石菖蒲內(nèi)生真菌灰黃青霉Z005次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究

趙松峰，張 曉，袁永亮，張曉堅(jiān)

石菖蒲內(nèi)生真菌灰黃青霉Z005次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究

趙松峰，張 曉，袁永亮，張曉堅(jiān)*

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，河南 鄭州 450052

研究藥用植物石菖蒲內(nèi)生真菌灰黃青霉Z005的次級(jí)代謝產(chǎn)物。利用包括硅膠、ODS、Sephadex LH-20、半制備HPLC等色譜方法，對(duì)目標(biāo)菌株的大米固體發(fā)酵提取物進(jìn)行系統(tǒng)的分離純化，并結(jié)合理化常數(shù)與現(xiàn)代的譜學(xué)方法進(jìn)行化合物的結(jié)構(gòu)鑒定。從石菖蒲內(nèi)生真菌灰黃青霉Z005固體發(fā)酵產(chǎn)物中分離鑒定了1個(gè)新化合物和12個(gè)已知化合物。分別為灰黃青霉呋喃醇A（1）、chaetominine（2）、dehydrocyclopeptine（3）、1-methylcyclopenin（4）、4-(2-羥基丁炔氧基) 苯甲酸（5）、penipratynolene（6）、hypofuran B（7）、lobechine（8）、4-(2-甲酰基-5-甲氧基甲基-1-吡咯-1-基) 丁酸（9）、2-呋喃甲醇-(5→11)-1,3-環(huán)戊二烯-[5,4-]-1-鄰二氮雜萘（10）、-乙酰色胺（11）、1吲哚-3-基甲基氨基甲酸甲酯（12）和順式阿魏酸甲酯（13）?；尹S青霉Z005為首次從石菖蒲健康組織中分離獲得，化合物1為新的苯并呋喃類化合物，命名為灰黃青霉呋喃醇A（penicifuranol A）；化合物2～10和12～13均為首次從該種真菌中分離得到。

石菖蒲；內(nèi)生真菌；Z005；次級(jí)代謝產(chǎn)物；灰黃青霉呋喃醇A

植物內(nèi)生菌（endophyte）是一定階段或全部階段生活于健康植物的組織和器官內(nèi)部的真菌或細(xì)菌。幾千年來，由于科技水平的局限，對(duì)藥用植物的研究主要集中在化學(xué)成分、藥理作用、不良反應(yīng)、功效、性狀、產(chǎn)地等宏觀因素上，而忽略了植物內(nèi)環(huán)境這個(gè)微生態(tài)系統(tǒng)。自從人們發(fā)現(xiàn)了植物內(nèi)生菌以來，開辟了從微生物、植物內(nèi)環(huán)境等微觀視角重新審視影響藥用植物品質(zhì)的因素[1]。內(nèi)生菌與植物長期互利共生，可影響植物眾多的生理活動(dòng)和代謝過程，一方面分泌植物激素、生長因子等信號(hào)分子，促進(jìn)植物的生長發(fā)育，另一方面可調(diào)控植物活性次級(jí)代謝產(chǎn)物的含量積累和新結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生[2]。盡管藥用植物次級(jí)代謝產(chǎn)物具有廣闊的藥理活性和重要的生物功能，但天然產(chǎn)量低，無法滿足人們?nèi)找嬖鲩L的醫(yī)藥需求。通過挖掘藥用植物內(nèi)生真菌的化學(xué)結(jié)構(gòu)多樣性，并探究與宿主之間的化學(xué)成分關(guān)聯(lián)，對(duì)于開發(fā)新的藥用微生物資源具有重要的現(xiàn)實(shí)意義[3]。

石菖蒲Schott為天南星科（Araceae）菖蒲屬L.多年生草本植物，主要分布于我國長江以南各省區(qū)；其干燥根莖可入藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，味辛性溫，既能芳香化濕、理氣活血，也具有醒神益智、化痰開竅等功效[4]。本課題組前期對(duì)藥用植物石菖蒲的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行了研究[5]，為了進(jìn)一步挖掘其內(nèi)生真菌的化學(xué)多樣性并探究其與宿主的生態(tài)關(guān)聯(lián)性，本實(shí)驗(yàn)對(duì)分離自藥用植物石菖蒲的新鮮根莖的一株內(nèi)生真菌（Z005）的大米固體發(fā)酵物的化學(xué)成分進(jìn)行研究，共分離鑒定13個(gè)化合物，包括1個(gè)新化合物，命名為灰黃青霉呋喃醇A（penicifuranol A，1）；其余已知化合物分別為chaetominine（2）、dehydrocyclopeptine（3）、1-methyl- cyclopenin（4）、4-(2-羥基丁炔氧基) 苯甲酸 [4-(2- hydroxybutynoxy)benzoic acid，5]、penipratynolene（6）、hypofuran B（7）、lobechine（8）、4-(2-甲?；? 5-甲氧基甲基-1-吡咯-1-基) 丁酸 [4-(2-formyl-5- methoxymethyl-1-pyrrole-1yl)butanoic acid，9]、2-呋喃甲醇-(5→11)-1,3-環(huán)戊二烯-[5,4-]-1-鄰二氮雜萘 [2-furanmethanol-(5→11)-1,3-cyclopentadiene- [5,4-]-1-cinnoline，10]、-乙酰色胺（-acetyl- tryptamine，11）、1吲哚-3-基甲基氨基甲酸甲酯（methyl 1-indol-3-ylmethylcarbamate，12）和順式阿魏酸甲酯 [methyl ()-ferulic acid ester，13]?；尹S青霉Z005為首次從石菖蒲健康組織中分離獲得，化合物1為新的苯并呋喃類化合物，化合物2～10、12和13均為首次從該種真菌中分離得到。

1 儀器與材料

Bruker AM-400核磁共振儀（Bruker公司），LC3000型高效液相色譜儀（北京創(chuàng)新通恒科技有限公司），YMC-Pack ODS-A C18反相半制備柱（250 mm×9.4 mm，50 μm），API QSTAR Pulsar 1型質(zhì)譜儀，PE-341LC旋光儀（美國PerkinElmer公司），Cary 50型紫外可見分光儀（美國Varian公司）；柱色譜硅膠200～300目（青島海洋化工廠），Sephadex LH-20（Pharmacia Biotech產(chǎn)品，瑞典），ODS-AQ（50 μm，YMC產(chǎn)品），GF254高效硅膠薄層色譜板（煙臺(tái)化工研究所）；色譜純?cè)噭┯缮虾幖瘓F(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供，分析純?cè)噭┯缮虾?qiáng)順化學(xué)試劑有限公司提供。

2 發(fā)酵、提取與分離

石菖蒲植物于2018年9月采自河南省鄭州市，經(jīng)河南省鄭州市鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院中醫(yī)藥學(xué)部王娟主任藥師鑒定。所研究內(nèi)生真菌從石菖蒲新鮮根莖經(jīng)表面消毒后分離得到。ITS1-4序列分析與灰黃青霉（GenBank注冊(cè)號(hào)為OP214767）序列相似度為100%，結(jié)合進(jìn)一步的真菌形態(tài)學(xué)分析，目標(biāo)菌種被趙松峰博士鑒定為灰黃青霉Z005。藥用植物石菖蒲標(biāo)本和目標(biāo)菌株均保存于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部。

菌種接種于PDA培養(yǎng)基上，在26 ℃條件下培養(yǎng)1周，切碎后接種于高壓滅菌的5 kg大米培養(yǎng)基中（200 g大米加水180 mL），在26 ℃條件下靜置發(fā)酵培養(yǎng)35 d。在室溫條件下，發(fā)酵物經(jīng)醋酸乙酯浸提5次，減壓濃縮回收溶劑后得醋酸乙酯萃取總浸膏95 g?？偨嘟?jīng)200～300目硅膠柱色譜分離，二氯甲烷-甲醇（50∶1→0∶1）梯度洗脫后得到6個(gè)流分段（A～F）。流分段C（12 g）經(jīng)正相硅膠色譜柱（二氯甲烷-甲醇10∶1；石油醚-醋酸乙酯1∶1）、Sephadex LH–20（甲醇為洗脫劑），以及半制備HPLC（甲醇-水50∶50；乙腈-水45∶55）等色譜方法分離，得到化合物2（15.2 mg）、3（8.1 mg）、4（4.5 mg）、5（6.4 mg）和11（6.5 mg）。流分段D（15 g）經(jīng)過ODS RP-C18色譜柱（洗脫劑∶甲醇-水，20∶80→100∶0）、正相硅膠色譜柱（二氯甲烷-甲醇8∶1；石油醚-醋酸乙酯1∶1）、Sephadex LH–20（甲醇為洗脫劑），以及半制備反相HPLC（甲醇-水45∶55；乙腈-水40∶60）等，分離得到化合物1（4.3 mg）、6（3.6 mg）、7（8.0 mg）、8（5.2 mg）、9（3.9 mg）、10（5.5 mg）、12（7.7 mg）和13（10.2 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無色油狀物（甲醇）。紫外光譜顯示其在212和298 nm處有最大吸收。紅外光譜表明該化合物具有羥基（3400 cm?1）和苯環(huán)（1587和1441 cm?1）的吸收峰。HRESIMS譜給出準(zhǔn)分子離子峰/301.141 5（計(jì)算值為301.141 0），可以確定化合物的分子式為C16H22O4。1H-NMR（表1）顯示化合物1有4個(gè)烯質(zhì)子信號(hào)H7.06 (1H, d,= 7.6 Hz, H-4)、6.58 (1H, d,= 7.6 Hz, H-5)、6.67 (1H, d,= 11.4 Hz, H-6) 和5.98 (1H, dt,= 11.4, 7.0 Hz, H-7)、2個(gè)含氧亞甲基信號(hào)H4.43 (2H, brs, H2-9) 和4.06 (2H, d,= 7.0 Hz, H2-10)、1個(gè)含氧次甲基信號(hào)H4.63 (1H, dt,= 9.4, 8.6 Hz, H-2)、2個(gè)甲基信號(hào)H1.20 (3H, s, H3-12) 和1.34 (3H, s, H3-13) 等。13C-NMR（表1）表明化合物1共有16個(gè)碳信號(hào)。根據(jù)HMBC譜（圖1），觀察到H-6到C-5、C-5a和C-9a，OCH3到C-9，H-9到C-5a、C-9a和C-9b，H2-3到C-3a、C-4和C-9b，與H3-13到C-2、C-11和C-12的相關(guān)信號(hào)，以及1H-1H COSY譜（圖1），H-7與H-6和H2-10、H-4與H-5、以及H-2與H2-3的相關(guān)信號(hào)，表明化合物1為苯并呋喃類衍生物[6]。

化合物1的H-6與H-7之間的偶合常數(shù)為11.4 Hz（表1），表明H-6與H-7的雙鍵為構(gòu)型。在測試的ECD譜圖（圖2）中，化合物1在213 nm處顯示出很強(qiáng)的負(fù)Cotton效應(yīng)，與文獻(xiàn)中報(bào)道的苯并呋喃類似物asperfuranoid A[6]的在末端吸收處顯示的負(fù)Cotton效應(yīng)一致，表明化合物1的C-2位構(gòu)型為；因此，化合物1的平面結(jié)構(gòu)和絕對(duì)構(gòu)型得以確定，該化合物命名為灰黃青霉呋喃醇A。

表1 化合物1的1H-和13C-NMR波譜數(shù)據(jù)(400/100 MHz, CDCl3)

圖1 化合物1的化學(xué)結(jié)構(gòu)及主要HMBC和1H-1H COSY相關(guān)信號(hào)

圖2 化合物1的ECD譜圖

化合物2：無色晶體（甲醇），ESI-MS/: 425 [M＋Na]+，分子式為C22H18N4O4；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 8.28 (1H, s, H-24), 8.18 (1H, brd,= 7.8 Hz, H-19), 7.86 (1H, dt,= 7.8, 1.0 Hz, H-21), 7.69 (1H, brd,= 7.8 Hz, H-22), 7.58 (1H, t,= 7.8 Hz, H-20), 7.50 (1H, d,= 7.8 Hz, H-8), 7.49 (1H, d,= 7.8 Hz, H-5), 7.43 (1H, dd,= 7.8, 1.0 Hz, H-7), 7.25 (1H, dd,= 7.8, 1.0 Hz, H-6), 5.92 (1H, s, H-14), 4.61 (1H, t,= 6.8 Hz, H-11), 2.93 (1H, t,= 12.5 Hz, H-13b), 2.53 (1H, dd,= 12.5, 2.5 Hz, H-13a), 1.60 (3H, d,= 6.8 Hz, H3-12)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 172.5 (C-10), 165.9 (C-17), 160.5 (C-15), 147.9 (C-24), 147.2 (C-23), 139.2 (C-9), 137.2 (C-4), 135.2 (C-21), 130.4 (C-7), 127.8 (C-20), 127.7 (C-22), 126.9 (C-19), 126.0 (C-6), 125.4 (C-5), 121.6 (C-18), 115.0 (C-8), 83.0 (C-2), 76.8 (C-3), 60.1 (C-11), 50.9 (C-14), 38.6 (C-13), 14.5 (C-12)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[7]，故鑒定化合物2為chaetominine。

化合物3：無色晶體（甲醇），ESI-MS/: 301 [M＋Na]+，分子式為C17H14N2O2；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 8.02 (1H, dd,= 7.9, 1.6 Hz, H-6), 7.48 (1H, ddd,= 8.0, 7.3, 1.6 Hz, H-8), 7.39 (2H, m, H-3′, 5′), 7.36 (2H, m, H-2′, 6′), 7.35 (1H, m, H-4′), 7.06 (1H, dd,= 8.2, 1.1 Hz, H-9), 6.95 (1H, s, H-10), 3.20 (3H, s, NH3-4)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 171.7 (C-2), 166.9 (C-5), 135.7 (C-9a), 133.5 (C-3), 132.9 (C-8), 132.2 (C-1′), 131.6 (C-10), 131.5 (C-6), 130.0 (C-4′), 129.6 (C-2′, 6′), 129.2 (C-3′, 5′), 125.7 (C-5a), 125.2 (C-7), 120.6 (C-9), 36.2 (4-NCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[8]，故鑒定化合物3為dehydrocyclopeptine。

化合物4：無色油狀物（甲醇），ESI-MS/: 331 [M＋Na]+，分子式為C18H16N2O3；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.56 (1H, m, H-8), 7.30 (1H, m, H-4′), 7.22 (2H, m, H-3′, 5′), 7.18 (1H, m, H-6), 7.14 (1H, m, H-7), 7.06 (1H, dd,= 7.9, 1.6 Hz, H-9), 6.69 (2H, m, H-2′, 6′) , 4.18 (1H, s, H-10), 3.35 (3H, s, 1-NH3), 3.20 (3H, s, 4-NH3)；13C-NMR (400 MHz, CD3OD): 168.6 (C-2), 168.3 (C-5), 136.5 (C-5a), 134.0 (C-8), 132.1 (C-6), 132.1 (C-1′), 130.1 (C-4′), 129.1 (2C, C-2′, C-6′), 127.3 (2C, C-3′, C-5′), 126.1 (C-7), 122.3 (C-9), 71.7 (C-3), 66.0 (C-10), 49.8 (1-NCH3), 31.6 (4-NCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[9]，故鑒定化合物4為1-methylcyclopenin。

化合物5：無色油狀物（甲醇），ESI-MS/: 229 [M＋Na]+，分子式為C11H10O4；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.98 (2H, d,= 8.9 Hz, H-2, H-6), 7.03 (2H, d,= 8.9 Hz, H-3, H-5), 4.70 (1H, ddd,= 6.6, 4.2, 2.2 Hz, H-2′), 4.17 (1H, dd,= 9.8, 4.2 Hz, H-1′a), 4.11 (1H, dd,= 9.8, 7.1 Hz, H-1′b), 2.93 (1H, d,= 2.2 Hz, H-4′)；13C-NMR (400 MHz, CD3OD):169.7 (C-7), 163.9 (C-4), 132.8 (2C, C-2, C-6), 124.5 (C-1), 115.4 (2C, C-3, C-5), 82.9 (C-3′), 75.0 (C-4′), 72.9 (C-1′), 61.6 (C-2′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[10]，故鑒定化合物5為4-(2-羥基丁炔氧基) 苯甲酸。

化合物6：無色油狀物（甲醇），ESI-MS/: 243 [M＋Na]+，分子式為C12H12O4；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.90 (2H, d,= 8.9 Hz, H-2, H-6), 6.86 (2H, d,= 8.9 Hz, H-3, H-5), 4.69 (1H, m, H-2′), 4.10 (1H, dd,= 9.6, 3.7 Hz, H-1′a), 4.04 (1H, dd,= 9.6, 6.9 Hz, H-1′b), 3.79 (3H, s, 7-OCH3), 2.45 (1H, d,= 2.2 Hz, H-4′)；13C-NMR (400 MHz, CDCl3):166.8 (C-7), 162.0 (C-4), 131.8 (C-2, 6), 123.6 (C-1), 114.4 (C-3, 5), 80.9 (C-3′), 74.8 (C-4′), 71.5 (C-1′), 61.3 (C-2′), 52.1 (7-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[11]，故鑒定化合物6為penipratynolene。

化合物7：無色油狀物（甲醇），ESI-MS/: 267 [M＋Na]+，分子式為C14H12O4；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 9.60 (1H, s, H-14), 7.34 (1H, s, H-8), 7.02 (2H, d,= 8.7 Hz, H-2, H-6), 6.86 (2H, d,= 8.7 Hz, H-3, H-5), 6.33 (1H, d,= 3.5 Hz, H-11), 6.22 (1H, d,= 3.5 Hz, H-10), 4.47 (1H, s, H-13)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 195.2 (C-14), 159.6 (C-12), 159.1 (C-4), 151.9 (C-9), 140.0 (C-7), 137.9 (C-8), 131.6 (C-2, 6), 125.4 (C-1), 118.5 (C-10), 115.3 (C-3, 5), 111.3 (C-11), 57.5 (C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[12]，故鑒定化合物7為hypofuran B。

化合物8：無色油狀物（甲醇），ESI-MS/: 290 [M＋Na]+，分子式為C14H21NO4；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 9.44 (1H, s, H-1), 6.99 (1H, d,= 4.0 Hz, H-3), 6.27 (1H, d,= 4.0 Hz, H-4), 4.53 (2H, s, H2-1), 4.37 (2H, m, H2-1), 3.50 (2H, t,= 6.5 Hz, H2-1), 2.26 (2H, t,= 7.5 Hz, H2-3), 2.02 (2H, m, H2-2), 1.57 (2H, m, H2-2), 1.38 (2H, m, H2-3), 0.91 (3H, t,= 7.4 Hz, H-4)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 181.0 (C-1), 177.8 (C-4), 141.5 (C-5), 133.7 (C-2), 126.0 (C-3), 112.7 (C-4), 71.3 (C-1), 64.7 (C-1), 46.1 (C-1), 33.3 (C-2), 32.8 (C-3), 28.2 (C-2), 20.4 (C-3), 14.2 (C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[13]，故鑒定化合物8為lobechine。

化合物9：無色油狀物（甲醇），ESI-MS/: 248 [M＋Na]+，分子式為C11H15NO4；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 9.45 (1H, s, H-1), 6.99 (1H, d,= 4.0 Hz, H-3), 6.29 (1H, d,= 4.0 Hz, H-4), 4.50 (2H, s, H2-1), 4.36 (2H, m, H2-1), 3.36 (3H, s, 1-OCH3), 2.26 (2H, t,= 7.4 Hz, H2-3), 2.00 (2H, m, H2-2)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 181.1 (C-1), 177.9 (C-4), 141.0 (C-5), 133.8 (C-2), 125.9 (C-3), 112.9 (C-4), 66.3 (C-1), 58.2 (1-OCH3), 46.1 (C-1), 33.3 (C-3), 28.3 (C-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[14]，故鑒定化合物9為4-(2-甲?；?5-甲氧基甲基-1-吡咯-1-基) 丁酸。

化合物10：無色油狀物（甲醇），ESI-MS/: 287 [M＋Na]+，分子式為C16H12N2O2；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 8.29 (1H, d,= 5.3 Hz, H-9), 8.18 (1H, d,= 7.9 Hz, H-5), 8.01 (1H, d,= 5.3 Hz, H-10), 7.71 (1H, d,= 7.9 Hz, H-8), 7.59 (1H, ddd,= 8.3, 7.1, 1.2 Hz, H-7), 7.29 (1H, ddd,= 8.1, 7.1, 1.0 Hz, H-6), 7.22 (1H, d,= 3.4 Hz, H-4), 6.59 (1H, d,= 3.4 Hz, H-3), 4.76 (2H, s, H2-1")；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 157.1 (C-2), 154.3 (C-5), 143.0 (C-8a), 138.6 (C-9), 134.4 (C-11), 132.5 (C-3), 132.1 (C-4), 129.9 (C-7), 122.5 (C-5), 122.1 (C-4a), 121.1 (C-6), 114.9 (C-10), 113.2 (C-8), 111.0 (C-3), 110.9 (C-4), 57.5 (C-1")。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[15]，故鑒定化合物10為2-呋喃甲醇-(5→11)- 1,3-環(huán)戊二烯-[5,4-]-1-鄰二氮雜萘。

化合物11：無色油狀物（甲醇），ESI-MS/: 225 [M＋Na]+，分子式為C12H14N2O；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.55 (1H, dt,= 7.9, 1.0 Hz, H-4), 7.32 (1H, dt,= 8.1, 1.0 Hz, H-7), 7.09 (1H, m, H-6), 7.06 (1H, d,= 1.1 Hz, H-2), 7.00 (1H, ddd,= 8.0, 7.0, 1.1 Hz, H-5), 3.46 (2H, d,= 7.3 Hz, H2-9), 2.93 (2H, m, H2-8), 1.91 (3H, s, H3-12)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 173.2 (C-11), 138.2 (C-7a), 128.8 (C-3a), 123.3 (C-2), 122.3 (C-6), 119.6 (C-5), 119.2 (C-4), 113.3 (C-3), 112.2 (C-7), 41.6 (C-9), 26.2 (C-8), 22.6 (C-12)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[16]，故鑒定化合物11為-acetyltryptamine。

化合物12：無色油狀物（甲醇），ESI-MS/: 211 [M＋Na]+，分子式為C11H12N2O；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.51 (1H, dt,= 7.9, 1.0 Hz, H-6), 7.34 (1H, dt,= 8.2, 1.0 Hz, H-5), 7.15 (1H, s, H-2), 7.08 (1H, d,= 1.2 Hz, H-4), 6.99 (1H, d,= 1.0 Hz, H-7), 3.77 (2H, d,= 0.9 Hz, H2-8), 3.68 (3H, s, 10-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 174.8 (C-10), 138.0 (C-7a), 128.6 (C-3a), 124.6 (C-2), 122.5 (C-6), 119.9 (C-5), 119.3 (C-4), 112.2 (C-3), 108.5 (C-7), 52.3.6 (10-OCH3), 31.9 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[17]，故鑒定化合物12為1吲哚-3-基甲基氨基甲酸甲酯。

化合物13：無色油狀物（甲醇），ESI-MS/: 231 [M＋Na]+，分子式為C11H12O4；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.79 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 7.10 (1H, dd,= 8.3, 2.0 Hz, H-6), 6.84 (1H, d,= 12.9 Hz, H-7), 6.76 (1H, d,= 8.2 Hz, H-5), 5.77 (1H, d,= 12.9 Hz, H-8), 3.87 (3H, s, 3-OCH3), 3.71 (3H, s, 10-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 168.7 (C-9), 149.6 (C-4), 148.3 (C-3), 145.4 (C-7), 128.0 (C-1), 126.8 (C-6), 116.1 (C-8), 115.7 (C-5), 114.9 (C-2), 56.3 (3-OCH3), 51.7 (9-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[18]，故鑒定化合物13為順式阿魏酸甲酯。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)綜合利用各種色譜分離技術(shù)對(duì)藥用植物石菖蒲內(nèi)生真菌Z005的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，共得到13個(gè)化合物，并運(yùn)用譜學(xué)技術(shù)鑒定了它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)，包括8個(gè)生物堿和5聚酮衍生物，與前期對(duì)石菖蒲的物質(zhì)基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)的木脂素類、苯丙烷類、倍半萜類等化合物的結(jié)構(gòu)類型存在較大的差異，表明了藥用植物內(nèi)生真菌具有豐富的化學(xué)多樣性，本實(shí)驗(yàn)中灰黃青霉Z005為首次從石菖蒲健康組織中分離獲得，化合物1為新的苯并呋喃類衍生物。另外，除了化合物11外，其余化合物均為首次從該種真菌中分離得到，該研究為藥用微生物新資源的挖掘和中藥石菖蒲的進(jìn)一步開發(fā)利用提供了重要的依據(jù)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Secondary metabolites ofendophytic fungusZ005

ZHAO Song-feng, ZHANG Xiao, YUAN Yong-liang, ZHANG Xiao-jian

Department of Pharmacy, the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China

To study the secondary metabolites of an endophytic fungusZ005 isolated from the medicinal plant.Various column chromatography methods, including silica gel, ODS, Sephadex LH 20, and semipreparative HPLC were applied to isolate and purify compounds from the solid rice fermentation extract ofZ005, and their chemical structures were elucidated by physical chemical constants and modern spectroscopy techniques.One new compound and 12 known compounds were isolated and identified from the solid fermentation products of endophytic fungusZ005, and their structures were identified as penicifuranol A (1)，chaetominine (2), dehydrocyclopeptine (3), 1-methylcyclopenin (4), 4-(2-hydroxybutynoxy)benzoic acid (5), penipratynolene (6), hypofuran B (7), lobechine (8), 4-(2-formyl-5-methoxymethyl-1-pyrrole-1-yl)butanoic acid (9), 2-furanmethanol- (5→11)- 1,3-cyclopentadiene-[5,4-]-1-cinnoline (10),-acetyltryptamine (11), methyl 1-indol-3-ylmethylcarbamate (12), and methyl ()-ferulic acid ester (13), respectively.The endophytic fungusZ005 was firstly gained from the healthy tissue of, and compound 1 was a new benzofuran compound, and compounds 2—10 and 12—13 are isolated from fungusZ005 for the first time.

Schott; endophytic fungus;Z005; secondary metabolites; penicifuranol A

R284.1

A

0253 - 2670(2023)10 - 3054 - 06

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.10.002

2023-03-02

河南省科技廳科技攻關(guān)項(xiàng)目（172102310430）

趙松峰，男，博士，研究方向?yàn)樗幬锘瘜W(xué)。E-mail: zhaosongfeng0821@126.com

張曉堅(jiān)，男，主任藥師，研究方向?yàn)樘烊凰幬锘瘜W(xué)。Tel: (0371)66969642 E-mail: Zhxj0524@sina.com

[責(zé)任編輯 王文倩]