基于“崗課賽證”的高效液相色譜法在藥品檢驗技術(shù)中的應(yīng)用

劉竺云，劉曉敏，張茂風(fēng)，袁鷹，陳亞運

（1.泰州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇泰州 225300；2.江蘇省智能制藥產(chǎn)教融合集成平臺，江蘇泰州 225300）

2021 年10 月，中共中央辦公廳、國務(wù)院辦公廳印發(fā)《關(guān)于推動現(xiàn)代職業(yè)教育高質(zhì)量發(fā)展的意見》，提出要“完善‘崗課賽證’綜合育人機制，按照生產(chǎn)實際和崗位需求設(shè)計開發(fā)課程，開發(fā)模塊化、系統(tǒng)化的實訓(xùn)課程體系，提升學(xué)生實踐能力”。“崗課賽證”指結(jié)合專業(yè)對應(yīng)崗位設(shè)置課程，“崗”對應(yīng)工作崗位，“課”指課程體系，“賽”對接職業(yè)技能大賽等，“證”代表職業(yè)技能等級證書，其中，課程體系架構(gòu)與課程內(nèi)容的設(shè)置是關(guān)鍵。

安全性、有效性、質(zhì)量可控性是藥品的特性。為了確保藥品的質(zhì)量，在藥品的生產(chǎn)、貯藏、供應(yīng)和臨床使用等各個環(huán)節(jié)都應(yīng)進行嚴(yán)格的分析檢驗，藥品檢驗是確保藥品質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)，包括藥物生產(chǎn)過程的質(zhì)量監(jiān)控和藥物制劑成品的質(zhì)量檢驗。藥品檢驗技術(shù)是一門研究藥品全面質(zhì)量控制的學(xué)科，是高職高專藥學(xué)及相關(guān)專業(yè)開設(shè)的一門核心課程[1]。課程以基本化學(xué)技術(shù)、應(yīng)用有機化學(xué)、儀器分析、藥物化學(xué)等前期課程的學(xué)習(xí)為基礎(chǔ)，通過系統(tǒng)地講授中國藥典的常規(guī)檢驗分析方法，使學(xué)生掌握藥物分析的基本原理和操作技能。課程中主要學(xué)習(xí)的檢測方法有：薄層色譜法、紅外鑒別法、紫外可見分光光度法、高效液相色譜法。在化學(xué)藥品含量測定方法中最常使用的是高效液相色譜法（英文簡稱HPLC），HPLC 分析不受溫度和樣品沸點限制，有更高的速率、靈敏度[2]，具有非常廣闊的應(yīng)用前景。經(jīng)過近幾十年的發(fā)展，高效液相色譜法的基本理論、儀器裝置等方面的研究趨近成熟，已經(jīng)成為化工、醫(yī)藥、食品等多個領(lǐng)域中頗具應(yīng)用優(yōu)勢的分離分析技術(shù)之一[3-5]。

1 高效液相色譜法在藥品檢驗技術(shù)中的應(yīng)用

1.1 定性分析

在藥品檢驗中，鑒別是藥品檢驗的首項任務(wù)，只有在鑒別無誤的情況下，進行雜質(zhì)檢查和含量測定等分析才有意義。鑒別試驗通常選用藥物的化學(xué)反應(yīng)、紅外特征吸收、紫外—可見吸收特征、色譜行為、生物活性及熔點、旋光性、折光率測定等方法對供試品進行鑒別，做出判斷。在色譜法中，藥品成分與色譜出峰保留時間有很大的關(guān)聯(lián)。在高效液相色譜法中常用的定性分析方法主要有：利用保留時間定性、利用光譜相似度定性、利用質(zhì)譜檢測器提供的質(zhì)譜信息定性。例如頭孢尼西鈉的鑒別（1）試驗的標(biāo)準(zhǔn)為在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應(yīng)與對照品溶液主峰的保留時間一致。對聯(lián)用有質(zhì)譜分析儀的高效液相色譜儀，可以通過比較碎片峰進行比較鑒別。對于色譜法，可以在同等色譜條件下進行定性分析和定量分析，節(jié)省時間成本。

1.2 定量分析

藥品分析主要采取了主成分分析法和針對雜質(zhì)檢查的定量分析。尤其是近幾年，藥品質(zhì)量受到了高度關(guān)注，許多雜質(zhì)逐漸被列為已知雜質(zhì)并需要進行定量分析。在中國藥典中規(guī)定的定量分析方法有內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法、加校正因子的主成分自身對照法、不加校正因子的主成分自身對照法、面積歸一化法。在藥品檢驗中，定量分析結(jié)果以檢驗報告出具，因此，提高定量分析結(jié)果的準(zhǔn)確性尤為重要。諸多因素，如檢測人員、儀器設(shè)備、實驗環(huán)境、化學(xué)試劑、檢測分析方法和檢測程序等均會影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性[6]，在定量分析方法中，色譜法可以克服化學(xué)分析法和光譜法專屬性差的缺點，尤其是復(fù)方制劑，色譜法可以同時分離復(fù)方制劑中的多種組分以測定含量。而且，高效液相色譜儀重復(fù)性高，可自動操作，分析精密度高，可以提高定量分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。目前，高效液相色譜是藥物分析最重要的儀器之一，多用于樣品純度檢測、穩(wěn)定性測試和溶解度測試。

2 HPLC 在藥品檢驗技術(shù)課程中的應(yīng)用

2.1 改革教學(xué)方法

在目前的藥品檢驗技術(shù)課程教學(xué)中，教師多是基于校本教材或者立體化“工作手冊式”活頁教材[7]，以課堂講授和實訓(xùn)教學(xué)為主，教學(xué)質(zhì)量不佳。為了提高教學(xué)質(zhì)量，教師可以利用超星泛雅MOOC 平臺，建立網(wǎng)上資源，包含高效液相色譜法理論知識講解、液相虛擬軟件、色譜保留行為模擬、色譜峰處理軟件、檢驗報告書寫、液相故障排查等模塊。這些模塊有助于學(xué)生獲取知識，并且可以重復(fù)練習(xí)以掌握相關(guān)技能。這種模塊設(shè)計能夠激發(fā)學(xué)生對液相的興趣，并且成功使用虛擬軟件可以提升學(xué)生的成就感。在前期線上學(xué)習(xí)過程中，教師適當(dāng)增加關(guān)于液相使用技巧的教學(xué)小視頻，使學(xué)生能掌握液相使用的規(guī)范操作，發(fā)揮學(xué)生學(xué)習(xí)的自主性。藥品檢驗實訓(xùn)改革需要從三個方面入手：一是加強藥品檢驗實驗室安全教育，增強學(xué)生安全意識；二是著重培養(yǎng)學(xué)生基本操作技能，培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)謹(jǐn)和實事求是的實驗態(tài)度；三是嚴(yán)格要求檢驗原始記錄填寫規(guī)范，使學(xué)生形成標(biāo)準(zhǔn)化檢驗習(xí)慣。教師應(yīng)當(dāng)主動探索改變“教師講，學(xué)生做”的傳統(tǒng)教學(xué)模式，采用項目教學(xué)法，增強學(xué)生的自主性，即教師導(dǎo)入案例，引出任務(wù)，學(xué)生可以根據(jù)任務(wù)進行項目選擇，而后自行分組；每個小組分析項目后，制定相應(yīng)計劃方案，查閱資料文獻，準(zhǔn)備相關(guān)玻璃儀器、試劑、試藥，各組學(xué)生根據(jù)所查資料配制試劑、藥品溶液，再與配對組進行交換，用對方所配試劑、藥品溶液進行實驗，完成任務(wù)，然后進行數(shù)據(jù)處理、整理檢驗記錄，并出具檢驗報告[8]。通過此種方法進一步增強學(xué)生的自主性，培養(yǎng)學(xué)生團隊協(xié)作的精神。

2.2 完善實踐實訓(xùn)條件

校內(nèi)實踐教學(xué)環(huán)節(jié)的主場所是實訓(xùn)基地，在培養(yǎng)學(xué)生分析、解決問題方面發(fā)揮著不可或缺的作用，所以在深化職教改革的過程中，高校需持續(xù)更新實訓(xùn)教學(xué)條件建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)[9]。一方面，建立兼具舉辦職業(yè)技能大賽和培訓(xùn)職業(yè)技能等級證書資質(zhì)的綜合性培訓(xùn)中心。建立綜合性高水平實訓(xùn)基地能夠持續(xù)輸出技能復(fù)合型人才，推動實訓(xùn)基地持續(xù)發(fā)展[10]。與此同時，增加高效液相色譜儀數(shù)量，可以使學(xué)生在分組練習(xí)時不僅懂原理，還熟悉儀器的操作與維護。另一方面，建立園校企產(chǎn)學(xué)研合作平臺[11]，作為學(xué)生認(rèn)知實習(xí)、暑期社會實踐和頂崗實習(xí)的重要基地。對于一些高校而言，短期內(nèi)添置足夠數(shù)量的高效液相色譜儀，使每名學(xué)生人手一臺是較難實現(xiàn)的，建立園校企產(chǎn)學(xué)研合作平臺可以彌補缺少儀器這一短板，學(xué)生既可以練習(xí)高效液相色譜儀的使用，完成學(xué)校的學(xué)習(xí)任務(wù)，又可以熟悉企業(yè)檢驗系統(tǒng)和化驗室管理體系，使學(xué)生畢業(yè)之后可以快速適應(yīng)工作崗位。中國（泰州）醫(yī)藥城園區(qū)有大量醫(yī)藥企業(yè)，每年有很多應(yīng)屆畢業(yè)生在這里就業(yè)，園校企合作有利于中國（泰州）醫(yī)藥城園區(qū)、學(xué)校和企業(yè)多方共同參與人才培養(yǎng)，通過合作，學(xué)校可以保證教學(xué)設(shè)備的及時更新，提升學(xué)生的實驗技能，企業(yè)可以獲得技術(shù)創(chuàng)新，獲得具有更高水平的專業(yè)人才。

2.3 以就業(yè)“崗”位為導(dǎo)向，教學(xué)過程參照藥品檢驗過程

學(xué)校的實驗過程與實際藥企藥品檢驗過程有一定差距。高校實驗室通常為演示性實驗室，不具備藥企藥品檢驗的必要環(huán)境，絕大多數(shù)企業(yè)已經(jīng)通過了中國合格評定國家認(rèn)可委員會（英文名稱為：China National Accreditation Service for Conformity Assessment，英文縮寫為CNAS）實驗室認(rèn)可，而很多高校的實驗室不具備CNAS 實驗室要求的一些資源、設(shè)備管理體系要求。以高效液相色譜儀檢測甲硝唑片的含量測定為例，需要學(xué)生查詢藥典制定方案，依據(jù)方案準(zhǔn)備檢驗器具與儀器，對于該實驗，學(xué)校實驗通常會比較注重實驗操作過程，但是在實際工作中更加注重細節(jié)，例如檢驗過程中最常用的儀器電子分析天平。高校通常觀察、確認(rèn)天平水平以后就開始使用。在藥企實際工作中，電子分析天平每天使用前需要先進行預(yù)熱，在經(jīng)過砝碼校準(zhǔn)天平合格以后方可使用。電子分析天平需要定期做重復(fù)性核查和四角誤差（偏載）核查，這些都是高校不具備的實驗條件。放置電子分析天平的房間的溫濕度也需要達到一定標(biāo)準(zhǔn)，這些都是很多學(xué)校實驗并未關(guān)注的細節(jié)。學(xué)生根據(jù)制定的方案配制溶液、設(shè)置儀器參數(shù)，在此過程中，教師需要向?qū)W生反復(fù)強調(diào)數(shù)據(jù)記錄的及時性。在色譜法實驗操作中，高效液相色譜儀使用前后的沖洗程序以及儀器的維護保養(yǎng)也是不可或缺的。含量測定的計算也屬于重點內(nèi)容，學(xué)生需要掌握含量的計算，而學(xué)校的儀器與企業(yè)的儀器有一定差別，存在更新不及時的問題，因此，學(xué)校需要及時引入新型儀器，更新軟件，使學(xué)生能使用不同軟件計算含量，獲得切合實際需求的崗位技能。由此可見，要使得學(xué)生畢業(yè)即上崗，教學(xué)過程應(yīng)當(dāng)參考企業(yè)真實的檢驗標(biāo)準(zhǔn)，以培養(yǎng)學(xué)生的科學(xué)思維。

2.4 以“課”程內(nèi)容為重點，實施項目化式教學(xué)

以藥品檢驗技術(shù)課程中的項目11《高效液相色譜測定甲硝唑片的含量》為例，共分為以下7 步。第一步，下達任務(wù)通知單，教師下達項目11 的任務(wù)單，要求學(xué)生查閱標(biāo)準(zhǔn)，制定檢測方案，完成相應(yīng)的配制與標(biāo)定任務(wù)。第二步，查閱甲硝唑片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，制定操作規(guī)程，學(xué)生分組查閱藥典，確定甲硝唑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，制定操作規(guī)程；解讀質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，確定檢測操作步驟以及所用到的試劑與試液與儀器；討論交流各組制定的操作規(guī)程，集體討論測定過程要點，教師輔助指導(dǎo)。第三步，樣品預(yù)處理。按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對樣品進行溶解、過濾，脫氣處理。第四步，流動相的配制。按照操作規(guī)程要求配制流動相。第五步，液相色譜儀的操作。打開工作站，設(shè)定色譜儀參數(shù)；調(diào)整基線；進樣，并采集數(shù)據(jù)，打出圖譜。第六步，討論與考評。學(xué)生分組匯報測定過程和測定結(jié)果；教師講注射液檢查的操作要點，點評學(xué)生操作中的問題；學(xué)生完成組內(nèi)互評、組與組互評，教師對小組進行評價。第七步，拓展。教師補充講授色譜操作的相關(guān)知識，學(xué)生也可以通過超星泛雅課程平臺查閱相關(guān)學(xué)習(xí)資料。

2.5 以技能競“賽”為指引，推動課程教學(xué)改革

“藥品檢測技術(shù)”專業(yè)技能大賽由全國食品藥品職業(yè)教育教學(xué)指導(dǎo)委員會主辦，2018 年、2019 年的兩屆大賽由山東藥品食品職業(yè)學(xué)院承辦，兩屆大賽先后有44 所、62 所高職院校累計318 名選手參賽，比賽內(nèi)容包括基礎(chǔ)知識及信息化仿真考核、容量分析技能操作考核、光譜分析技能操作考核和色譜分析技能操作考核四個單元。比賽內(nèi)容涵蓋了藥品檢驗領(lǐng)域所需的主要知識點和技能點，力求通過競賽考查參賽選手利用中、大型分析儀器進行藥品質(zhì)量檢測的能力。技能競賽是學(xué)生綜合能力的檢閱場，能夠為參賽學(xué)生提供高水平競技與切磋的舞臺，藥品檢驗技術(shù)大賽實質(zhì)是課程教學(xué)質(zhì)量的重要體現(xiàn)，教師需要圍繞技能競賽大綱及內(nèi)容進行課程教學(xué)改革，“以賽促教、以賽促學(xué)”，從而不斷提升學(xué)生的實際操作技能[12]。

2.6 以職業(yè)技能“證”書為目標(biāo)，促進高效液相色譜法應(yīng)用技能培養(yǎng)

2019 年4 月，教育部、國家發(fā)展改革委、財政部、市場監(jiān)管總局聯(lián)合印發(fā)《關(guān)于在院校實施“學(xué)歷證書+若干職業(yè)技能等級證書”制度試點方案》，部署啟動“學(xué)歷證書+若干職業(yè)技能等級證書”（簡稱“1+X”證書）制度試點工作。這里的“1”指學(xué)歷證書，“+”代表綜合發(fā)展，“X”指若干個職業(yè)技能證書，學(xué)生在“1+X”證書制度下，完成學(xué)校規(guī)定的學(xué)習(xí)年限和學(xué)分要求，通過考核后由學(xué)校頒發(fā)學(xué)歷證書，也獲得職業(yè)技能證書，兼具教育性和職業(yè)性。

在藥品檢驗技術(shù)課程中，開展“課崗賽證”融通研究和探索，構(gòu)建模塊化教學(xué)模式，尤其是建立起液相模塊，可將紫外分光光度法和紅外分光光度法作為一個重難點內(nèi)容。學(xué)生學(xué)習(xí)掌握液相色譜基礎(chǔ)知識和實驗技能的同時，以課程對應(yīng)崗位的職業(yè)技能需求為導(dǎo)向進行專業(yè)學(xué)習(xí)，知行合一，崗位和學(xué)校知識相匹配。近年來，各院校對各種職業(yè)技能大賽的關(guān)注度較高，調(diào)動了學(xué)生參加職業(yè)技能大賽的積極性。職業(yè)技能大賽對提高學(xué)生職業(yè)能力有天然的優(yōu)勢，契合職業(yè)教育的核心目標(biāo)，教師應(yīng)對有意向參與職業(yè)院校技能競賽和創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)大賽的學(xué)生進行技能培訓(xùn)，實現(xiàn)以賽促教、以賽促學(xué)。教師應(yīng)當(dāng)根據(jù)制藥企業(yè)對儀器化驗員的崗位需求、用人數(shù)量等設(shè)計課程體系，培養(yǎng)畢業(yè)即能上崗、上崗即能操作的高技能人才。

2.7 改革課程考核制度

藥品檢驗技術(shù)是一門以操作為主的課程，要求改革以期末考試成績?yōu)橹鞯目己朔绞剑绕涫谴笮蛢x器高效液相色譜儀模塊。課程要求學(xué)生能根據(jù)《中華人民共和國藥典》正文中不同品種的藥品選擇合適的色譜條件，也需要學(xué)生熟練掌握藥品的溶解、離心、過濾、脫氣等一系列預(yù)處理操作。對色譜的適應(yīng)性進行測試，驗證色譜條件，進行液相色譜的檢驗操作，以及熟練使用色譜工作站采集、處理、分析藥品色譜圖，選擇正確數(shù)據(jù)處理方式，對藥品含量做出判斷，對于這些內(nèi)容，不能僅依據(jù)考試分?jǐn)?shù)考查學(xué)生的學(xué)習(xí)掌握情況。結(jié)合藥品檢驗技術(shù)課程以操作為主的性質(zhì)，可將學(xué)生綜合成績的考核分為三個部分：綜合考核成績=在線學(xué)習(xí)成績（占比為30%）+實訓(xùn)操作成績（占比為30%）+期末筆試成績（占比為40%）。其中：在線學(xué)習(xí)成績=課程視頻（占比為25%）+仿真實訓(xùn)（占比為30%）+章節(jié)測驗（占比為20%）+訪問簽到（占比為5%）+作業(yè)（占比為20%），實訓(xùn)操作成績?yōu)楸緦W(xué)期所有實訓(xùn)項目成績之和/項目數(shù)量，期末考試筆試為理論考核（閉卷）。以往以期末考試成績?yōu)橹鞯恼n程教學(xué)考核體系需要改變，教師可以根據(jù)學(xué)生在藥品檢驗技術(shù)課程實驗中的實踐操作情況及熟練程度有效評價學(xué)生的實際能力。在考核過程中，教師需要充分調(diào)動學(xué)生學(xué)習(xí)的主動性，讓學(xué)生變?yōu)橹鲃訉W(xué)習(xí)。這種全程式、過程化考核方式可以構(gòu)建以培養(yǎng)應(yīng)用型人才為導(dǎo)向的教育模式，使學(xué)生理論學(xué)習(xí)和實踐操作同步發(fā)展[13-14]。

3 結(jié)語

高效液相色譜法可以分離高達80%的有機化合物，廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物、生物活性物質(zhì)、生物大分子等有機物的分離分析，是目前企業(yè)最常用的分離檢測方法之一。近年來，藥品檢驗機構(gòu)呈現(xiàn)增長趨勢，藥品檢驗機構(gòu)進入活躍期。藥品檢驗標(biāo)準(zhǔn)也已轉(zhuǎn)變?yōu)橐詢x器為主的檢驗，高效液相色譜法具有較強的專屬性和較高的靈敏度，在藥品檢驗中的應(yīng)用會日益廣泛。

本文以高效液相色譜法在藥品檢驗技術(shù)中的應(yīng)用為例，對“崗課賽證”融通育人機制進行了討論與研究。總體來看，在對接職業(yè)教育的過程中，將職業(yè)資格證書考核內(nèi)容與專業(yè)課程教學(xué)相銜接，做到課程與考證相結(jié)合、課程與職業(yè)資格證書融合，“以賽促教、以賽促學(xué)”，提升學(xué)生的動手能力，將大大增強學(xué)生的綜合技能。