新型冠狀病毒RBD蛋白原核表達及多克隆抗體的制備

彭曉燕 ， 陸盼盼 ， 胡祖權

貴州醫科大學生物與工程學院，貴州省免疫細胞與抗體工程研究中心，貴陽 550025

嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒2（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2， SARS-CoV-2）簡稱新型冠狀病毒，能夠引起嚴重的急性呼吸道疾病，具有極強的傳染性。該病毒在世界范圍內流行并不斷出現新的變異毒株，給全球公共衛生安全帶來嚴峻挑戰和威脅，免疫學診斷和治療是目前研究的重點領域［1-2］。

新型冠狀病毒由囊膜和核衣殼組成，囊膜上主要有表面刺突蛋白（spike protein， S）、膜蛋白（membrane protein， M）和包膜蛋白（envelope protein， E）等3種結構蛋白質［3］，其中S蛋白與其傳染能力及致病機制密切相關。在病毒進入宿主細胞的過程中，S蛋白會被宿主細胞的蛋白酶切割為S1亞基和S2亞基，分別負責受體識別和膜融合［4］。S1亞基又分為N末端結構域（N terminal domain， NTD）和C末端結構域（C-terminal domain， CTD），蛋白晶體結構顯示新型冠狀病毒的CTD為 受 體 結 合 域（receptor binding domain，RBD），主要負責識別細胞表面特異性受體——血管緊張素轉化酶Ⅱ（angiotensin converting enzymeⅡ， ACE2），從而介導病毒與宿主細胞的相互作用［4-6］。因此，阻斷RBD與ACE2的結合能夠阻止新型冠狀病毒進入細胞內，以RBD為靶標的特異性抗體或小分子抑制劑是抗新型冠狀病毒藥物研發的有效策略之一［3，7］。同時，免疫學診斷具有操作簡單、特異性高、重復性好和高效低廉等優點，現已成為臨床上最普遍的檢測手段之一［8-10］，優化基于抗RBD抗體的免疫診斷方法對于新型冠狀病毒的快速初篩和日常監測具有重要意義。

本研究通過基因克隆操作構建原核表達系統，在大腸桿菌中大量表達含有不同標簽蛋白的RBD重組蛋白，并驗證其可溶性和免疫原性，以期為通過抗體庫技術分離抗RBD重組抗體及進一步發展新型冠狀病毒的免疫診療方法奠定基礎。……