微小RNA-27a-5p對(duì)抑郁癥大鼠橈骨骨折愈合的影響

王振龍, 劉 勇, 祝 茂, 葉章勇

(1. 西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院 骨傷科, 四川 瀘州, 646000;2. 四川省瀘州市敘永縣中醫(yī)醫(yī)院 骨傷科, 四川 瀘州, 646400)

抑郁癥可損害患者骨代謝機(jī)能, 導(dǎo)致骨組織骨量流失，并影響骨折愈合[1-2]。慢性束縛應(yīng)激可通過誘導(dǎo)炎癥造成抑郁，促炎因子白細(xì)胞介素(IL)-2在其中起關(guān)鍵作用[3-4]。微小RNA(miRNA)-27a在抑郁癥患者中表達(dá)降低[5], 其家族成員miR-27a-5p也具有顯著抑制炎癥功能[6], 且與股骨骨密度呈正相關(guān)[7], 由此推測(cè)miR-27a-5p可能通過其抗炎作用促進(jìn)骨折愈合。骨折修復(fù)是由成骨細(xì)胞和免疫細(xì)胞參與調(diào)控的復(fù)雜過程。IL-2是免疫細(xì)胞分泌的促炎因子，其可通過介導(dǎo)炎癥參與骨折愈合過程。查詢Starbase數(shù)據(jù)庫可知, miR-27a-5p與IL-2之間有結(jié)合位點(diǎn)，預(yù)測(cè)miR-27a-5p可能通過靶向調(diào)節(jié)IL-2促進(jìn)抑郁癥大鼠橈骨骨折愈合。本研究上調(diào)及下調(diào)抑郁癥橈骨骨折大鼠及大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)中miR-27a-5p的表達(dá)，并對(duì)此假設(shè)進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物: SD大鼠，約6周齡，雄性，體質(zhì)量200～220 g, SPF級(jí)，購自斯貝福(北京)生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào): SCXK(京)2019-0010。大鼠飼養(yǎng)在約25 ℃、12 h明暗循環(huán)照明的動(dòng)物房中，相對(duì)濕度約為55%, 大鼠自由取食飲水。

1.1.2 試劑與材料: miR-27a-5p mimics、miR-27a-5p mimics陰性對(duì)照、miR-27a-5p inhibitor、miR-27a-5p inhibitor陰性對(duì)照、miR-27a-5p agomir陰性對(duì)照、miR-27a-5p agomir、miR-27a-5p antagomir陰性對(duì)照、miR-27a-5p antagomir、野生型IL-2 3′-UTR報(bào)告質(zhì)粒、突變型IL-2 3′-UTR報(bào)告質(zhì)粒、miR-27a-5p及IL-2、U6、β-actin引物、大鼠骨保護(hù)素(OPG)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)試劑盒(貨號(hào)D731022-0096)、大鼠核因子κ B受體活化因子配體(RANKL)ELISA試劑盒(貨號(hào)D731112-0096)均購自上海生工生物工程股份有限公司; 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC, 貨號(hào)CP-R131)、大鼠BMSC完全培養(yǎng)基(CM-R131)、大鼠BMSC成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基(PD-008)均購自……