血清sTREM-1、sTim3、cullin4A與肺結核患者肺部受累情況的相關性

唐 瑩,唐 釗

1.武漢市金銀潭醫院檢驗科,湖北武漢 430000;2.赤壁市人民醫院感染科,湖北赤壁 437300

肺結核是我國重點防治的疾病之一,有效消除傳染源、控制結核病是改善患者生命質量、提高國民健康水平的關鍵。目前,HRZE方案[異煙肼(H)+(R)+吡嗪酰胺(Z)+乙胺丁醇(E)]是治療肺結核的主要化療方案,但該方案化療時間長,不良反應多,部分患者難以耐受[1-2]。4MRZE方案[莫西沙星(M)+利福平(R)+吡嗪酰胺(Z)+乙胺丁醇(E)化療,療程4個月]是超短程化療方案,與傳統化療方案相比,療程更短,不良反應更少[3]。血清可溶性髓系細胞觸發受體-1(sTREM-1)是反映細菌感染的敏感指標[4],可溶性T細胞免疫球蛋白黏蛋白3(sTim-3)能誘導性表達于活化T細胞表面,其表達水平與活動性肺結核病情呈正相關[5]。泛素連接酶4A(cullin4A)是一類E3泛素連接酶,具有調控細胞周期、維持基因組穩定性等功能。有研究發現,肺結核患者體內cullin4A水平下調,提示其可能參與肺結核的發生與發展[6]。但關于血清sTREM-1、sTim3、cullin4A水平與肺結核患者4MRZE治療效果之間的關系并不明確。本研究對肺結核患者4MRZE、2HRZE/4HR及2H3R3Z3E3/4H3R3標準四聯療法方案治療前后血清sTREM-1、sTim3、cullin4A水平進行監測,初步探討上述指標在肺結核患者治療過程中的變化,現結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2018年1月至2021年1月武漢市金銀潭醫院及赤壁市人民醫院收治的265例肺結核患者作為研究對象,根據化療方案的不同分為2H3R3Z3E3/4H3R3標準四聯療法方案治療的對照組(n=97)、4MRZE超短程化療方案治療的4MRZE組(n=88)和2HRZE/4HR方案治療的2HRZE/4HR組(n=80)。納入標準:符合《中國結核病病理學診斷專家共識》中相關診斷標準;初治肺結核;痰涂片或痰培養陽性;年齡18～60歲。排除標準:糖尿病、心臟病、肝腎疾病、免疫系統疾病、血液系統疾病合并惡性腫瘤者;存在精神障礙不能配合研究者。4MRZE組男50例,女38例;年齡20～56歲,平均(39.41±14.62)歲;2HRZE/4HR組男47例,女33例;年齡21～56歲,平均(39.57±14.33)歲;對照組男56例,女41例;年齡19～55歲,平均(38.18±15.82)歲。3組患者一般資料對比,差異均無統計學意義(P<0.05)。本研究經醫院倫理委員會批準,所有參與者均知情同意,并簽署書面知情同意文件。

1.2方法

1.2.1治療方法 4MRZE組患者采用4MRZE方案治療:莫西沙星(廣東陽光藥業有限公司,國藥準字H20183246)每次0.4 g,每天1次,利福平(成都錦華藥業有限責任公司,國藥準字H51020786)每次 0.45 g,每天1次,吡嗪酰胺(沈陽紅旗制藥有限公司,國藥準字H21022354)每次0.5 g,每天1次,乙胺丁醇(杭州民生藥業有限公司,國藥準字H33021602)每次0.5 g,每天1次;療程4個月。2HRZE/4HR組患者采用2HRZE/4HR方案治療:異煙肼(廣東華南藥業集團有限公司,國藥準字H44020699)每次0.3 g,每天1次,利福平(廣東華南藥業集團有限公司,國藥準字H44020771)每次0.45 g,每天1次,吡嗪酰胺(廣東華南藥業集團有限公司,國藥準字H44020761)每次0.5 g,每天2次,每周3 d,乙胺丁醇(廣東華南藥業集團有限公司,國藥準字H44020758)每次0.5 g,每天2次,每周3 d;療程6個月(2個月強化期+4個月鞏固期)。對照組患者采用2H3R3Z3E3/4H3R3標準四聯療法方案治療:異煙肼(廣東華南藥業集團有限公司,國藥準字H44020699)每次0.3 g,隔日1次,利福平(成都錦華藥業有限責任公司,國藥準字H51020786)每次0.45 g,隔日1次,吡嗪酰胺(沈陽紅旗制藥有限公司,國藥準字H21022354)每次 0.5 g,隔日1次,乙胺丁醇(杭州民生藥業有限公司,國藥準字H33021602)每次 0.5 g,隔日1次;療程2個月;隨后,異煙肼(廣東華南藥業集團有限公司,國藥準字H44020699)每次 0.3 g,隔日1次,利福平(成都錦華藥業有限責任公司,國藥準字H51020786)每次0.45 g,隔日1次;療程4個月。

1.2.2療效評價 分別在治療2、4個月時,統計3組患者痰菌轉陰情況及胸部X線病灶吸收情況。痰菌轉陰標準:連續2次痰液分離培養陰性,且之后痰菌檢查均為陰性。顯吸:X線片顯示病灶縮小≥50%,空洞閉合;吸收:X線片顯示病灶縮小<50%,但空洞變小;不變(未吸收):X線片顯示病灶無明顯變化;惡化:X線片顯示病灶播散或增大。有效吸收=顯吸+吸收。

1.3檢測方法 (1)分別于治療前及治療2、4個月后,采集3組患者外周靜脈血5 mL,3 000 r/min離心,分離上層血清,置于-80 ℃冰箱內保存待用。(2)采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清sTREM-1及sTim3水平,試劑盒均購自美國R&D公司。嚴格按照試劑盒相關標準進行實驗操作。采用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測血清cullin4A mRNA表達水平。采用Trizol法提取總RNA,Nanodrop2000c超微量分光光度計檢測RNA濃度。cullin4A正向引物為5′-CTACTGGCCAACATACACGC-3′,反向引物為5′-AAGCCATCTCCCTCGTTGCC-3′。內參GAPDH正向引物為5′-AACTCCATCATGAAGTGTGA-3′,反向引物為5′-ACTCCTGCTTGCTGATCCAC-3′。RT-qPCR反應體系:SYBR Rremix ExTaq Ⅱ(2×)10 μL,cDNA 2 μL,正、反向引物各0.8 μL,ROX Reference Dye(50×)0.4 μL,雙蒸水6 μL。反應條件:95 ℃預變性2 min,95 ℃變性15 s,60 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,循環40次。以GAPDH為內參,采用2-ΔΔCt法計算cullin4A mRNA相對表達量。

1.4觀察指標 (1)3組患者臨床療效。(2)3組患者治療前后患者血清sTREM-1、sTim3水平及血清cullin4A mRNA表達情況。(3)血清sTREM-1、sTim3、cullin4A與痰菌轉陰的關系。(4)血清sTREM-1、sTim3、cullin4A與肺結核患者病灶吸收情況的關系。

2 結 果

2.13組患者臨床療效比較 4MRZE組、2HRZE/4HR組在治療2、4個月時的痰菌轉陰率及病灶有效吸收率均顯著高于對照組,且4MRZE組高于2HRZE/4HR組,差異均有統計學意義(P<0.05)。療程完成后,3組比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 3組患者臨床療效[n(%)]

2.23組肺結核患者治療前后血清sTREM-1、sTim3、cullin4A水平比較 3組患者治療后血清sTREM-1、sTim3呈下降趨勢,而cullin4A mRNA呈上升趨勢,4MRZE組患者治療2、4個月時血清sTREM-1、sTim3顯著低于2HRZE/4HR組、對照組,而cullin4A mRNA顯著高于2HRZE/4HR組、對照組,差異均有統計學意義(P<0.05),但療程結束后3組血清sTREM-1、sTim3水平差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 3組肺結核患者治療前后血清sTREM-1、sTim3、cullin4A水平比較

2.3血清sTREM-1、sTim3、cullin4A與痰菌轉陰的關系 治療4個月,4MRZE組共81例患者痰菌轉陰,2HRZE/4HR共69例患者痰菌轉陰,對照組共83例患者痰菌轉陰。痰菌轉陰及未轉陰在治療前及治療2、4個月時,血清sTREM-1、sTim3水平均呈依次下降趨勢,cullin4A mRNA均呈依次上升趨勢,組內不同時間點差異有統計學意義(P<0.05)。但痰菌轉陰者治療前及治療2、4個月時,血清sTREM-1、sTim3水平均顯著低于痰菌未轉陰者,血清cullin4A mRNA顯著高于痰菌未轉陰者(P<0.05)。見表3。

表3 血清sTREM-1、sTim3、cullin4A與痰菌轉陰的關系

2.4血清sTREM-1、sTim3、cullin4A與肺結核患者病灶吸收情況的關系 治療4個月時,4MRZE組80例患者病灶有效吸收,2HRZE/4HR共65例患者病灶有效吸收,對照組共79例患者病灶有效吸收;病灶有效吸收者及病灶未吸收或惡化者在治療前及治療2、4個月時,血清sTREM-1、sTim3水平均呈依次下降趨勢,cullin4A mRNA均呈依次上升趨勢,組內不同時間點差異均有統計學意義(P<0.05)。但病灶有效吸收者治療前及治療2、4個月時,血清sTREM-1、sTim3水平均顯著低于病灶未吸收或惡化者,血清cullin4A mRNA顯著高于痰菌未轉陰者病灶未吸收或惡化者,差異均有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 血清sTREM-1、sTim3、cullin4A與肺結核患者病灶吸收情況的關系

3 討 論

肺結核主要由結核分枝桿菌引起的慢性傳染性疾病,結核分枝桿菌主要寄存于巨噬細胞內,通過降低患者機體免疫力促進肺結核的發生與發展[7-9]。HRZE是目前治療肺結核最常見的化療方案,其中異煙肼是合成抗菌藥物,能有效抑制烯酰基載體蛋白還原酶,殺滅細菌,并降低超氧化物歧化酶活性,抑制結核分枝桿菌增殖;吡嗪酰胺是一線抗結核藥物,利福平為廣譜抗生素,能與結核分枝桿菌轉錄酶的β亞基單位牢固結合,阻斷其DNA復制,有效中止蛋白合成;乙胺丁醇能干擾其RNA合成,抑制其增殖。但傳統HRZE化療方案治療時間長,不良反應多。4MRZE將異煙肼更換為莫西沙星,莫西沙星對多重耐藥菌株均具有良好的體外抗菌活性,能縮短治療療程,降低藥物不良反應。本研究中4MRZE組患者治療2、4個月的痰菌轉陰率分別為62.50%、87.50%,病灶有效吸收率分別為55.68%、80.68%,痰菌轉陰率及病灶有效吸收率均顯著高于2HRZE/4HR組(P<0.05),而3組治療完成后最終療效差異無統計學意義(P>0.05),表明4MRZE的最終治療效果與2HRZE/4HR及經典方案相近,但是所需的治療時間明顯縮短。這與蔡青山等[10]、馮雄等[11]研究結果相近。

血清sTREM是髓樣細胞觸發受體(TREM)的可溶性形式,sTREM-1是其超家族中的重要成員,其在中性粒白細胞、CD14+單核-巨噬細胞、肺巨噬細胞等單核細胞源性上皮樣細胞上呈高表達,在觸發、擴大炎癥反應中發揮重要的功效[12]。朱俊等[13]研究發現,血清sTREM-1水平升高將增加肺結核患者病情控制不良風險,并在預測患者預后方面也具有一定的作用,提示血清sTREM-1在提示肺結核病情中具有一定的價值。sTim-3表達于活化的T細胞表面,能抑制抗γ-干擾素等細胞因子分泌,降低巨噬細胞吞噬能力,并誘導T細胞免疫耐受[14-15]。cullin4A屬于泛素蛋白酶體系,可介導蛋白質降解,調節細胞周期,維護基因組穩定性等。閆書娜等[6]研究發現,與健康者及潛伏肺結核患者相比,肺結核患者血清cullin4A水平明顯下降,并與miR-194-5p呈負相關,推測cullin4A可能參與肺結核的發生及發展。

本研究結果發現,3種化療方案治療2、4個月及療程結束后,肺結核患者血清sTREM-1、sTim3水平呈依次下降趨勢,血清cullin4A mRNA水平呈依次上升趨勢,提示血清sTREM-1、sTim3、cullin4A在反映肺結核患者治療效果中具有一定價值。進一步分析4MRZE方案治療4個月后痰菌轉陰者與未轉陰者、病灶有效吸收及未吸收患者血清sTREM-1、sTim3、cullin4A水平發現81例患者痰菌轉陰者及7例未轉陰者在治療前、治療2個月及4個月時,血清sTREM-1、sTim3水平均呈依次下降趨勢,cullin4A mRNA均呈依次上升趨勢,組內不同時間點內差異顯著,但痰菌轉陰者治療前、治療2個月及4個月時,血清sTREM-1、sTim3水平均顯著低于痰菌未轉陰者,血清cullin4A mRNA顯著高于痰菌未轉陰者,且病灶有效吸收與未吸收者血清sTREM-1、sTim3、cullin4A RNA也呈現一致的規律。這提示血清sTREM-1、sTim3、cullin4A水平可反映肺結核患者病情及療效。

綜上所述,4MRZE化療方案在治療肺結核中具有良好的效果,隨著治療的進行,患者血清sTREM-1、sTim3水平呈下降趨勢,cullin4A水平呈上升趨勢,三者在反映痰菌轉陰及病灶有效吸收中也具有良好的價值。