華南虎源乳酸菌的分離篩選及體外益生特性

杜雪晴，陳武，李婉萍，邵慧婷，周妞，薩家祺，王晨，吳亞江，翟俊瓊，呂夢(mèng)娜，單芬

（1.廣州動(dòng)物園，廣州市野生動(dòng)物研究中心，廣州市生態(tài)園林科技協(xié)同創(chuàng)新中心，廣州，510070；2.廣州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣州，510006）

華南虎（Panthera tigris amoyensis）是我國(guó)特有的虎亞種，數(shù)量稀少，國(guó)家一級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物，目前華南虎在野外已接近滅絕［1?2］。在圈養(yǎng)華南虎的飼養(yǎng)管理中，由于近親繁殖、運(yùn)動(dòng)量少及食物種類單一等原因，造成華南虎出現(xiàn)偏食、消化不良和胃腸炎等消化系統(tǒng)問題［2］。對(duì)于大腸埃希氏桿菌（Escherichia coli）、沙門氏菌（Salmonellasp.）和金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）等致病菌導(dǎo)致的華南虎胃腸道疾病，獸醫(yī)一般采用抗生素治療，但抗生 素的使用，會(huì)導(dǎo)致幼虎腸道菌群失調(diào)，代謝紊亂，發(fā)生胃腸炎、便秘、腹瀉和死亡等情況［1?2］，抗生素的使用還會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性及生態(tài)環(huán)境問題。據(jù)報(bào)道，在幼齡東北虎（Panthera tigris altaica）奶粉中添加乳酸菌素類或雙歧桿菌的活菌制劑，可調(diào)節(jié)胃腸道菌群、維持菌群的生態(tài)平衡，有效防治胃腸道疾病［3］。

乳酸菌作為益生菌被廣泛用于人和動(dòng)物的飲食中，提高腸道消化吸收及機(jī)體非特異性免疫力。乳酸菌具有廣譜、高效、穩(wěn)定和安全的特點(diǎn)，通過(guò)產(chǎn)生有機(jī)酸、過(guò)氧化氫和細(xì)菌素等抑菌物質(zhì)抑制病原菌的生長(zhǎng)，加強(qiáng)宿主機(jī)體腸道微生物的屏障作用，從而提高動(dòng)物的健康水平和抗病力［4?6］。目前關(guān)于野生動(dòng)物益生菌的研究有大熊貓（Ailuropoda melano?leuca）［7］、川金絲猴（Rhinopithecus roxellana）［8］和歐洲獾（Meles meles）等［9］，但市場(chǎng)上暫無(wú)專門針對(duì)野生動(dòng)物的益生菌產(chǎn)品［5］，相關(guān)產(chǎn)品主要集中在人和畜禽，乳酸菌制劑質(zhì)量參差不齊，同源的乳酸菌對(duì)宿主發(fā)揮的作用最佳［10］。因此，本研究擬從健康華南虎糞便中分離篩選乳酸菌，對(duì)其分類鑒定，評(píng)價(jià)抑菌能力、耐酸和耐膽鹽性能、溶血性和抗生素耐藥性，以期篩選出具有潛在益生特性的乳酸菌，為開發(fā)適用于華南虎的益生菌制劑提供備選菌種。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

采集廣州動(dòng)物園圈養(yǎng)健康華南虎的新鮮糞便 23 份，取1 g 新鮮樣品放入9 mL 滅菌生理鹽水中，振蕩搖勻后，取1 mL注入含MRS液體培養(yǎng)基的厭氧瓶?jī)?nèi)，37 ℃培養(yǎng)36 h。

1.2 材料與試劑

MRS 培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（NA）和哥倫比亞血瓊脂平板均購(gòu)自廣東環(huán)凱生物科技有限公司；2.5 L 圓底立式厭氧袋、2.5 L 厭氧產(chǎn)氣包、牛津杯、牛膽鹽、鹽酸和PBS 均購(gòu)自廣州翔博生物科技有限公司；細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒、2×TaqPCR Mas?ter Mix 均采購(gòu)自廣州維寧生物科技有限公司；標(biāo)準(zhǔn)藥敏紙片由溫州市康泰生物科技有限公司生產(chǎn)。細(xì)菌16S rRNA 基因引物合成和測(cè)序均由蘇州金唯智生物科技有限公司完成。

大腸埃希氏桿菌（GDMCC 1.180）、金黃色葡萄球菌（GDMCC 1.1220）和沙門氏菌（GDMCC 1.237）由廣東省微生物菌種保藏中心（GDMCC）提供，遲鈍愛德華氏菌（Edwardsiella tarda）從廣州動(dòng)物園鴻雁（Anser cygnoides）組織中分離。

1.3 儀器與設(shè)備

超凈工作臺(tái)SW-CJ-1F 型，蘇州凈化設(shè)備有限公司；HVE-50高壓蒸汽滅菌器，日本Hirayama公司；精密型pH 計(jì)，上海精密儀器有限公司；LRH-250 生化培養(yǎng)箱，上海浦東榮豐科學(xué)儀器有限公司；3-18KS臺(tái)式冷凍離心機(jī)，德國(guó)Sigma 公司；PCR 儀，美國(guó)Bio-Rad 公司；電泳儀，北京六一生物科技有限公司；凝膠成像系統(tǒng)，美國(guó)Bio-Rad公司。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 乳酸菌分離純化

將裝有樣品的厭氧瓶培養(yǎng)36 h后得到的懸濁液按10 倍梯度稀釋，選取稀釋梯度為1×10-5、1×10-6和1×10-73種稀釋液涂布在改良MRS 固體培養(yǎng)基（含1%的CaCO3）上，37 ℃恒溫厭氧培養(yǎng)48 h。初步觀察涂布平板的菌落形態(tài)特征，選擇生長(zhǎng)有50～150 個(gè)單菌落的平板。再挑取涂布平板有溶鈣圈且外表比較光滑，顏色、大小、邊緣、表面隆起度和透明度等不同的單個(gè)菌落，在MRS 固體培養(yǎng)基上多次劃線分離，直至獲得菌落形態(tài)特征一致的純培養(yǎng)單菌。將分離純化出來(lái)的菌株用含體積分?jǐn)?shù)25%的甘油于?80 ℃冷凍保存。

1.4.2 乳酸菌鑒定

用DNA 試劑盒提取基因組，PCR 擴(kuò)增引物選用細(xì)菌16S rRNA 基因通用引物（27F：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′；1492R：5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′）［11］進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增體系（25.0 μL）：菌液模板1.0 μL，上、下游引物各0.5 μL，TaqPCR Master Mix 12.5 μL，去離子水10.5 μL。分別取PCR 產(chǎn)物5 μL 經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳，初步檢測(cè)PCR 擴(kuò)增是否合乎測(cè)序要求，符合要求的PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物送蘇州金唯智生物科技有限公司測(cè)序。

1.4.3 具有抑菌活性乳酸菌菌株的篩選

采用牛津杯法進(jìn)行菌株代謝產(chǎn)物的抑菌性試驗(yàn)［10］，選擇大腸埃希氏桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和遲鈍愛德華氏菌4種致病菌作為指示菌。將活化后的菌液離心（12 000 r/min，5 min）得到菌 株的發(fā)酵上清。將4種指示菌培養(yǎng)物活化并稀釋至1×108cfu/mL后，按1%的添加量分別混合于NA瓊脂培養(yǎng)基中、傾注在預(yù)先豎立的3 個(gè)牛津杯的平板中。冷卻后拔掉牛津杯，向3 個(gè)牛津杯孔中加入200 μL待測(cè)菌株的發(fā)酵上清液，37 ℃培養(yǎng)24 h，測(cè)抑菌圈直徑，每組重復(fù)3次，挑選平均值大于15 mm的菌株。

1.4.4 菌株耐酸和耐膽鹽性能測(cè)定

參考程王琨等［5］的試驗(yàn)方法進(jìn)行耐酸和耐膽鹽性能測(cè)定。將乳酸菌活化2 代后，取1 mL 菌液離心棄上清，分別加入pH=2.5 和pH=3.0 的鹽酸溶液 1 mL，用PBS 作為對(duì)照，重懸后于37 ℃中培養(yǎng)2 h。取處理后的菌液200 μL 分別加入5 mL MRS 液體培養(yǎng)基中，37 ℃厭氧培養(yǎng)16 h，用酶標(biāo)儀測(cè)定各組菌株的OD600值。

將乳酸菌活化2代后，取1 mL菌液離心棄上清，分別加入濃度為0.1%、0.2%和0.3%的膽鹽溶液 1 mL，用PBS 作為對(duì)照，重懸后于37 ℃中培養(yǎng)2 h。取處理后的菌液200 μL 分別加入5 mL MRS 液體培養(yǎng)基中，于37 ℃厭氧培養(yǎng)16 h，用酶標(biāo)儀測(cè)定各組菌株的OD600值。

1.4.5 溶血性試驗(yàn)

取活化后的菌懸液，劃線接種于哥倫比亞血瓊脂平板上，37 ℃厭氧培養(yǎng)48 h 后觀察平板上生長(zhǎng)菌落的溶血情況。以具有溶血性的大腸埃希氏桿菌為陽(yáng)性對(duì)照。若菌落周圍由于紅細(xì)胞的不完全破裂 形成草綠色環(huán)，則為α溶血；若菌落周圍由于紅細(xì) 胞的完全破裂形成界限分明、完全透明的溶血環(huán)，則為β溶血；若菌落周圍的培養(yǎng)基沒有變化，即為不溶血［12］。

1.4.6 乳酸菌藥物敏感性試驗(yàn)

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)藥敏紙片說(shuō)明書采用紙片擴(kuò)散法（K-B法），將純培養(yǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)液用MRS液體培養(yǎng)基稀釋至0.5麥?zhǔn)媳葷峁軡舛龋ň簼舛葹?.5×108cfu/mL）均勻涂布于MRS 培養(yǎng)基表面，待表面菌液干燥后使用無(wú)菌鑷子夾取24種標(biāo)準(zhǔn)藥敏紙片緊貼于MRS 培養(yǎng)基上，于37 ℃厭氧培養(yǎng)18 h 后，測(cè)量各抑菌環(huán)直徑。依據(jù)說(shuō)明書判別分離菌株對(duì)所用藥物的敏感程度。藥敏紙片包括青霉素、阿莫西林、頭孢氨芐、頭孢克洛、頭孢曲松、頭孢克肟、頭孢吡肟、頭孢哌酮舒巴坦、阿米卡星、鏈霉素、慶大霉素、阿奇霉素、氯霉素、利福平、諾氟沙星、恩諾沙星、氧氟沙星和左氧氟沙星等。

2 結(jié)果

2.1 分離菌株的鑒定結(jié)果

經(jīng)改良MRS固體培養(yǎng)基37 ℃恒溫厭氧培養(yǎng)48 h的多次分離純化，從華南虎糞便樣品中共獲得142個(gè)菌株，菌落周圍有白色透明的溶鈣圈，菌落形態(tài)呈 白色或淡黃色。通過(guò)NCBI BLAST 比對(duì)，初步確定78 株菌株為乳酸菌，其中包括23 株羅伊氏乳桿菌（Lactobacillus reuteri）、13 株約氏乳桿菌（Lactobacil?lus johnsonii）、11 株卷曲乳桿菌（Lactobacillus crispa?tus）、9 株動(dòng)物乳桿菌（Ligilactobacillus animalis）、8 株戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）、3株Ligilacto?bacillus saerimneri、3株陰道乳桿菌（Lactobacillus vaginalis）、2 株食淀粉乳桿菌（L.amylovorus）、2 株口乳桿菌（Limosilactobacillus oris）、1 株格氏乳球菌（Lactococcus garvieae）、1 株黏膜乳桿菌（Lactobacillus mucosae）、1 株敏捷乳桿菌（Ligilactobacillus agilis）和1 株乳腸球菌（Enterococcus lactis），表1 列出部分乳酸菌的鑒定結(jié)果，說(shuō)明在圈養(yǎng)華南虎腸道中乳酸菌的微生物群落存在多樣性。

表1 菌株16S rRNA基因序列同源性Tab.1 Homology of 16S rRNA gene sequence

2.2 菌株抑菌性

按照同一樣品分離得到相同菌株且互相之間的16S rRNA 基因相似性大于99.9%時(shí)，只保留其中 1 株菌株的方法去除重復(fù)菌株，從78 株華南虎腸道乳酸菌中篩選出42 株進(jìn)行抑菌性試驗(yàn)。4種指示菌株抑菌圈大于15 mm 視為具有良好抑菌性的菌株，初步篩選得到15 株優(yōu)良菌株，含6 株羅伊氏乳桿菌（22YY08、22DC20、22XX19、22Hui09、22LL14 和22XX03）、3株卷曲乳桿菌（22HH02、22YY13 和22YY09）、2 株動(dòng)物乳桿菌（22Hui15、22LL07）、1 株戊糖片球菌（22DC18）、1 株黏膜乳桿菌（22DC10）、1株約氏乳桿菌（22DC09）和1株格氏乳球菌（GaL110）（表2）。以上菌株對(duì)遲鈍愛德華氏菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果優(yōu)于沙門氏菌和大腸埃希氏桿菌，其中戊糖片球菌（22DC18）對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸埃希氏桿菌的抑菌效果最佳，抑菌圈可達(dá)20 mm。說(shuō)明不同種或同種不同株的乳酸菌在對(duì)致病菌的抑菌性上存在差異。

表2 菌株對(duì)致病菌的抑制能力Tab.2 Inhibition ability of strains to pathogenic bacteria mm

2.3 菌株耐酸和耐膽鹽性能

對(duì)抑菌性優(yōu)良的15 株菌進(jìn)行耐酸耐膽鹽性能測(cè)定，結(jié)果如表3 所示，所有菌株均能在培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng)。在pH=2.5、pH=3.0 的條件下，除動(dòng)物乳桿菌（22Hui15、22LL07）受到一定程度的抑制外，從華南虎糞便中分離出的另外13 株乳酸菌均表現(xiàn)出較好的耐酸能力。黏膜乳桿菌（22DC10）和約氏乳桿菌（22DC09）在0.1%膽鹽濃度下生長(zhǎng)受到明顯抑制，對(duì)膽鹽耐受性差，其他菌株均能較好地耐受0.1% 的膽鹽環(huán)境。3 株卷曲乳桿菌22HH02、22YY13 和22YY09 在0.2%、0.3% 膽鹽 濃度 下的OD600值下降明顯，說(shuō)明對(duì)高濃度膽鹽環(huán)境不耐受；其他菌株能在一定程度上耐受0.2%、0.3%的膽鹽環(huán)境。綜上所述，6 株羅伊氏乳桿菌（22YY08、22DC20、22XX19、22Hui09、22LL14 和22XX03）、戊糖片球菌22DC18和格氏乳球菌GaL110對(duì)酸和膽鹽耐受性相對(duì)較好，表明不同種屬的乳酸菌耐酸、耐膽鹽性能存在差異。

表3 不同pH及膽鹽條件下存活乳酸菌OD600Tab.3 OD600 of LAB under different pH and bile salt conditions

2.4 溶血性結(jié)果

對(duì)乳酸菌株進(jìn)行溶血性測(cè)定是乳酸菌安全性評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)之一。利用哥倫比亞血平板對(duì)經(jīng)過(guò)抑菌性和耐酸耐膽鹽性檢測(cè)得到的8 株優(yōu)良乳酸菌株22DC18、22DC20、22Hui09、22LL14、22XX03、22XX19、22YY08 和GaL110 進(jìn)行溶血性鑒定，由圖1 可知，8株菌落周圍既無(wú)透明圈也無(wú)草綠色環(huán)，均不產(chǎn)生溶血性，說(shuō)明菌株溶血作用方面是安全的。

圖1 乳酸菌株的溶血性試驗(yàn)結(jié)果Fig.1 Hemolytic test results of LAB strains

2.5 菌株對(duì)抗生素的耐藥性

根據(jù)動(dòng)物園常用藥物情況選擇24種藥物，對(duì)以上8株菌進(jìn)行耐藥性測(cè)試，結(jié)果表明（表4）所有菌株對(duì)喹諾酮類的諾氟沙星、恩諾沙星、氧氟沙星和左氧氟沙星都具有耐藥性。羅伊氏乳桿菌（22DC20、22Hui09、22LL14、22XX03、22XX19、22YY08）中菌株22Hui09 對(duì)頭孢曲松、頭孢哌酮和氯霉素敏感，對(duì)其余21種藥物都具有耐藥性；菌株22YY08 對(duì)頭孢哌酮、阿米卡星、慶大霉素、紅霉素、阿奇霉素、氯霉素和利福平敏感，對(duì)15種藥物耐藥；菌株22LL14 對(duì)4種藥物敏感，對(duì)14種藥物耐藥；菌株22DC20對(duì)7種藥物敏感，對(duì)15種藥物耐藥；菌株22XX03對(duì)12種藥物敏感，對(duì)12種藥物耐藥；菌株22XX19對(duì)15種藥物敏感，對(duì)7種藥物耐藥。戊糖片球菌22DC18 對(duì)7種藥物敏感，對(duì)12種藥物耐藥；格氏乳球菌GaL110 對(duì)9種藥物敏感，對(duì)12種藥物耐藥。綜上所述，3 株羅伊氏乳桿菌22Hui09、22YY08 和22LL14 對(duì)多種藥物產(chǎn)生耐藥性，另外3 株羅伊氏乳桿菌（22DC20、22XX03、22XX19）、1 株戊糖片球菌（22DC18）和1 株格氏乳球菌（GaL110）在耐藥性方面相對(duì)安全。

表4 菌株對(duì)抗生素的耐藥性Tab.4 Resistance to antibiotics

3 討論

乳酸菌可黏附在動(dòng)物機(jī)體腸道內(nèi)，通過(guò)代謝活動(dòng)產(chǎn)生有機(jī)酸、抑菌蛋白類、過(guò)氧化氫和細(xì)菌素等物質(zhì)有效抑制常見致病菌的增值［13］。相關(guān)研究表明羅伊氏乳桿菌能產(chǎn)生羅伊氏菌素、Reutericin 6、Re?utericinclin 和胞外多糖等抑菌物質(zhì)，可抑制多種致病菌的生長(zhǎng)［14］，此外對(duì)機(jī)體的免疫屏障具有調(diào)節(jié)作用，包括增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬作用［15］、參與調(diào)控炎癥反應(yīng)［16］和調(diào)控T 細(xì)胞［17］。程王琨等［5］從圈養(yǎng)非人靈長(zhǎng)類糞便中分離的乳酸桿菌中，發(fā)現(xiàn)3 株羅伊氏乳桿菌在腸上皮細(xì)胞表面對(duì)大腸埃希氏桿菌有較好黏附抑制效果。Scillato等［18］從人陰道分離的卷曲乳桿菌對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏桿菌、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）和糞腸球菌（Enterococ?cus faecalis）等多種病原菌均有較強(qiáng)的抑菌活性。張家寶等［19］從雞腸道分離的1 株卷曲乳桿菌對(duì)雞白痢沙門氏菌（Salmonella pullorum）和金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抑菌活性。何江波等［10］從羊瘤胃內(nèi)容物中分離的3 株戊糖片球菌對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸埃希氏桿菌具有較強(qiáng)的抑制作用。以上研究結(jié)果為本研究結(jié)果提供參考，因此本研究分離得到的15 株抑菌性能優(yōu)良的菌株具備開發(fā)為新型微生態(tài)制劑的基礎(chǔ)條件，可繼續(xù)開展下一步試驗(yàn)。

乳酸菌從口腔進(jìn)入消化道后，胃液中的胃酸及各種酶類對(duì)乳酸菌的生長(zhǎng)具有較強(qiáng)的抑制作用，只有少數(shù)耐酸能力強(qiáng)的菌株才能存活下來(lái)并在體內(nèi)發(fā)揮益生作用［20］。胃液pH 值會(huì)隨著胃酸的分泌和 消耗在1.5～5.0 波動(dòng)，食物通過(guò)胃的時(shí)間一般為 1～3 h［21］。通過(guò)胃液后存活的菌株將在小腸的前部遇到膽鹽［22］，因此研究乳酸菌的耐酸耐膽鹽性能是評(píng)價(jià)乳酸菌能否在胃腸道內(nèi)發(fā)揮益生作用的重要指標(biāo)。研究表明羅伊氏乳桿菌耐胃酸和膽汁能力強(qiáng)，是少有的以消化道作為天然寄居地的益生菌［14］。程王琨等［5］從圈養(yǎng)非人靈長(zhǎng)類糞便中分離的3 株羅伊氏乳桿菌均具有較好的耐酸耐膽鹽性能，與本研究結(jié)果相似。谷懿寰等［23］從奶豆腐中分離的戊糖片球菌可在pH 值為4.5 的條件下生長(zhǎng)，且對(duì)膽鹽具有耐受性，體外模擬連續(xù)胃腸道消化后存活率仍為35%。馮秀娟等［24］從新疆新鮮牛奶中分離到1 株格氏乳球菌，該菌含有膽鹽水解酶基因（bsh），可產(chǎn)生膽鹽水解酶，表明該菌在益生制劑方面有開發(fā)潛力。

隨著抗生素的廣泛使用，乳酸菌在抗生素的選擇壓力下逐漸產(chǎn)生耐藥性，還有可能將耐藥基因轉(zhuǎn)移到其他腸道菌群和致病菌中，從而對(duì)動(dòng)物的健康造成威脅。細(xì)菌的耐藥方式分為天然性和獲得性耐藥2種，其中天然性耐藥基因一般存在染色體上，極少發(fā)生轉(zhuǎn)移［25］；獲得性耐藥基因一般存在質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座子上，存在水平轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)［26］。分析經(jīng)抑菌性和耐酸耐膽鹽性檢測(cè)得到的8 株優(yōu)良乳酸菌株產(chǎn)生耐藥性的原因，可能是不同菌株攜帶不同的天然耐藥基因，也可能是在飼養(yǎng)華南虎的過(guò)程中抗生素的使用導(dǎo)致相關(guān)抗性基因轉(zhuǎn)移，形成獲得性耐藥。由于目前乳酸菌藥敏性評(píng)價(jià)還缺乏相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)［10］，大部分乳酸菌對(duì)四環(huán)素藥物表現(xiàn)出耐藥［27］，后期可以通過(guò)全基因組測(cè)序技術(shù)深入研究以上菌株的耐藥機(jī)制，以確定是否存在耐藥基因的轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。

4 結(jié)論

乳酸菌作為動(dòng)物腸道的正常菌群，與宿主的營(yíng)養(yǎng)吸收、腸道健康和免疫力等有著密切關(guān)系，但腸道乳酸菌的菌群數(shù)量常受外界因素，如應(yīng)激、抵抗力下降和病原微生物入侵等影響而減少，導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)［5］。對(duì)于圈養(yǎng)的華南虎，易受到周圍環(huán)境及人為因素的影響而產(chǎn)生應(yīng)激，且食物主要為冷凍牛肉、雞骨架和動(dòng)物內(nèi)臟等，在解凍和運(yùn)輸過(guò)程中易受到有害菌的污染，可以通過(guò)外源補(bǔ)充乳酸菌，維持腸道內(nèi)占優(yōu)勢(shì)的乳酸菌菌群，抑制有害菌的生長(zhǎng)，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，達(dá)到預(yù)防和治療腸道炎癥的目的。

本試驗(yàn)通過(guò)從健康華南虎糞便中分離、鑒定和篩選乳酸菌，成功篩選出5 株具有良好生長(zhǎng)性能、耐酸、耐膽鹽性及相對(duì)安全的菌株，包含3 株羅伊氏乳桿菌（22DC20、22XX03 和22XX19）、1 株戊糖片球菌（22DC18）和1 株格氏乳球菌（GaL110），對(duì)大腸埃希氏桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和遲鈍愛德華氏菌的抑菌圈均大于15 mm，在pH=2.5 和膽鹽濃度為0.1%時(shí)表現(xiàn)出較好的耐酸、耐膽鹽性能，均不產(chǎn)生溶血性，對(duì)多種抗菌藥物敏感。但本研究?jī)H探究了乳酸菌的體外益生性，后期將進(jìn)行全基因組測(cè)序及動(dòng)物試驗(yàn)，對(duì)乳酸菌的安全性及益生效果開展進(jìn)一步研究，為開發(fā)有效預(yù)防圈養(yǎng)華南虎腸道疾病和促進(jìn)腸道健康的益生菌制劑提供依據(jù)。