226）

胡月華（1993—），女，碩士研究生，研究方向為冠心病的基礎研究。E-mail: 1362147495@qq.com

通信作者：陳 強，碩士生導師，副主任醫師，主要從事心血管相關研究。E-mail: 619016248@qq.com

[責任編輯 李亞楠]