基于HPLC法和網絡藥理學研究蒲公英抗氧化活性成分及作用機制

潘明月 李濤 陳婉鈺 張曉穎 龍生 吳禹岐 于睿 張蕾

摘要： 基于高效液相色譜（HPLC）法和網絡藥理學方法研究蒲公英中抗氧化活性成分及作用機制. 采用石油醚、 乙酸乙酯、 二氯甲烷和正丁醇等有機試劑分別提取中草藥蒲公英的有效成分，研究其抗氧化效果，同時采用網絡藥理學多個在線數據庫獲取蒲公英抗氧化共有靶點，構建 PPI網絡，并進行GO富集分析和KEGG信號通路富集分析.? 結果表明： 蒲公英各相提取物對羥自由基（ ·OH）、 超氧陰離子自由基（O2-?·）和1，1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基（DPPH?·）均有一定的清除能力，蒲公英乙酸乙酯相提取物和蒲公英二氯甲烷相提取物的清除效果較好，主要的抗氧化活性成分為異鼠李素和齊墩果酸； 線上數據庫篩選出蒲公英抗氧化靶點有137個，共有靶點主要集中在膜筏上，通過細胞對無機物、 氮化物和營養水平的反應起抗氧化作用；? 共有靶點與癌癥信號通路、 NF-κappa B信號通路和PPAR信號通路等密切相關.

關鍵詞： 高效液相色譜； 網絡藥理學； 蒲公英； 抗氧化

中圖分類號：? R284? ?文獻標志碼： A? 文章編號： 1671-5489（2023）02-0437-06

Study of Antioxidant Active Components and Mechanism of Dandelion Based on HPLC Method and Network Pharmacology

PAN Mingyue， LI Tao， CHEN Wanyu， ZHANG Xiaoying， LONG Sheng， WU Yuqi， YU Rui， ZHANG Lei

（Department of Pharmaceutical Engineering， School of Life Science and Technology， Mudanjiang Normal University， Mudanjiang 157011，Heilongjiang Province，China）

收稿日期： 2022-05-13.

第一作者簡介：? ?潘明月（2000—），女，漢族，碩士研究生，從事生化藥學的研究，E-mail：? 1765134763@qq.com. 通信作者簡介：? 張 蕾（1984—），女，漢族，博士，副教授，從事微生物與生物化學的研究，E-mail： swxzlz@126.com.

基金項目： 黑龍江省基本科研業務費（批準號： 1452PT007； 1354MSYQN024; 1354MSYQN025）、 黑龍江省博士后基金（批準號： LBH-19190）、 黑龍江省大學生創業實踐項目（批準號： kjcx2021-082mdjnu）和黑龍江省大學生創新項目（批準號：? S202210233032; MSYSYL2022019）.

Abstract：? We studied? the antioxidant active components and mechanism of? dandelion based on? high performance liquid chromatograph （HPLC） method and network pharmacology method.? ?The effective components of Chinese herbal medicine dandelion were extracted by? organic reagents， such as petroleum ether， ethyl acetate， dichloromethane and n-butanol， and their antioxidant effects were studied. Multiple online databases of network pharmacology were used to obtain? common targets of dandelion antioxidant construct PPI network， and conduct GO enrichment analysis and KEGG signal pathway enrichment analysis. The results show that the? extracts of each phase of dandelion have a certain scavenging ability to hydroxy radical （

·OH）， superoxide anion radical （O2-

·） and 1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical （DPPH

·）， the ethyl acetate phase extract of dandelion and the dichloromethane phase extract of dandelion have better scavenging effects， and the main antioxidant active components are isorhamnetin and oleanolic acid. There are 137 dandelion antioxidant targets screened from the online database. The common targets are mainly concentrated on membrane rafts， which are resistant to the response of cells to inorganic substances， nitrogen compounds， and nutrient levels oxidation. The common targets are closely related to cancer signal pathway， NF-kappa B signal pathway， and PPAR signal pathway.

Keywords：? high performance liquid chromatography （HPLC）;? network pharmacology; dandelion;? antioxidant

蒲公英（dandelion）為菊科多年生宿根性植物，別名燈籠草、 婆婆丁、 華花郎等［1］，具有解熱涼血、 補脾和胃、 利尿緩瀉等功效，多用于炎癥、 瘰疬、 疔毒瘡腫、 尿路感染等多種疾病的治療［2-6］. 傳統中藥大多是天然的抗氧化劑，在清除自由基、 抗氧化方面具有重要作用. 這些功能與其中的生物活性物質密不可分，包括黃酮類化合物、 甾醇、 皂苷、 生物堿、 菊糖、 酚類化合物、 萜類等［1-3］. 研究表明，蒲公英作為一種中草藥具有副作用低的優點，因此廣泛應用于天然藥物的開發和應用. 本文通過使用不同有機溶劑提取中草藥蒲公英中的多種有效成分，采用不同方法研究各種提取物的抗氧化效果，并基于網絡藥理學鑒定其作用靶點和機制，從而為探索蒲公英藥用成分防治相關臨床疾病機理的研究提供參考數據.

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器

蒲公英購自牡丹江大藥房； 各種有機試劑購自北京化工廠； 異鼠李素和齊墩果酸購自貴州迪大生物科技有限公司；? 1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）和鄰苯三酚購自成都生物股份有限公司.

2665型高效液相色譜儀（美國Waters公司）； SP-756P型紫外可見光光度計（上海光譜儀器有限公司）.

1.2 實驗方法

1.2.1 制備蒲公英提取物

將1.8 kg蒲公英粉碎，過200目篩后用體積分數為95%的乙醇浸泡24 h，浸泡過程中間歇攪拌，重復浸提3次， 采用旋蒸浸提液的方法得到蒲公英乙醇浸膏.

將蒲公英乙醇浸膏用石油醚、 二氯甲烷、 乙酸乙酯和正丁醇4種不同極性的有機溶劑進行萃取至無色，收集各有機相萃取液，分別得到蒲公英正丁醇相（主要含極性較大的物質）、 蒲公英二氯甲烷相（主要含黃酮類和生物堿類化合物）、 蒲公英乙酸乙酯相（主要含有機酸類和香豆素類化合物）和蒲公英石油醚相（主要含油脂和三萜類化合物［7］）.? 旋蒸萃取液，得到浸膏，蒸干，最終獲得蒲公英石油醚相提取物11.41 g、 乙酸乙酯相提取物14.05 g、 二氯甲烷相提取物8.02 g和正丁醇相提取物12.09 g.?稱取1 mg的蒲公英各有機相提取物溶解后，配制成質量濃度分別為0.8，0.6，0.4，0.2 mg/mL的提取物待測溶液.

1.2.2 提取物的抗氧化效果

1） 清除羥基自由基（?·OH）.? 在正常有氧代謝過程中，?·OH是一種代謝的副產物. 在一定條件下， 當機體內線粒體中的過氧化物和H2O2酶活力降低時，H2O2和超氧化物會增加，二者使更具活力的?·OH也增加，從而使細胞受到更大的損傷. 本文基于鄰二氮菲與Fe2+形成氧化還原指示劑配合物的原理，測定不同質量濃度的蒲公英各相提取物對?·OH的清除效果［7］.

2） 清除超氧自由基（O2-?·）.?超氧自由基也稱為過氧自由基，可導致人體免疫力低下、 疲勞、 器官病變、 心血管疾病、 癌癥和糖尿病等，嚴重危害人體健康. 本文參考文獻［7］的方法，利用加入抗氧化物質可降低鄰苯三酚自氧化速率的原理，分別檢測不同質量濃度樣品中O2-?·的含量，根據公式計算蒲公英各相提取物對O2-?·的清除率.?3） 清除DPPH自由基（DPPH?·）.??DPPH?·是一種以氮為中心穩定的自由基，其穩定性依賴于3個苯環的共軛效應以及空間上的阻滯，這種阻隔可使未與氮原子成對的電子形成適當配對. 由于分子中含有N，O和C等極性基團，因此具有較強的氧化還原性能，并且容易被還原生成相應的醛和酮.

參考文獻［8］的方法，取3支具塞試管，分別標記為1，2，3. 向1號試管中加入DPPH溶液（2.5 mL）和蒲公英不同相提取物溶液（1.5 mL）， 向2號試管中加入DPPH溶液（2.5 mL）和體積分數為95%的乙醇溶液（1.5 mL）， 向3號試管中加入蒲公英不同相的提取物溶液（1.5 mL）和體積分數為95%的乙醇溶液（2.5 mL），黑暗條件下反應20 min. 分別用分光光度計檢測1～3號試管中溶液的OD525吸光值. 根據文獻［8］中公式計算DPPH?·的清除率.

1.2.3 HPLC條件

采用高效液相色譜（HPLC）法檢測蒲公英活性物質，色譜柱為C18柱. 齊墩果酸流動相： V（乙腈）∶V（水）=9∶1，檢測波長為210 nm； 異鼠李素流動相為V（甲醇）∶V（（φ=0.4%）磷酸）=45∶55. 檢測波長為360 nm，流速為1 mL/min，柱溫為室溫（約24 ℃），進樣量為10 μL，平行進樣3次.

1.2.4 蒲公英抗氧化相關靶點及通路分析

基于Symmap數據庫（https：//www.symmap.org）獲取蒲公英活性成分，并通過Pubchem（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov）和SwissTargetPrediction（https：//swisstargetprediction.ch）獲取蒲公英有效靶點. 基于GeneCards數據庫（https：//www.genecards.org）獲取抗氧化的相關靶點. 將上述得到的靶點分別輸入Venny2.1.0（https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny）中，篩選出蒲公英抗氧化共有靶點. 將其輸入Metascape數據庫（https：//metascape.org）以及KOBAS（https：//kobas.cbi.pku.edu.cn/kobas3）中分別進行GO和KEGG富集分析，其中P≤0.01.

1.3 統計分析

采用SPSS15.0軟件進行數據統計分析.

2 結果與討論

2.1 蒲公英各相提取物的抗氧化效果

研究表明，蒲公英各相提取物對?·OH，O2-?·和DPPH?·均有一定的清除能力，如圖1所示. 由圖1可見，蒲公英乙酸乙酯相和二氯甲烷相提取物的清除效果較好，當ρ（乙酸乙酯相）=0.6，0.8 mg/mL時，對?·OH，O2-?·和DPPH?·的清除率分別為76.09%和89.74%，53.48%和56.12%，92.34%和86.48%；? ρ（二氯甲烷相）=0.6，0.8 mg/mL時，對?·OH，O2-?·和DPPH?·的清除率分別為68.8%和70.6%，63.95%和68.71%，76%和79.57%，與1 mg/mL Vc溶液對三者的清除率相近.

2.2 HPLC檢測蒲公英活性物質結果

通過高效液相法繪制標準曲線，齊墩果酸： y=4 654.1x-6 510.7，R2=0.998 2； 異鼠李素： y=13 501x+349 330，R2=0.999 1.?研究表明： 黃酮類化合物具有抗氧化效果［8］，本文通過反高效液相色譜法發現在蒲公英乙酸乙酯相提取物中存在大量的異鼠李素，其保留時間為16.960 min，質量比為1.26 g/kg，得率為0.09%；? 藥物植物中三萜類化合物具有一定的抗氧化效果［8］，在蒲公英各相提取物中均存在一定量的齊墩果酸，其中在乙酸乙酯相和二氯甲烷相中含量較大，乙酸乙酯相中齊墩果酸的質量比為0.96 g/kg，得率為0.07%，二氯甲烷相中齊墩果酸的質量比為0.85 g/kg，得率為0.1%.

2.3 蒲公英抗氧化的相關靶點及富集分析

檢索Symmap數據庫并篩選得到蒲公英有效成分9種，有效靶點487個，有效成分包含槲皮素、 β-谷甾醇、 甜菜堿、 亞麻酸、 咖啡酸乙酯、 菊花黃素、 咖啡酸甲酯、 蒲公英賽醇和葉黃呋喃素. 檢索GeneCards數據庫并篩選得到抗氧化靶點1 027個，取交集得共有靶點為137個，如圖2（A）所示. 在String數據庫中得到靶點互作關系，用Cytoscape可視化有效成分和靶點關系圖，如圖2（B）所示. 對共有靶點進行GO富集分析，結果表明， GO富集分析主要集中在膜筏上，蒲公英通過細胞對無機物的反應、 對氮化物的反應和對營養水平的反應起抗氧化作用. KEGG 通路富集分析表明，蒲公英抗氧化與癌癥信號通路、 NF-κappa B信號通路和PPAR信號通路等密切相關，如圖3所示.

a. 對無機物質反應; b. 細胞對氮化合物反應; c. 防御反應調節; d. 通過細胞調節分泌物; e. 細胞對有機環狀化合物反應; f. 細胞遷移正向調節; g. 循環系統過程; h. 對氧氣水平降低反應; i. 對營養水平反應; j. 對異種生物質刺激反應; k. 蛋白磷酸化調節; l. 絲氨酸蛋白/蘇氨酸蛋白/酪氨酸激酶蛋白活性;? m. 生長調節; n. 有機羥基化合物代謝過程; o. 小分子代謝過程調控; p. 腺體發育; q. 對β-淀粉樣蛋白反應; r.? 膜筏; s. 活性氧代謝過程調控; t. 節律過程.

目前，我國約有70種蒲公英，其分布廣泛，主要生長在中、 低海拔地區的山坡路邊、 田野、 草地和河灘等地. 蒲公英化學成分較復雜， 有酚酸類、 黃酮類、 多糖類、 酚類化合物、 三萜、 氨基酸、 脂肪酸、 木質素、 生物堿和礦物質等. 目前研究較多的黃酮類化合物有咖啡酸、 木犀草素、 綠原酸和異鼠李素等成分［9-10］. 本文研究表明： 在蒲公英乙酸乙酯相提取物中含有一定量的異鼠李素，但沒有槲皮素、 金絲桃苷和山奈酚等幾種黃酮類化合物； 在二氯甲烷相和乙酸乙酯相提取物中檢測到三萜類成分齊墩果酸.

人體生命活動過程中產生的自由基可破壞機體的組織和細胞，阻礙細胞間的通訊，損傷機體的代謝功能，從而導致疾病發生，這也正是清除自由基和提高抗氧化作用受到人們重視的原因［11］. 已有研究表明蒲公英具有一定的抗氧化效果［12-13］，本文證明蒲公英二氯甲烷相和乙酸乙酯相提取物對?·OH，O2-?·和DPPH?·均有不同程度的清除能力. 齊墩果酸和異鼠李素具有體外清除自由基的效果［14-17］;? 齊墩果酸具有清除?·OH和O2-?·的能力，且具有劑量依賴性； 異鼠李素作為一種黃酮類化合物具有清除DPPH?·和ABTS?·的能力，且隨著濃度增加抗氧化效果增強， 異鼠李素也可抑制體外肝臟線粒體脂質的過氧化［18］. 本文中蒲公英二氯甲烷相和乙酸乙酯相提取物的抗氧化效果相對較強，這可能是與其活性成分齊墩果酸和異鼠李素的抗氧化作用有關.

網絡藥理學研究表明，蒲公英的有效成分主要包括槲皮素、 甜菜堿、 亞麻酸、 β-谷固醇等，其中STAT3，MAPK1，MAPK3，VEGFA，AKT1，SRC和ESR1等多種靶點相互作用使其具有抗氧化的作用. 如VEGFA作用于內皮細胞可誘導血管生成、 內皮細胞生長、 促進細胞遷移、 抑制細胞凋亡［19］； MAPK1和MAPK3均為一種細胞外信號調節激酶，其參與細胞的增殖、 分化、 轉錄和調控，并最終影響個體發育和組織器官再生等［20］. 這些靶點大多數富集在HIF-1、 癌癥通路和內分泌抵抗等信號通路上. 其中共有20個靶點富集在內分泌抵抗信號通路上. ERBB2突變會導致乳腺癌病人發生內分泌抵抗，ERBB2擴增和表達上升將會為乳腺癌的治療增加不可預測性［21］. 有42個靶點聚集在癌癥通路上，在缺氧時調節VEGF的信號傳導途徑中， HIF-1起中樞紐帶作用，可使VEGF的mRNA穩定性增加并增加VEGF的轉錄活性，抑制VEGF途徑被確認為是一種有效的抗癌模式. Src基因產物c-Src在人類多種腫瘤細胞中過度表達并高度激活，研究Src抑制劑可為治療多種癌癥提供新的可能. 這些都預示蒲公英將有可能通過調節機體的氧化應激損傷起到治療癌癥的作用［22］.

綜上所述，蒲公英各相提取物均具有不同程度的抗氧化作用，其中乙酸乙酯相提取物的抗氧化效果最佳，這是齊墩果酸和異鼠李素的抗氧化作用所致. 蒲公英的抗氧化功能通過多靶點、 多通路相互作用和共同調節完成，其抗氧化作用可能對乳腺癌和其他多種癌癥的治療有效.

參考文獻

［1］ 劉佳慧，劉陽，王冬梅. 蒲公英根提取物的體內抗氧化活性 ［J］. 西北民族大學學報（自然科學版），2018，39（2）： 53-56. （LIU J H， LIU Y， WANG D M.? Antioxidant Activity of Dandelion Root Extract in vivo? ［J］.? Journal of Northwest University for Nationalities （Natural Science）， 2018，39（2）： 53-56.）

［2］ 陳瑞軍，王秋元，喇孝瑾，等. 蒲公英藥用研究進展 ［J］. 現代中西醫結合雜志，2021，30（5）： 563-567.?? （CHEN R J， WANG Q Y， LA X J， et al.? Research Progress of Dandelion Medicinal Use? ［J］.?? Modern Journal of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine， 2021，30（5）： 563-567.）

［3］ 曹輝，左紅娟，王峰，等. 不同產地的蒲公英品種生長差異分析 ［J］. 陜西農業科學，2021，67（12）： 46-48.? （CAO H， ZUO H J， WANG F， et al.? Analysis of Growth Difference in Dandelion Varieties from Different Areas ［J］.? Shaanxi Agricultural Sciences， 2021，67（12）： 46-48.）

［4］ 許先猛，董文賓，盧軍，等. 蒲公英的化學成分和功能特性的研究進展 ［J］. 食品安全質量檢測學報，2018，9（7）： 1623-1627. （XU X M， DONG W B， LU J， et al.? Research Pogress on the Chemical Composition and Functional Properties of Dandelion ［J］.? Journal of Food Safety? and Quality， 2018，9（7）： 1623-1627.）

［5］ 岑麗航，肖瑞琳，李苗，等. 蒲公英的抗癌抗炎機制研究進展 ［J］. 國際藥學研究雜志，2020，47（11）： 954-961.?? （CEN L H， XIAO R L， LI M， et al.?? Antitumer and Anti-inflammatory Mechanism of Taraxacum： Research Advances ［J］.? Journal of International? Pharmaceutical Research， 2020，47（11）： 954-961.）

［6］ 趙佳琪，宋玉國，孟桂先，等. 蒲公英抗白血病作用機制及其臨床應用 ［J］. 吉林醫藥學院學報，2021，42（2）： 148-150.? （ZHAO J Q， SONG Y G， MENG G X， et al.? Dandelion Anti-leukemia Mechanism and Its Clinical Application ［J］.? Journal of Jilin Medical University， 2021，42（2）： 148-150.）

［7］ 張蕾，李秋雙，郝婧瑋，等. 高效液相色譜法檢測紫蘇梗提取物活性成分及抗氧化效果 ［J］. 吉林大學學報（理學版），2020，58（4）： 1020-1025.? （ZHANG? L， LI Q S， HAO J W， et al.? Active Components and? Antioxidant Effects of Perilla stem Extract by HPLC ［J］.? Journal of Jilin University （Science Edition）， 2020，58（4）： 1020-1025.）

［8］ 張蕾，王璐瑤，付學奇，等. 山奈酚的優化提取及生化性質 ［J］. 吉林大學學報（理學版），2022，60（1）： 175-181.?? （ZHANG?? L， WANG L Y， FU X Q， et al.? Extraction Optimal? of Kaempferol and Biochemical Properties? ［J］.? Journal of Jilin University （Science Edition）， 2022，60（1）： 175-181.）

［9］ 鄔丹，高洋，崔賀銘，等. 蒲公英化學成分及其治療前列腺疾病的研究進展 ［J］. 長春中醫藥大學學報，2020，36（5）： 1084-1087.? （WU D， GAO Y， CUI H M， et al.? Research Progress on Chemical Constitunets of Dandelion? and Its Treatment of Prostate Disease ［J］.? Journal of Changchun University of? Chinese Medicine， 2020，36（5）： 1084-1087.）

［10］ 聶文佳，徐帥師，張詠梅. 蒲公英有效成分及其藥理作用研究進展 ［J］. 遼寧中醫藥大學學報，2020，22（7）： 140-145. （NIE W J， XU S S， ZHANG Y M.? Advances in the Study of Effective Components and Pharmacological? Action of Dandelion ［J］. Journal of Liaoning University of TCM， 2020，22（7）： 140-145.）

［11］ MIEK M，MARCINKOV D，LEGTH J. Polyphenols Content，Antioxidant Activity，and Cytotoxicity Assessment of Taraxacum officinale Extracts Prepared through the Micelle-Mediated Extraction Method ［J］.? Molecules， 2019，24（6）： 1025-1-1025-14.

［12］ 李婧雯，包怡紅. 不同溶劑的蒲公英根提取物的抗氧化活性及降糖能力比較分析 ［J］. 現代食品科技，2020，36（5）： 64-72.? （LI J W， BAO Y H.? Comparative Analysis of Antioxidant? and Hypoglycemic Capacity of Taraxacum mongolicum Root Extract in Different Solvents ［J］.? Modern Food Science and Technology， 2020，36（5）： 64-72.）

［13］ LIS B，ROLNIK A，JEDREJEK D，et al.? Dandelion （Taraxacum officinale L.） Root Components Exhibit Anti-oxidative and Antiplatelet Action in an in vitro Study ［J］. Journal of Functional Foods，2019，59： 16-24.

［14］ CAI L L，CHEN B H，YI F L，et al.? Optimization of Extraction of Polysaccharide from Dandelion Root by Response Surface Methodology：? Structural Characterization and Antioxidant Activity ［J］. International Journal of Biological Macromolecules，2019，140： 907-919.

［15］ 曹永富，李廣云，趙丹，等.? 銀杏葉黃酮主要組分及其配比的抗氧化性作用 ［J］. 林業科技，2021，46（4）： 10-14.?? （CAO Y F， LI G Y，ZHAO D， et al.? Antioxidant Effects of? Main Components? of Ginkgo Biloba Flavonoids and Their Proportions ［J］.? Forestry Science & Technology， 2021，46（4）： 10-14.）

［16］ 孫麗萍，穆雪峰，施海燕，等.? 北京洋槐蜜化學成分及其抗氧化活性 ［J］. 食品科學，2012，33（9）： 77-80.?? （SUN L P， MU X F，SHI H Y， et al.? Chemical Components and Antioxidant Activity of? Acacia Honey from Beijing ［J］.? Food Science， 2012，33（9）： 77-80.）

［17］ 肖穎，余英才，余雄英，等. 異鼠李素和槲皮素抗氧化活性研究 ［J］. 時珍國醫國藥，2012，23（5）： 1118-1120.?? （XIAO Y， YU Y C，YU X Y， et al.? Study on the Antioxidant Activity of Isorhamnosin and Quercetin ［J］.? Lishizhen Medicine and Materia Medica， 2012，23（5）： 1118-1120.）

［18］ YANG X， YANG J Y， PAN M F， et al.? Preparation and Identification of Reference Materials Isorhamnomycin and Rutin in Seabuckthorn Fruit Powder ［J］.? Journal of Instrumental? Analysis， 2022， 41（5）：? 682-691.

［19］ 段玉青，夏寧，賈云瀧，等.? SRSF1通過調控VEGFA mRNA可變剪接促進食管鱗狀細胞癌Eca9706細胞增殖、 侵襲和遷移 ［J］. 中國癌癥雜志，2022，32（3）： 191-199.?? （DUAN Y Q， XIA N， JIA Y L， et al.? SRSF1 Promotes Proliferation， Invasion and Migration of Esophageal Squamous Cell Carcinoma Eca9706 Cells? by Regulating VEGFA mRNA Alternative Splicing ［J］.? China Oncology， 2022，32（3）： 191-199.）

［20］ 張倩楠，賈琴琴，楊婷婷，等.? MAPK1基因沉默對肺癌A549細胞增殖、 凋亡、 遷移和侵襲能力的影響 ［J］. 寧夏醫科大學學報，2022，44（4）： 373-379.?? （ZHANG Q N， JIA Q Q， YANG T T， et al.? Effects of MAPK1 Gene Silencing on? Proliferate， Apoptosis， Migrate and Invade of Lung Cancer A549 Cells ［J］.? Journal of Ningxia Medical University， 2022，44（4）： 373-379.）

［21］ 張蕾，鞏平，孫素蓮. 雌、 孕激素受體與乳腺癌內分泌治療的抵抗 ［J］. 中國腫瘤臨床，1998，25（2）： 151-153.?? （ZHANG L， GONG P， SUN S L.? Resistance of Estrogen Receptors and Endocrine Therapy for Breast Cancer ［J］.? Chinese Journal of Clinical Oncology， 1998，25（2）： 151-153.）

［22］ 楊新玲. 長非編碼RNAs與癌癥通路? ［J］. 生理科學進展，2017，48（4）： 309-314.? （YANG X L.? Long Non-coding RNAs and Cancer Pathways? ［J］.? Progress in Physiological Sciences， 2017，48（4）： 309-314.）

（責任編輯： 單 凝）