Nesfatin-1、瘦素在肥胖兒童的表達水平及臨床意義

楊 娟，冷茂東，孫倩倩，方盼盼，弓偉華，楊建麗，任 沖，楊俊梅

(鄭州大學附屬兒童醫院檢驗科/鄭州市兒童感染與免疫重點實驗室，鄭州 450018)

肥胖是由于體內能量攝入和消耗失衡而引起，可以發生于任何年齡。近年來由于社會經濟的發展和人們營養狀況的提高，肥胖發生率越來越高。肥胖和代謝綜合征相關，包括內臟肥胖、高血壓、胰島素抵抗和血脂障礙等，會導致心血管疾病和2型糖尿病，嚴重威脅兒童的身體健康。下丘腦是調節能量平衡的關鍵中樞，且有豐富的肽類調節飽腹感[1]。Nesfatin-1是最近發現的一種使食欲減退的肽類，來源于核連蛋白-2，參與食欲、體重、營養和能量代謝的調節[2-3]。核連蛋白-2表達于中樞神經系統和外周組織，Nesfatin-1由于其親脂性低，可以通過非飽和跨膜擴散跨越血腦屏障。研究表明，肥胖兒童外周血中Nesfatin-1水平不同于體重正常兒童，可能參與體重的調節[4-5]。瘦素主要由脂肪組織分泌，能夠引起動物產生飽腹感，從而攝食減少，且增加能量消耗。血清中瘦素水平在肥胖患兒相對于正常體重患兒明顯增高[6]。目前國內外對Nesfatin-1在肥胖患兒血清水平的研究數量有限，且研究結論存在分歧，缺少肥胖患兒血清Nesfatin-1與瘦素水平的相關性研究，因此，本研究旨在探討Nesfatin-1與瘦素在肥胖患兒血清中的水平，并分析二者的臨床意義及相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2022年1—4月本院門診或住院的80例患兒為研究對象。排除標準：(1)診斷為內分泌疾病，如甲狀腺功能亢進或減退、庫欣綜合征等；(2)急性或慢性感染性疾病；(3)有藥物使用史，如類固醇或抗精神病藥物；(4)合并慢性疾病，如心血管、胃腸道或呼吸系統疾病等。根據2009年李輝等制訂的2～18歲兒童超重肥胖篩查BMI界值(專家標準)對納入病例是否肥胖進行診斷，并分為肥胖組和對照組，每組40例。

1.2 方法

1.2.1身體指標測量

使用身高體重測量儀測量每個研究對象的身高與體重。其中測量體重時，研究對象需要脫去鞋子并穿質量較輕的衣服，身高體重的測量分別精確到0.1 cm和0.1 kg。BMI(kg/m2)=體重/身高的平方。

1.2.2血清指標檢測

肥胖組和對照組在空腹8～12 h狀態下抽取靜脈血3 mL，靜置0.5 h后離心獲取血清，以進行后期相關指標的檢測。采用貝克曼全自動生化分析儀(AU5800)檢測血清中血糖、甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、丙氨酸氨基轉移酶(ALT) 和天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)的濃度。采用羅氏化學發光分析儀(cobas 602)檢測血清中胰島素水平。胰島素抵抗的穩態模型評估(the homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR)的計算方式為：HOMA-IR=空腹胰島素×空腹血糖/22.5。青春前期兒童HOMA-IR>2.5和青春期兒童HOMA-IR>4.0定義為胰島素抵抗(insulin resistance,IR)[7]。

1.2.3血清中Nesfatin-1和瘦素水平的檢測

采用基于ELISA原理的商品化試劑盒(武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司)對血清中Nesfatin-1和瘦素水平進行檢測，線性相關性系數≥0.990，批內變異系數<10%。每份血清標本50倍稀釋，根據試劑盒說明書進行ELISA操作，使用安圖酶標儀(PHOMO)在450 nm波長處測量各個反應孔的吸光度(A)值。采用倍比稀釋的方法，將1 000 ng/L的Nesfatin-1和瘦素標準品工作液分別配置成1 000.00、500.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.63、0 ng/L的標準品工作液，用于標準曲線的制作。根據制作的標準曲線的公式計算每個反應孔對應標本濃度，再乘以50即為標本終濃度。

1.3 統計學處理

2 結 果

2.1 兩組一般資料比較

肥胖組體重和BMI水平高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組一般資料比較(n=40)

2.2 兩組生化指標、Nesfatin-1及瘦素水平比較

肥胖組胰島素、血糖、HOMA-IR、IR比例、甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白、ALT、AST、Nesfatin-1和瘦素水平高于對照組，高密度脂蛋白水平低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組生化指標、Nesfatin-1及瘦素水平比較(n=40)

2.3 Nesfatin-1、瘦素水平與身體指數、各生化指標的相關性分析

肥胖組Nesfatin-1水平與BMI、總膽固醇、低密度脂蛋白和瘦素水平呈正相關，瘦素水平與BMI、總膽固醇、低密度脂蛋白及Nesfatin-1水平呈正相關(P<0.05)。對照組Nesfatin-1水平與年齡、BMI、總膽固醇、低密度脂蛋白及瘦素水平呈正相關，瘦素水平與年齡、BMI、總膽固醇、低密度脂蛋白及Nesfatin-1水平呈正相關(P<0.05)，見表3。

表3 Nesfatin-1、瘦素水平與身體指數、各生化指標的相關性分析

3 討 論

兒童肥胖癥是一種日益嚴重的全球性營養障礙，屬于世界范圍的流行病。這種流行病最初發生在發達國家，由于全球化進展使得該病的高發區逐漸轉移至發展中國家，我國作為最大的發展中國家，肥胖已經嚴重威脅我國兒童的身心健康[8]。

肥胖由體內能量攝入與消耗平衡失調引起，因此，這是一個由神經內分泌系統、消化系統、運動系統等共同參與的過程。食物攝入調節異常會引起體內能量攝入增加，進而導致肥胖。食物攝入受消化系統、脂肪組織和腦飽腹感中心共同控制，多種肽類和激素參與到這個過程的病理生理調節。Nesfatin-1是一種新的厭食性神經肽類，其能夠通過抑制食物攝入而參與到進食行為和體重的調節。瘦素在人體表達情況和作用研究較早，其在肥胖人群中表達水平的相關性研究較多，結論明確，其在肥胖人體中表達水平增高，能夠調節人體的進食行為和體重。但目前少有研究將Nesfatin-1和瘦素共同檢測，并探討二者之間的關聯與臨床意義。

本研究納入40例肥胖兒童作為肥胖組，40例健康對照兒童作為對照組，兩組年齡、性別比較，差異無統計學意義(P>0.05)，因而排除了年齡和性別因素對研究結果的影響。同時，選擇研究對象時排除了存在感染性疾病、內分泌疾病、慢性疾病等可能影響研究結果的因素。在空腹8～12 h后抽取靜脈血，離心獲取血清進行檢測，從而保證檢測結果的準確性。

本研究肥胖組BMI、血糖、甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白、ALT、AST水平高于對照組，而高密度脂蛋白低于對照組，說明肥胖癥能夠影響兒童血脂、血糖代謝狀態引起血脂、血糖水平增高，且增加肝臟負擔從而影響肝功能。肥胖癥是兒童出現IR的主要危險因素[9-10]，由于兒童肥胖癥發生率增加，IR又成為影響兒童健康的重要因素[11]。肥胖組胰島素、HOMA-IR水平及IR比例高于對照組，表明兒童肥胖癥與IR緊密關聯。目前關于肥胖兒童血清中Nesfatin-1水平變化存在分歧，而本研究結果可以作為佐證。有研究發現，Nesfatin-1在營養不良體重過輕兒童血清中水平增高，可能通過抑制食欲發揮作用[12]。而本研究Nesfatin-1和瘦素水平在肥胖兒童血清中也增高，表明在肥胖兒童處于一種耐受狀態，并受到肥胖的影響而代償性增高。

不同研究模型表明Nesfatin-1能夠參與脂質代謝的調節，并影響體重。Nesfatin-1可能是脂質代謝和肥胖及代謝性疾病和心血管系統疾病的關鍵調節因子，可能成為肥胖、心血管系統疾病和代謝性疾病新的治療靶標[13-14]。相關性分析發現肥胖組和對照組血清Nesfatin-1和瘦素水平均與BMI呈正相關，作為食欲和體重調節的兩種重要肽類，其表達水平隨BMI的增高而升高，從而調節肥胖兒童的體重。肥胖組和對照組血清總膽固醇和低密度脂蛋白水平與Nesfatin-1和瘦素水平均呈正相關，由于低密度脂蛋白的主要成分是膽固醇，表明外周血Nesfatin-1和瘦素可能參與膽固醇的代謝調節。血清Nesfatin-1與瘦素水平相關性分析發現，二者在肥胖和健康兒童血清中的水平均呈正相關。由于Nesfatin-1抑制食欲的功能是獨立于瘦素通路發揮作用的[15]，因此，推測Nesfatin-1與瘦素在肥胖兒童體重調節中的作用是相互協同的。對照組血清Nesfatin-1和瘦素水平與年齡呈正相關，表明體重正常兒童血清Nesfatin-1和瘦素水平會受年齡影響。但本研究Nesfatin-1和瘦素水平與年齡的相關性并不存在于肥胖兒童，可能由于在肥胖兒童Nesfatin-1和瘦素的表達水平主要受肥胖影響而升高，年齡的影響可能較小，相對于肥胖是可以忽略的。

本研究的不足之處在于：(1)樣本量較小，未來需要納入更大樣本量進行相關研究。(2)納入病例包括肥胖兒童和健康兒童，而未探討Nesfatin-1和瘦素在營養不良兒童外周血中的表達和臨床意義，未能充分闡釋二者在體重調節中的生物學作用。

綜上所述，Nesfatin-1和瘦素在肥胖兒童表達水平增高，處于一種耐受狀態，并隨BMI增加而代償性增高，從而調節肥胖兒童體重，且Nesfatin-1和瘦素在肥胖兒童體重調節中具有協同作用。體重正常兒童Nesfatin-1和瘦素水平受年齡和BMI共同影響，二者可能參與血清膽固醇水平的調節。