喉鱗狀細胞癌組織中SEPT2、CMTM6表達及其與化療敏感性的關系*

武川軍,彭麗娜,馮志星,韓海平

邯鄲市中心醫院耳鼻咽喉科,河北邯鄲 056002

喉癌是頭頸部常見的惡性腫瘤之一,2020年世界衛生組織統計顯示,全球喉癌新發和死亡病例分別為18.46萬例、9.98萬例,中國喉癌新發和死亡病例分別為2.91萬例、1.58萬例,疾病負擔嚴重[1]。喉鱗狀細胞癌(LSCC)是喉癌最常見的類型,目前手術和放化療仍然是LSCC的主要治療策略,但LSCC發病機制復雜導致治療療效受到嚴重限制[2]。因此,了解LSCC發生的分子機制,對LSCC治療和預后評估至關重要。有研究表明,細胞骨架改變和免疫逃逸參與腫瘤發生發展[3-4]。胞裂蛋白2(SEPT2)是公認的細胞骨架調節的重要參與者[5]。含CKLF樣MARVEL跨膜結構域的蛋白6(CMTM6)是新近發現的一種共刺激分子,能增強免疫抑制促進腫瘤免疫逃逸[6]。已有研究報道,SEPT2、CMTM6在LSCC患者中表達上調[7-8]。然而,關于SEPT2、CMTM6表達與LSCC化療敏感性的關系尚不清楚。本研究探討LSCC組織中SEPT2、CMTM6表達,以及與化療敏感性的關系,旨在為LSCC的靶向治療和化療方案選擇提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年1月至2019年8月本院收治的117例LSCC患者作為研究對象。納入標準:(1)經病理檢查確診為LSCC;(2)年齡≥18歲;(3)初診且喉次全切除術或喉全切除術后行化療治療;(4)臨床資料完整。排除標準:(1)喉轉移瘤或合并其他部位惡性腫瘤;(2)入院前接受過抗腫瘤治療或術前行放化療;(3)醫院內死亡;(4)合并全身性感染性疾病和血液系統、免疫系統疾病;(5)拒絕接受隨訪。本研究經醫院倫理委員會批準,所有患者或家屬知情并簽署知情同意書。LSCC患者一般資料見表1。

表1 117例LSCC患者一般資料

1.2方法 所有患者均先行手術治療,術中留取部分癌組織和癌旁組織,以生理鹽水清晰后于液氮保存,術后按照《喉癌外科手術及綜合治療專家共識》[10]接受TP方案(紫杉醇+順鉑)化療。取出凍存組織研磨成末,按照Trizol試劑盒(北京艾德萊生物科技有限公司)說明書提取組織中總RNA,瓊脂糖電泳確認RNA純度后再按照Takara逆轉錄試劑盒(北京寶日醫生物技術有限公司)說明書將2 μg RNA逆轉錄為cDNA。按照熒光定量PCR(RT-qPCR)試劑盒(北京百邁客生物科技有限公司)說明書配制PCR反應體系(20.0 μL):cDNA模板1.0 μL、2×Master mix 8 μL、正向引物0.5 μL、反向引物0.5 μL、SYBR Premix Ex Taq 5.0 μL、RNase-free ddH2O 5.0 μL。SEPT2引物:正向5′-CGTGGAGAAGAATTGGGC-3′,反向5′-CGTGGAGAAGAATTGGGC-3′;CMTM6引物:正向5′-AGGCAATAGGTCAGTAAGGTCAGTAGG-3′,反向5′-GTCCAGAAGCAGTCAGTCTCAAGTC-3′;內參GAPDH引物:正向5′-AGATCTCCAGTGGCTGG-3′,反向5′-TAGGGACATGATATGCTGT-3′。于LightCycler 440型RT-qPCR儀(瑞士羅氏公司)上進行PCR反應,反應條件:95 ℃ 10 min,1個循環,95 ℃ 15 s、60 ℃ 60 s、72 ℃ 60 s,45個循環。記錄Ct值,以2-ΔΔCt法計算組織中SEPT2、CMTM6的mRNA相對表達水平。

1.3觀察指標 (1)療效評價:根據文獻[11]評價。完全緩解:所有病灶消失;部分緩解:病灶直徑總和縮小≥30%,維持>4周;疾病穩定:病灶直徑總和縮小<30%,增加<20%,維持>4周;疾病進展:病灶直徑總和增加≥20%或出現新病灶。(2)隨訪:患者出院后通過門診或電話隨訪3年,統計患者生存情況。根據LSCC組織中SEPT2 mRNA、CMTM6 mRNA表達均值分為SEPT2 mRNA高表達組和SEPT2 mRNA低表達組、CMTM6 mRNA高表達組和CMTM6 mRNA低表達組,比較不同SEPT2 mRNA、CMTM6 mRNA表達LSCC患者客觀緩解率和生存情況。

2 結 果

2.1LSCC組織與癌旁組織中SEPT2 mRNA、CMTM6 mRNA表達比較 LSCC組織中SEPT2 mRNA、CMTM6 mRNA相對表達水平高于癌旁組織(P<0.05)。見表2。

表2 LSCC組織與癌旁組織中SEPT2 mRNA、CMTM6 mRNA表達比較

2.2LSCC組織中SEPT2 mRNA、CMTM6 mRNA表達與臨床病理特征的關系 SEPT2 mRNA、CMTM6 mRNA表達與LSCC的TNM分期和淋巴結轉移有關(P<0.05),與性別、年齡、吸煙、飲酒、腫瘤最大徑和分化程度無關(P>0.05)。見表3。

表3 LSCC組織中SEPT2 mRNA、CMTM6 mRNA表達與臨床病理特征的關系

2.3LSCC組織中SEPT2 mRNA、CMTM6 mRNA表達與化療敏感性的關系 根據LSCC組織中SEPT2 mRNA、CMTM6 mRNA表達水平均值分為SEPT2 mRNA高表達組(≥1.18,n=56)和SEPT2 mRNA低表達組(<1.18,n=61)、CMTM6 mRNA高表達組(≥1.86,n=54)和CMTM6 mRNA低表達組(<1.86,n=63),結果顯示,SEPT2 mRNA、CMTM6 mRNA高表達組的客觀緩解率低于SEPT2 mRNA、CMTM6 mRNA低表達組(P<0.05)。見表4、5。

表4 不同SEPT2 mRNA表達LSCC患者客觀緩解率比較[n(%)]

2.4LSCC組織中SEPT2 mRNA、CMTM6 mRNA表達與預后的關系 117例LSCC患者隨訪4～36個月,失訪5例,死亡29例,3年總生存率為75.21%(88/117)。K-M生存曲線分析顯示,SEPT2 mRNA高表達組總生存率[66.07%(37/56)]低于SEPT2 mRNA低表達組[83.61%(51/61)];CMTM6 mRNA高表達組總生存率[66.67%(36/54)]低于CMTM6 mRNA低表達組[82.54%(52/63)],差異有統計學意義(Log-rankχ2=5.571、5.107,P=0.018、0.024)。見圖1。

表5 不同CMTM6 mRNA表達LSCC患者客觀緩解率比較[n(%)]

3 討 論

喉癌是起源于喉黏膜上皮組織的惡性腫瘤,其中90%以上為LSCC,由于喉部與人的外貌、營養和社交互動等密切相關,因此LSCC不僅會影響患者壽命,還可因喉部結構損害和功能障礙降低患者生命質量[12]。化療是LSCC治療中不可或缺的手段,然而臨床實踐中部分患者對化療藥物耐藥、繼發耐藥和化療抵抗,導致LSCC治療失敗和預后不良[13],研究LSCC化療敏感性的發生機制對指導篩選患者人群和提高化療效果具有重要意義。

SEPT家族是一類介導細胞骨架網絡的組織和動力學調控的GTP酶,SEPT2是SEPT家族重要成員,能與肌動蛋白形成螺旋式或圈形的纖維束,維持肌動蛋白束中穩定性,當細胞骨架損傷引起肌動蛋白組裝活躍時,SEPT2與肌動蛋白分裂后會影響肌動蛋白穩定性,導致細胞骨架異常[14-15]。基于SEPT2對細胞骨架間的重要作用,近年多項研究報道了SEPT2與結直腸癌、胃癌等惡性腫瘤的關系[16-17]。本研究結果顯示,LSCC組織中SEPT2 mRNA表達上調,這與既往研究報道一致[7],分析原因可能是LSCC細胞骨架異常改變導致肌動蛋白組裝活躍,引起SEPT2與肌動蛋白分裂,促進SEPT2表達。本研究結果還顯示,LSCC組織中SEPT2 mRNA表達與TNM分期和淋巴結轉移有關,同時SEPT2 mRNA高表達組客觀緩解率顯著降低,提示SEPT2 mRNA高表達參與LSCC發展,與化療敏感性降低有關。

CMTM6是CMTM超家族成員,主要表達于免疫器官,能通過結合PD-L1防止其被靶向降解,增強免疫系統抑制,幫助腫瘤細胞免疫逃逸[18]。本研究結果顯示,LSCC組織中CMTM6 mRNA表達上調,分析與腫瘤激活CMTM6啟動免疫逃逸有關,與既往報道結果一致[8]。本研究結果還顯示,LSCC組織中CMTM6 mRNA表達與TNM分期和淋巴結轉移有關,同時CMTM6 mRNA高表達組客觀緩解率顯著降低,提示CMTM6 可能參與LSCC的發展,與化療敏感性降低有關。本研究通過隨訪發現,SEPT2 mRNA、CMTM6 mRNA高表達患者3年總生存率顯著降低,提示SEPT2 mRNA、CMTM6 mRNA表達與LSCC患者預后有關,二者可能作為LSCC患者預后潛在預測指標。

綜上所述,LSCC組織中SEPT2 mRNA、CMTM6 mRNA高表達與臨床病理特征、化療敏感性和預后有關,但本研究結果還需多中心研究證實。