甲狀腺乳頭狀癌組織中GCDFP15、Calponin的表達及臨床意義

毛 玉,韓愛軍,劉 勛,楊建均,胡恒輝,羅 陽

樂山市人民醫院病理科,四川樂山 614000

甲狀腺乳頭狀癌發病率占甲狀腺癌的70%～90%[1],臨床多發生于女性,雖預后較好、生存率高,但仍有部分患者的癌細胞因發生轉移和擴散導致預后生存期不理想[2]。既往研究發現,甲狀腺乳頭狀癌發生、發展及預后與多種分子蛋白相關[3]。巨囊性病液體蛋白15(GCDFP15)是人體大汗腺的標志物,目前研究多將其用于乳腺癌的診斷[4]。類肌鈣蛋白(Calponin)是與肌鈣蛋白相結合的蛋白質家族成員之一,與細胞骨架形成、肌肉收縮和細胞黏附等密切相關[5]。有研究顯示,呈侵襲性生長的乳房外佩吉特病患者GCDFP15表達為強陽性或陽性,且其表達對于判斷患者是否呈侵襲性生長有一定意義[6]。但目前關于上述指標在甲狀腺乳頭狀癌中的作用鮮見報道。因此,本研究擬分析甲狀腺乳頭狀癌組織中GCDFP15、Calponin的表達水平及臨床意義,現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年1月至2017年5月經本院確診并行手術切除的102例甲狀腺乳頭狀癌患者作為研究對象,年齡20～65歲、平均(35.36±6.66)歲;男28例,女74例。將經手術切除的甲狀腺乳頭狀癌組織作為研究組,相對應的癌旁正常甲狀腺組織作為正常組。本研究獲得本院醫學倫理委員會批準,患者及其家屬簽署知情同意書。納入標準:符合甲狀腺乳頭狀癌的相關診斷標準[7],并經病理檢查已確診。排除標準:(1)伴有免疫功能疾病、嚴重感染性疾病及其他惡性腫瘤者;(2)嚴重心、肝、腎等重要臟器功能障礙者;(3)術前經放療、化療及生物等其他抗腫瘤手段者;(4)既往精神病史或存在語言、認知功能障礙者;(5)臨床資料不全或無法完全配合本研究者。

1.2方法

1.2.1GCDFP15、Calponin的表達水平檢測 標本經10%中性福爾馬林固定,脫水石蠟包埋、4 μm連續切片、脫蠟、水化,應用檸檬酸鹽緩沖液修復抗原,磷酸鹽緩沖液(PBS)漂洗3次(每次3 min),加入一抗(鼠抗人GCDFP15單克隆抗體、兔抗Calponin單克隆抗體,福州邁新生物技術開發有限公司)4 ℃孵育過夜,PBS漂洗再加入辣根過氧化物酶(HRP)標記二抗。37 ℃孵育30 min,PBS漂洗后使用DAB顯色、蘇木素復染、梯度乙醇脫水以及樹脂膠封片,最后鏡下觀察,陰性對照組以PBS為一抗。嚴格按照SP法檢測試劑盒說明書進行操作。

1.2.2結果判定[8]免疫結果由兩位高年資的病理醫師共同采用雙盲法完成,GCDFP15、Calponin陽性表達分別定位于細胞質、細胞膜或細胞核中,并呈黃素或棕黃色顆粒狀分布。每個切片隨機選擇10個視野,按照細胞染色強度與陽性細胞百分比得出免疫組織化學染色評分。陽性細胞染色強度評分:無色為0分、淺黃色為1分、棕色為2分、深褐色為3分。陽性細胞占總細胞百分比:<5%為0分、5%～25%為1分、>25%～50%為2分、>50%～75%為3分、>75%為4分。最終得分為陽性細胞百分比分數和染色強度平均分數的乘積,得分≥3分為陽性,<3分為陰性。

1.3隨訪 所有患者以術后出院為觀察點,并采用電話、門診復診或上門等方式結合患者復診病歷隨訪5年,隨訪截止時間為2022年4月30日或患者發生腫瘤轉移或死亡。

2 結 果

2.1兩組GCDFP15、Calponin的表達情況比較 研究組GCDFP15陽性表達率(64.71%)明顯高于對照組(29.41%),Calponin陽性表達率(39.22%)明顯低于對照組(66.68%),差異均有統計學意義(P<0.05),見表1、圖1。

注:A為GCDFP15陰性;B為GCDFP15陽性;C為Calponin陰性;D為Calponin陽性。

表1 兩組GCDFP15、Calponin的表達情況比較[n(%)]

2.2GCDFP15、Calponin表達與甲狀腺乳頭狀癌患者病理特征的關系 不同GCDFP15、Calponin表達甲狀腺乳頭狀癌患者年齡、性別、腫瘤最大徑差異無統計學意義(P>0.05),但TNM分期、侵犯被膜、淋巴結轉移差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 GCDFP15、Calponin表達與甲狀腺乳頭狀癌病理特征的關系

2.3生存情況 本研究102例患者5年生存率為49.02%(50/102)。其中GCDFP15陽性、陰性隨訪患者5年生存率分別為39.39%(26/66)、66.67%(24/36),Calponin陽性、陰性隨訪患者5年生存率分別為61.29%(38/62)、30.00%(12/40)。GCDFP15、Calponin陽性、陰性5年生存率比較差異均有統計學意義(P<0.05)。

2.4甲狀腺乳頭狀癌預后的單因素分析 單因素分析結果顯示,甲狀腺乳頭狀癌5年生存率與TNM分期、侵犯被膜、淋巴結轉移、GCDFP15陽性及Calponin陰性表達有關(P<0.05)。見表3。

表3 甲狀腺乳頭狀癌預后的單因素分析[n(%)]

2.5甲狀腺乳頭狀癌病預后的多因素COX分析 多因素COX比例風險回歸模型分析得出,TNM T3～4期、淋巴結轉移、侵犯被膜及GCDFP15陽性、Calponin陰性表達均為影響甲狀腺乳頭狀癌病預后的獨立危險因素(P<0.05)。見表4。

表4 甲狀腺乳頭狀癌病預后的多因素COX回歸分析

3 討 論

甲狀腺乳頭狀癌是甲狀腺癌最常見的病理類型,其惡性程度低,雖近年來臨床療效已得到較好改善,但仍存在復發、轉移等預后問題[9-10]。為了提高治療效果、降低復發率和病死率,探尋早期診斷甲狀腺乳頭狀癌和影響預后的因子,本研究擬分析甲狀腺乳頭狀癌組織中GCDFP15、Calponin表達水平及臨床意義。

GCDFP15是一種在大汗腺、泌乳腺、涎腺中有均有表達的標志物。有研究顯示,GCDFP15在鑒別及診斷乳腺癌方面具有較好的優勢[11]。乳腺癌患者癌組織GCDFP15陽性表達率高于癌旁正常組織[12]。本研究結果顯示,研究組GCDFP15陽性表達率明顯高于對照組(P<0.05),提示甲狀腺乳頭狀癌發生可能與GCDFP15有關。本研究還發現,GCDFP15表達在TNM分期、侵犯被膜、淋巴結轉移之間差異有統計學意義(P<0.05),說明GCDFP15陽性表達在甲狀腺乳頭狀癌發展中起促癌作用。GCDFP15陽性患者5年生存率低于陰性(P<0.05),說明GCDFP15陽性與預后密切相關。有研究顯示,GCDFP15參與乳腺癌細胞惡性進展[13]。單因素及多因素COX回歸分析結果顯示,GCDFP15陽性表達為影響甲狀腺乳頭狀癌病預后的獨立危險因素(P<0.05),提示GCDFP15陽性表達能夠影響甲狀腺乳頭狀癌的發展及預后,可作為臨床評估患者發生、發展及預后有效指標。由此推測,GCDFP15陽性可能與腫瘤細胞增殖有關,因此認為GCDFP15能夠參與甲狀腺乳頭狀癌惡性進展及復發。

Calponin屬于細胞骨架類蛋白,不僅在平滑肌收縮、非肌細胞肌動蛋白骨架方面發揮重要作用,同時在細胞增殖、黏附、遷移、分化、吞噬和細胞融合中也有重要作用[14]。有研究顯示,Calponin表達隨著慢性乙型肝炎病變加重而增強[15]。同時有研究發現,Calponin在腫瘤發展過程中具備重要作用[16]。本研究結果顯示,Calponin在研究組中陽性表達率明顯低于對照組(P<0.05),提示Calponin在甲狀腺乳頭狀癌組織中呈陰性表達,可能參與疾病發生。為了明確Calponin陽性表達與甲狀腺乳頭狀癌與臨床病理參數的關系,經過分析結果顯示Calponin陽性表達與TNM分期、侵犯被膜、淋巴結轉移有關(P<0.05),說明甲狀腺乳頭狀癌發展進程可能與Calponin陽性表達有關。生存分析結果顯示,Calponin表達與甲狀腺乳頭狀癌5年生存率相關。經單因素、多因素COX回歸分析結果顯示,Calponin陰性表達為影響甲狀腺乳頭狀癌病預后的獨立危險因素(P<0.05),提示Calponin陰性表達與甲狀腺乳頭狀癌發生、進展及預后有關。Calponin根據等電點不同可分為H1-Calponin、H2-Calponin、H3-Calponin 3種亞型。有研究顯示,H2-Calponin表達下調能夠導致多種腫瘤細胞增殖、轉移[17]。Calponin陰性表達與老年乳腺癌患者術后復發轉移有關,可為老年乳腺癌患者術后復發轉移的風險預測指標[18]。由此說明,Calponin陰性可能會增加甲狀腺乳頭狀癌復發、轉移等不良預后風險。

綜上所述,甲狀腺乳頭狀癌組織中GCDFP15呈陽性表達,Calponin呈陰性表達,二者表達水平與甲狀腺乳頭狀癌患者TNM分期、侵犯被膜、淋巴結轉移有關,GCDFP15、Calponin有望作為評估甲狀腺乳頭狀癌患者預后的指標。