血清可溶性CD25在原發(fā)性膽汁性膽管炎臨床診療中的價(jià)值*

龔燕萍,曹 磊,成翠娥,陸芬英,王 斌,張志成,蔣廷旺△

1.常熟市醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所，江蘇常熟 215500；2.蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院免疫研究所，江蘇蘇州 215006；3.常熟市第二人民醫(yī)院消化科，江蘇常熟 215500；4.常熟市第二人民醫(yī)院重點(diǎn)專科實(shí)驗(yàn)室，江蘇常熟 215500

原發(fā)性膽汁性膽管炎(PBC)是一種以自身免疫介導(dǎo)的肝內(nèi)中小膽管的破壞損傷、肝臟門靜脈管道的淋巴細(xì)胞浸潤為主要特征自身免疫性肝病(AILD)[1-2]。該病好發(fā)于中老年女性(40～60歲)，其早期臨床表現(xiàn)為輕度乏力和間歇性瘙癢，半數(shù)患者出現(xiàn)輕度肝大，將近1/4患者有脾大的現(xiàn)象[3-4]。血清學(xué)主要表現(xiàn)為堿性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰胺轉(zhuǎn)肽酶(GGT)異常升高，自身免疫性抗線粒體抗體(AMA)或特異性抗核抗體(GP210、SP100)、抗早幼粒細(xì)胞白血病蛋白(PML)出現(xiàn)陽性[5-8]。目前為止，治療PBC常用的藥物仍然為熊去氧膽酸(UDCA)，但經(jīng)過UDCA治療后，仍有30%～40%的患者沒有達(dá)到理想效果[9-10]，而PBC晚期患者除進(jìn)行肝移植外，尚無有效治療方法，而且移植術(shù)后復(fù)發(fā)率較高。目前，PBC發(fā)病機(jī)制尚不明確，可能是遺傳易感性和環(huán)境觸發(fā)等多因素共同作用引起自身免疫功能紊亂，導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞特異性攻擊膽管上皮細(xì)胞[11]。可溶性CD25(sCD25)由白細(xì)胞介素(IL)2受體α鏈(CD25)在免疫激活時(shí)脫落形成。因此sCD25水平升高被認(rèn)為是持續(xù)免疫反應(yīng)的標(biāo)志，可用于監(jiān)測免疫介導(dǎo)的疾病。在噬血細(xì)胞性淋巴組織細(xì)胞增生癥(HLH)和T細(xì)胞淋巴瘤等疾病中，sCD25水平顯著增高，并且分別與診斷和預(yù)后相關(guān)[12-13]。在結(jié)節(jié)病等肉芽腫病中，sCD25也可用作監(jiān)測疾病活動(dòng)的生物標(biāo)志物[14]。但在PBC患者中sCD25的表達(dá)水平鮮有文獻(xiàn)報(bào)道，因此，本研究通過分析sCD25和IL-6在PBC患者血清中的水平及與疾病相關(guān)性，探討sCD25在PBC臨床診療中的作用及其潛在價(jià)值。

1 資料與材料

1.1一般資料 將2021年2月至2021年6月常熟市第二人民醫(yī)院收治的37例初治PBC患者納入研究作為PBC組，其中女性患者30例，年齡40～87歲，平均62歲；男性患者7例，年齡38～72歲，平均60歲。體檢健康者50例作為對照組，其中女性35例，年齡47～78歲，平均63歲；男性15人，年齡34～71歲，平均57歲。兩組間性別構(gòu)成比、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。PBC患者納入標(biāo)準(zhǔn)[15]：同時(shí)具備下列3條中的2條者可診斷為PBC。(1)血清ALP、GGT升高；(2)免疫熒光法AMA≥1∶40或者酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測AMA呈陽性；(3)肝活檢組織病理學(xué)顯示典型的肉芽腫性膽管炎、匯管區(qū)淋巴細(xì)胞聚集、小葉間膽管破壞、數(shù)目減少，細(xì)小膽管增生，可伴有纖維化和肝硬化。排除標(biāo)準(zhǔn)：有病毒性肝炎、藥物誘導(dǎo)性肝炎、酒精性肝病、自身免疫性肝炎、原發(fā)性硬化性膽管炎者。所有研究對象均簽署知情同意書。本研究取得常熟市第二人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2試劑與儀器 -80 ℃超低溫冰箱(美國賽默飛公司),離心機(jī)(中國香港基因公司),酶標(biāo)儀(美國賽默飛公司),全自動(dòng)生化免疫分析儀(德國西門子公司),人源IL-6試劑盒(中國和銳公司),印跡法抗核抗體譜檢測試劑盒(德國歐蒙公司),多重微珠流式熒光抗核抗體譜檢測試劑盒(美國宙斯科技公司),人sCD25檢測試劑盒(蘇州旭光科星抗體生物科技有限公司),ALT、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、GGT檢測試劑(日本世諾公司)、總膽紅素(T-Bil)檢測試劑盒(中國伊普諾康公司)、ALP(中國九強(qiáng))。生化試劑均有對應(yīng)的校準(zhǔn)品。

1.3方法

1.3.1血清標(biāo)本采集 清晨患者空腹時(shí)，采集5 mL外周靜脈血，3 000 r/min，離心10 min，收集上層血清并分裝，于-80 ℃超低溫冰箱中保存。

1.3.2ELISA檢測血清中sCD25和IL-6水平 收集所有受試對象的外周血血清，用雙抗體夾心法進(jìn)行人sCD25和IL-6的ELISA檢測，操作過程均按照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行檢測。最后依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的水平和對應(yīng)的吸光值建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，帶入樣品的吸光值，計(jì)算sCD25和IL-6的水平。

1.3.3血清自身抗體和肝功能檢測 血清自身抗體和肝功能參考課題組之前采用的方法進(jìn)行分析[16]。其中自身抗體AMA采用多重微球流式熒光法和間接免疫熒光法進(jìn)行檢測，抗核抗體GP210和SP100采用免疫印跡法進(jìn)行檢測，速率法檢測ALT、AST和GGT，NPP底物-AMP緩沖液法檢測ALP，氧化法測定T-Bil。

2 結(jié) 果

2.1所有受試者的自身抗體及肝功能指標(biāo)檢測結(jié)果 PBC患者組及對照組的臨床生化檢測標(biāo)志物水平見表1。所有患者的血清ALP、GGT的水均顯著性升高(P<0.001)，且免疫熒光法檢測PBC患者的AMA均大于1∶40，ELISA定量檢測AMA也均呈陽性(弱陽性)，同時(shí)滿足診斷標(biāo)準(zhǔn)的兩點(diǎn)。患者中呈抗核抗體GP210陽性者15例，抗核抗體SP100陽性者6例。PBC患者的其余肝功能指標(biāo)(AST、ALT、T-Bil)與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。

表1 PBC患者組及對照組血清生化檢測指標(biāo)比較

2.2PBC組與對照組血清sCD25和IL-6水平比較 與對照組相比，PBC組血清中的sCD25水平顯著上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(920.6±78.6)pg/mLvs.(166 6.7±107.2)pg/mL，P<0.001]。PBC組血清IL-6水平較對照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(11.96±0.30)U/Lvs.(10.71±0.35)U/L，P=0.008]。

2.3血清中sCD25和IL-6與PBC相關(guān)核抗體間的關(guān)系 PBC組抗-GP210陰性和陽性患者的血清sCD25水平均值分別為1 389.6 pg/mL和2 073.1 pg/mL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；抗-SP100陰性和陽性組血清sCD25水平均值分別為1 590.0 pg/mL和2 063.1 pg/mL，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.104)。PBC組抗-GP210陰性和陽性患者的IL-6血清水平均值分別為11.62 U/L和12.45 U/L，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.170)；抗-SP100陰性和陽性組血清IL-6水平均值分別11.87 U/L和12.86 U/L，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.199)。

2.4PBC患者血清sCD25、IL-6與肝功能指標(biāo)的相關(guān)性分析 進(jìn)一步對PBC患者血清sCD25以及IL-6水平與肝功能各指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，血清sCD25的水平與ALT(r=0.459，P=0.028)、AST(r=0.492，P=0.020)、T-Bil(r=0.442，P=0.039)呈正相關(guān)，而血清IL-6的水平也與ALT(r=0.540，P=0.006)、AST(r=0.431，P=0.045)、ALP(r=0.506，P=0.012)、T-Bil(r=0.593，P=0.004)呈正相關(guān)，見表2。

表2 PBC患者血清sCD25、IL-6與肝功能指標(biāo)相關(guān)性

2.5ROC曲線分析 sCD25取截?cái)嘀? 104 pg/mL時(shí)，靈敏度為91.89%，特異度為85.19%；IL-6取截?cái)嘀?0.26 U/L時(shí)，靈敏度為91.43%，特異度為52.38%，見表3、圖1。由此可見，sCD25水平對PBC組和對照組具有良好的區(qū)分能力，而IL-6對PBC組和對照組的區(qū)分能力則較弱。

表3 sCD25、IL-6 ROC曲線分析結(jié)果

圖1 sCD25、IL-6的ROC曲線分析

3 討 論

PBC是一種比較常見的膽汁淤積性肝病，以慢性、進(jìn)行性、自身免疫為典型特點(diǎn)，其病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確，機(jī)體內(nèi)免疫功能失調(diào)可能是引起該病的原因之一[17-18]。研究報(bào)道證明多種Th1、Th2相關(guān)細(xì)胞參與了PBC的發(fā)生、發(fā)展[19]。IL-6常被用作炎癥疾病的一種血清標(biāo)志物，但事實(shí)上IL-6屬于Th2型細(xì)胞因子，它可參與調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡，在很多自身免疫性疾病中也具有重要的臨床意義[20-21]。CD25是IL-2的受體α鏈(IL-2Rα)，表達(dá)于健康人靜止的T淋巴細(xì)胞表面，誘導(dǎo)T細(xì)胞的增殖和分化[22]。由于IL-2兼有免疫激活和免疫耐受的功能，sCD25也可以通過調(diào)控傳統(tǒng)T細(xì)胞或者調(diào)節(jié)性T細(xì)胞來實(shí)現(xiàn)免疫激活以及免疫耐受的不同效應(yīng)[23]。由于自身免疫性疾病患者中sCD25水平的增加被認(rèn)為反映了持續(xù)的疾病活動(dòng)，因此可以預(yù)期sCD25通過反式激活效應(yīng)細(xì)胞來參與PBC的發(fā)病過程。本研究發(fā)現(xiàn)，PBC患者血清中sCD25、IL-6水平顯著性升高，與對照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。將sCD25和IL-6與PBC患者肝功能指標(biāo)進(jìn)行Pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，均與ALT、AST和T-Bil呈正相關(guān)(P<0.05)，這提示著sCD25和IL-6可能與肝臟病變的進(jìn)展存在相關(guān)性。楊瓊等[17]研究了40例PBC患者中IL-6水平與UDCA療效的相關(guān)性，結(jié)果證明，PBC患者的血清IL-6水平顯著升高，而且發(fā)現(xiàn)IL-6可能參與了PBC的發(fā)病過程，與本文研究結(jié)果一致。

抗-SP100和抗-GP210是PBC兩個(gè)重要的特異性抗核抗體，因而本研究還對sCD25與IL-6的血清學(xué)水平與自身抗體之間的關(guān)系進(jìn)行了初步探討。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抗-GP210陽性組的sCD25水平較陰性組顯著升高(P<0.05)，但抗-SP100陽性組的sCD25水平較陰性組有增加，但增加無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，原因很可能是由于抗-SP100陽性組入組患者過少(n=6)導(dǎo)致；抗-GP210和抗-SP100陽性組的IL-6水平與陰性組相比差異均統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說明相較于IL-6，sCD25在臨床診斷PBC中有更高的價(jià)值且與PBC的臨床預(yù)后可能存在一定的相關(guān)性。ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)sCD25在PBC中曲線下面積為0.893，高于IL-6的0.761，也提示在PBC中sCD25比IL-6更具有潛在應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，PBC患者sCD25水平顯著高于對照組，sCD25與自身抗體抗-GP210以及患者肝功能指標(biāo)存在顯著的相關(guān)性。提示sCD25在PBC實(shí)驗(yàn)室篩查中具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。