癌相關成纖維細胞外泌體通過抑制鐵死亡促進前列癌惡性侵襲

趙軍, 毛亮, 沈繼杰, 孫宏斌

鐵死亡是一種鐵依賴性細胞死亡模式,特征改變是脂質過氧化導致活性氧(reactive oxygen species,ROS)大量累積及谷胱甘肽過氧化物酶4(GPX4)的失活,機制特征不同于細胞凋亡等其他細胞死亡方式。GPX4是鐵死亡關鍵調控蛋白[1], 在前列腺癌中呈高表達[2]。下調其表達可引發腫瘤細胞鐵死亡,是腫瘤治療中區別于傳統療法的新策略,已引起臨床極大關注。多個研究發現microRNA-15a、microRNA-214-3p等小分子mRNA抑制物參與調控前列腺癌鐵死亡[3-4]。癌相關成纖維細胞(CAFs)是腫瘤微環境中基質細胞的主要成分,可通過傳遞外泌體miR-522抑制鐵死亡促進胃癌化療耐藥[5]。在前列腺癌中,CAFs與GPX4高表達及與鐵死亡的關聯性還未可知。課題組前期已經報道CAFs在體外和體內實驗條件下可顯著促進前列腺癌細胞增值和侵襲[6],本研究擬觀察CAFs來源的外泌體(CAFs-exo)是否通過調控前列腺癌鐵死亡促發前列腺癌細胞增殖和遷移。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 細胞 人前列腺癌細胞株22rv1和PC-3 購自中國科學院細胞庫。前列腺癌新鮮組織取自南京市第一醫院泌尿外科行前列腺癌根治術患者,由病理科醫生確診取材,獲得富含腫瘤區域的癌組織及癌旁組織,本研究經倫理委員會批準,獲患者知情同意。

1.1.2 主要試劑及儀器 1640培養基、胎牛血清、胰蛋白酶購均自美國Gibco公司;無外泌體血清購自美國System Bioscience公司;腫瘤組織解離液購自德國Miltenyi公司;Transwell小室、Mgtrigel 基質膠購自美國Corning公司;α-SMA、FSP-1、Vimentin、E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、Actin、NFR2、ACSL4、GPX4、GAPDH一抗購自中國Proteintech公司,FAP一抗購自美國Cell Signaling Technology公司,IgG二抗購自中國Biosharp公司;鐵死亡誘……