包裝飲用水銅綠假單胞菌不合格問題特點及原因分析

◎ 吳小勇，毋 杉，李小鵬，陶桂松，王啟明

（咸陽市食品藥品檢驗檢測中心，陜西 咸陽 712000）

銅綠假單胞菌，俗稱綠膿桿菌，是假單胞菌屬中的一種常見的人和動物條件性致病菌，也是正常人的皮膚、呼吸道和腸道、粘膜上的常駐菌，可以引起包括皮膚、眼睛、外耳道、鼻部、口腔、尿路、肺部、骨關節等各種感染[1]。銅綠假單胞菌在自然界分布廣泛，主要存在于潮濕的環境中，極易污染地表滲水。隨著飲水安全越來越受到人們的關注，國內外關于包裝飲用水受銅綠假單胞菌污染的報道也日漸增多。國家標準《食品安全國家標準 包裝飲用水》GB 19298-2014[2]增加了銅綠假單胞菌指標，并且要求同一批次的5 份檢測樣品中均不能檢出(CFU/250 mL)，否則該批包裝飲用水則被判定為不合格。本次對檢出的銅綠假單胞菌相關問題進行研究，重點分析包裝飲用水監督抽檢數據的規律特點，并結合實地調研情況，進一步分析包裝飲用水產生銅綠假單胞菌不合格問題的主要原因，提出相應對策和建議，為提升全省包裝飲用水質量安全水平提供科研和技術支撐，更好地保障人民群眾飲水安全和身體健康。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

此次分析的樣品數據來源2021 年咸陽市食品藥品檢驗檢測中心在陜西省范圍內開展的277 批次包裝飲用水監督抽檢數據，由專業抽樣人員隨機抽取樣品，抽樣地區包括西安市、寶雞市、咸陽市、渭南市、漢中市、商洛市、寶雞市、榆林市、延安市、楊凌示范區。抽樣環節包括生產環節和流通環節。樣品包裝類型包括桶裝飲用水和瓶裝飲用水。樣品分類包括其他飲用水和礦泉水。

1.2 試劑耗材

假單胞菌CN 選擇性培養基平板（北京陸橋，貨號：PB034）；營養瓊脂（北京陸橋，貨號：CM807）；綠膿菌素測定培養基（北京陸橋，貨號：CM707）；乙酰胺肉湯（北京路橋，貨號：M155）；鈉氏試劑（北京陸橋，貨號：P-105）；金氏B 培養基（北京陸橋，貨號：CM1019）；氧化酶試紙（ 北京陸橋， 貨號：M050）； 無菌濾膜47 mm×0.45 μm( 廣東環凱， 貨號：20571102）。

以上試劑均符合《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 培養基和試劑的質量要求》GB 4789.28-2013[3]，均在有效期內使用。

1.3 主要儀器

不銹鋼多聯過濾系統MFS-6A-250（廣東環凱微生物科技有限公司），生化培養箱SPX-250B Ⅲ（天津泰斯特儀器有限公司），潔凈工作臺SWCJ-2FD（蘇州安泰空氣技術有限公司），生物安全柜BSC-1300 ⅡA2（蘇州安泰空氣技術有限公司），立式壓力蒸汽滅菌器LDZM-80KCS-Ⅱ（上海申安醫療器械廠），全自動微生物鑒定及藥敏分析系統VITEK 2 Compact（法國梅里埃）。

以上設備均符合檢定校準要求。

1.4 標準菌株

陽性對照：CICC21636 銅綠假單胞菌；陰性對照：ATCC13525 熒光假單胞菌。

以上菌株來源可追溯，均為F3 代工作菌株。

1.5 方法

在100 級潔凈工作臺上進行操作，將250 mL水樣通過孔徑0.45 μm 的濾膜過濾，并將濾膜移至CN 瓊脂培養基上，倒置于36 ℃±1 ℃生化培養箱中培養48 h，在培養20 ～24 h 和40 ～48 h后觀察濾膜上菌落的生長情況，并對可疑菌落進行計數，包括藍/ 綠色菌落、產熒光（非藍/ 綠色）菌落、紅褐色菌落。挑取2 ～3 個藍/ 綠色菌落，在純化后做綠膿菌素測定實驗，若綠膿菌素測定實驗結果顯示為陽性，則判斷為銅綠假單胞菌陽性。挑取產熒光（非藍/ 綠色）菌落純化后至乙酰胺肉湯中，若乙酰胺肉湯產胺，則判定為銅綠假單胞菌陽性。挑取純化后的紅褐色菌落進行氧化酶實驗，若氧化酶實驗結果呈陽性，則接種至金氏B 培養基于36 ℃±1 ℃生化培養箱中培養1 ～5 d，每天檢查是否產生熒光性，將5 d 內產生熒光的記錄為陽性。最后，對所有判定為陽性的菌落進行計算計數。

1.6 判定

按照《食品安全國家標準 包裝飲用水》GB19298-2014 中的規定，每250 mL 水樣中不得檢出銅綠假單胞菌，即n=5,c=0,m=0。

2 結果

監督抽檢共277 批次，其中55 批次為瓶裝水，均未檢出銅綠假單胞菌，檢出率為0%；222批次為桶裝水，檢出銅綠假單胞菌37 批次，檢出率為16.7%（表1）。

表1 銅綠假單胞菌檢出結果表

結果顯示，在同一批次5 份檢測樣品中，均檢出銅綠假單胞菌的僅有3 批次，占37 批次不合格樣品的8.1%；其中4 份樣品檢出銅綠假單胞菌的有3 批次，占比8.1%；其中3 份樣品檢出銅綠假單胞菌的有6 批次，占比16.2%；其中2 份樣品檢出銅綠假單胞菌的有10 批次，占比27.0%；僅有1 份樣品檢出銅綠假單胞菌的有15 批次，占比40.5%。

3 分析與調查

3.1 實驗結果分析

通過實驗結果分析可知，桶裝水銅綠假單胞菌檢出率明顯高于瓶裝水，且同一批次桶裝水5 份樣品均檢出銅綠假單胞菌的比率較低，表明銅綠假單胞菌污染水體具有偶發性。結合生產工藝分析可知，檢出銅綠假單胞菌可能與包裝容器受到污染有關，此結論與馬群飛等[4]的研究吻合。一方面，所有檢出銅綠假單胞菌的樣品均為桶裝水，桶裝水的包裝容器存在重復利用的情況，即使用結束后回收舊桶，通過清洗消毒等工序后重復使用，導致水桶來源較雜、報廢率低，部分桶超期服役，這對后期桶的消毒以及桶蓋密封性都帶來很大的挑戰[5]。另一方面，空桶的清洗消毒是生產環節中很重要的一個步驟，清洗消毒過于簡單易導致清洗消毒達不到效果。瓶蓋的消毒同樣重要，若不消毒或消毒不徹底就投入使用，也可能受到銅綠假單胞菌污染。

桶裝水5 份樣品中有91.9%的樣品存在銅綠假單胞菌分布不均勻的情況，即5 桶水中有一部分，甚至只有1 桶水被銅綠假單胞菌污染，表1 中5 桶水中均檢出銅綠假單胞菌的樣品僅有3 例，結合實地調研分析，部分周轉桶清洗不到位是導致成品水被銅綠假單胞菌污染的主要因素。瓶裝水的包裝容器是一次性消費使用的，不存在重復利用的情況，這對于控制微生物的污染有很大的幫助。

3.2 企業調研

3.2.1 包裝飲用水水源調查

重點對包裝飲用水生產企業所用水源的質量狀況和特點進行研究分析，銅綠假單胞菌在自然界中廣泛存在，主要在淡水和土壤中最為常見。水源水易帶入，過濾除菌設備的濾膜孔徑至少應達到0.45μm，企業若長期對過濾裝置不進行清洗消毒或者不定期更換，會導致成品水中帶入銅綠假單胞菌。

3.2.2 開展灌裝間空氣清潔度檢測

包裝飲用水的生產環境較為濕潤，有利于銅綠假單胞菌的生長繁殖，而且很難被徹底清除。部分小企業灌裝車間的空氣清潔度達不到要求（靜態時應達到10 000 級且灌裝局部空氣清潔度應達到100 級，或者灌裝車間的空氣清潔度整體應達到1 000 級）。

3.2.3 生產工藝關鍵控制點調查

通過實地調研并進行評價性檢測，深入了解包裝飲用水生產企業的生產工藝現狀，重點針對蓄水池、管道、灌裝線等各種設備的清洗消毒關鍵技術進行分析研究，我們了解到目前水廠對包裝飲用水采取的殺菌方式主要有UV 消毒、臭氧消毒、消毒劑（二氧化氯、次氯酸、食品級改性過氧化氫和過氧乙酸等）消毒。部分企業質量管理不規范，管道、包材的清洗、消毒不嚴格，水處理設備維護保養不到位，容易導致凈化水微生物滋生。

3.2.4 包裝材料污染因素

水桶由于在運輸、銷售以及清洗過程中會產生一定的磨損，存在細小的縫隙，給清洗和消毒過程造成了巨大的干擾，部分水企在回收舊桶時缺乏相應規程，通常為降低成本，使一些水桶超期服役，不易清洗。我們對歷年來有過銅綠假單胞菌檢出的企業進行回收桶檢測，隨機抽取10 家，每家隨機抽取5 個經過清洗消毒后的空桶，密封后送往實驗室使用濾膜法檢測，仍有7 家企業每5 桶檢出銅綠假單胞菌及其他細菌。

3.2.5 部分企業對殺菌控制不嚴格

對臭氧濃度、紫外線強度、過濾除菌濾料的控制還沒有形成有效的管理模式。一些企業為了減少產生溴酸鹽，對臭氧殺菌工藝的水流速、臭氧流量、臭氧濃度設置偏低，不能保證有效殺菌。同時，缺乏對滅菌效果的評價和管道、容器、設備清洗消毒效果、消毒劑殘留的驗證手段。

3.2.6 生產人員衛生意識淡薄

未按照相關消毒要求進入生產車間，不嚴格按照程序操作等都可能導致銅綠假單胞菌被帶入成品水中。況且，部分小企業不具備出廠檢驗能力，通常灌裝后直接銷售。

4 結論

銅綠假單胞菌是食源性和水源性致病菌,是衡量飲用水衛生狀況的重要指標。包裝飲用水在各個環節都有被污染的可能性，如生產源水污染、設備未徹底消毒、灌裝車間空氣潔凈度未達到要求、反滲透膜長期不更換、包材污染、生產人員二次污染等都會引起銅綠假單胞菌超標。

綜合以上，提出以下幾方面建議：①加強水源的監管，定期對水源水進行監測。②加強水處理方式，建議在濾膜及反滲透系統前增加紫外線殺菌裝置，可以一定程度上控制銅綠假單胞菌的污染。③制定包裝水桶回收規程，及時淘汰報廢桶，并且強化包材清洗流程，定期監測水桶及瓶蓋消毒效果。④建議企業研發使用一次性水桶或其他包裝材料，從根源杜絕包裝材料受到銅綠假單胞菌污染。⑤對水企從業人員進行培訓，對檢驗員應定期培訓考核。⑥對空氣潔凈度定期監測，避免環境導致銅綠假單胞菌的污染。