生殖器皰疹病毒抗原ELISA與PCR檢測結果的對比研究

孫 偉，王 煒

（臨沂市皮膚病醫院，山東 臨沂 276004）

生殖器皰疹是臨床上常見的病毒性疾病，具有病情進展緩慢及復發率高等特點。現階段，該病已經成為世界范圍內的性傳播疾病[1]。單純皰疹病毒屬于嗜神經DNA 雙鏈病毒，包括1 型單純皰疹病毒及2 型單純皰疹病毒，前者經口傳播，可誘發口唇皰疹，后者則主要通過性行為傳播，兩者均可誘發生殖器皰疹。單純皰疹病毒可導致人體感染梅毒螺旋體及人類免疫缺陷病毒的風險顯著升高，同時還可與人乳頭瘤病毒協同作用導致宮頸癌的發生風險升高。盡早對生殖器皰疹進行準確的診斷對控制單純皰疹病毒的傳播有重要意義，并且還能夠有效降低其危害性[2-3]。現階段，常用的生殖器皰疹實驗室診斷方法包括血清抗體檢測、細胞培養、聚合酶鏈反應（PCR）檢測、抗原檢測等，這些方法均具有一定的優缺點[4-5]。本文特就酶聯免疫吸附法（ELISA）及PCR 法在生殖器皰疹病毒抗原檢測中的應用價值進行探討和分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取2017 年1 月至2022 年10 月在我院進行診治的疑似生殖器皰疹患者87 例，包括男性47 例、女性40 例，患者年齡范圍為20 ～77 歲，年齡平均值為（45.36±3.09）歲。醫院倫理委員會審核并批準了此次研究方案。病例納入標準：（1）初次發病；（2）生殖器、外陰皮膚或宮頸黏膜存在潰瘍、糜爛、水皰、紅斑等情況，局部存在刺痛或瘙癢感；（3）患者對本次研究知情且能夠積極配合各項檢查。病例排除標準：（1）近期服用過抗病毒藥物或抗生素者；（2）接受病損部位外用藥物治療者；（3）有溝通障礙或精神疾病者；（4）合并嚴重內科疾病者。

1.2 方法

針對臨床癥狀不明顯或無臨床癥狀者采取以下方法進行標本采集：男性患者于尿道口內1 ～3 cm 取材（確保采集前2 h 內未排尿），女性患者于宮頸口內1 ～3 cm 取材。有水膿皰者：將水膿皰夾破后應用無菌拭子采集皰液，然后以拭子對潰瘍面進行摩擦。潰瘍性皮損者：以無菌拭子對潰瘍基底面用力摩擦，以盡可能多地采集深部滲出液及潰瘍面細胞。結痂性破損者：祛痂后將滲出液擠出，然后放置于移送液中。樣本采集完成后將拭子置入蔗糖- 磷酸鹽培養基中，并妥善保存（4℃）。盡早實施檢測，嚴格按照試劑盒說明書進行各項檢測。單純皰疹病毒檢測試劑盒（1 型及2 型）均由中山大學達安基因股份有限公司生產。應用ELISA 試劑盒（產自丹麥DAKO 公司）進行生殖器皰疹病毒抗原ELISA 檢測，應用PCR 檢測試劑盒（由廈門泰普生物科技有限公司生產）進行生殖器皰疹病毒抗原PCR 檢測，檢測過程均需嚴格按照說明書相關步驟進行操作。若兩種檢測方法檢測的結果存在不一致現象，則應用單純皰疹病毒通用引物進行分析。

1.3 觀察指標

（1）對 比ELISA 法 及PCR 法 對HSV-1 感 染、HSV-2 感染、混合感染的檢出情況。（2）以病毒培養法檢測結果作為金標準，分析ELISA 法檢測及PCR法檢測對生殖器皰疹的診斷效能（靈敏度、準確度、特異度、陽性預測值、陰性預測值）。

1.4 統計學處理方法

采用SPSS 23.0 軟件分析文中正態分布的數據資料，計量資料用均數± 標準差（±s）表示，采用t檢驗，計數資料用百分比（%）表示，采用χ2 檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 比較兩種檢測方法的檢測結果

兩種檢測方法對HSV-1 感染、HSV-2 感染、混合感染的檢出率以及總陽性檢出率的差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩種檢測方法檢測結果的對比[例（%）]

2.2 分析對比ELISA 法檢測及PCR 法檢測對生殖器皰疹的診斷效能

以病毒培養法檢測結果為金標準，ELISA 法檢測與PCR 法檢測診斷生殖器皰疹靈敏度、準確度、特異度、陽性預測值、陰性預測值的差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表2 ～表4。

表2 分析ELISA 法檢測的價值（例）

表3 分析PCR 法檢測的價值（例）

表4 對比ELISA 法檢測及PCR 法檢測對生殖器皰疹的診斷效能[%( 例)]

3 討論

生殖器皰疹是一種常見的性傳播疾病，具有慢性、周期復發性以及治愈難度大等特點。部分此病患者無典型臨床癥狀，免疫功能低下者病情呈周期性復發，積極配合藥物治療并有效增強自身免疫力對于控制病情復發有重要意義[6-7]。與非生殖器皰疹病毒感染患者相比，生殖器皰疹病毒感染患者感染艾滋病病毒的風險顯著升高，故而有必要加強生殖器皰疹病毒感染的早期診斷，以便及時采取針對性的干預措施[8]。病毒培養法為生殖器皰疹診斷的金標準，但是該診斷方法存在用時長以及病毒分離成功率低等缺點，不但操作復雜且對操作人員技能水平的要求較高。因此，其臨床推廣難度較高，難以滿足臨床需求。除此之外，該檢測方法受病毒培養條件以及標本采集和保存等多種因素的影響，不具備成為常規檢驗方法的條件。病毒抗原及抗體檢測在生殖器皰疹診斷中應用廣泛，而病毒抗原及抗體檢測結果易受到檢測試劑穩定性、重復性、特異性、敏感性等因素的影響。選擇合理的檢測方法對于提高疾病檢出率以及有效降低漏診率和誤診率有重要意義。患者感染生殖器皰疹病毒后IgM、IgG 抗體產生的時間及抗體滴度的個體關聯性較強，不同個體存在較大的差異，抗體檢測陽性檢出率相對較低；因此，相關抗體檢測的臨床應用價值不高[9]。ELISA 法及PCR 法在生殖器皰疹病毒抗原檢測中均有著較為廣泛的應用。其中，ELISA 法檢測生殖器皰疹病毒抗原能夠直接檢出泌尿生殖道及皮損部位的病原體，在生殖器皰疹篩查和診斷中的應用價值較高。PCR 法能夠保證分型及定量檢測的準確性，而且操作步驟少，檢測速度較快。此次研究中，兩種檢測方法對HSV-1 感染、HSV-2 感染、混合感染的檢出率以及總陽性檢出率的差異均無統計學意義（P＞0.05）。以病毒培養法檢測結果為金標準，ELISA 法檢測與PCR 法檢測診斷生殖器皰疹靈敏度、準確度、特異度、陽性預測值、陰性預測值的差異均無統計學意義（P＞0.05）。可見，ELISA 法及PCR 法在生殖器皰疹病毒抗原檢測中的應用價值均較高。但有研究指出，ELISA 法檢測成本更低，實用性更強，操作簡單，檢測快速，更加適合臨床推廣應用。PCR 檢測法對操作者操作技術的要求較高，操作者必須經過系統規范的培訓方可上崗，而且對實驗室環境要求較高，存在較高的假陰性和假陽性風險[10]。

綜上所述，ELISA 法及PCR 法在生殖器皰疹病毒抗原檢測中的應用價值均較高。其中，ELISA 法屬于在臨床上有著廣泛應用的檢測方法，檢測技術成熟，而且對檢測儀器以及實驗操作環境沒有特殊要求，操作簡單且能夠迅速出具檢測結果，同時還具有經濟、實用等特點，更加適合在基層醫院進行推廣和應用。