基質相互作用分子1/鈣通道蛋白1在哮喘氣道高反應性中的上皮表達和作用

桂 萍, 曾憲聰

(湖北省十堰市人民醫院 呼吸內科, 湖北 十堰, 442000)

哮喘是全球最常見的慢性病之一[1]。氣道高反應性(AHR)是過敏性哮喘的主要特征[2]。AHR與氣道平滑肌(ASM)收縮有關，并受胞質鈣離子(Ca2+)水平調節，突出了Ca2+穩態在哮喘中的重要性[2]。全基因組分析確定了12個與哮喘相關的表觀遺傳相互作用基因，包括基質相互作用分子1(STIM1)[3]。STIM1是一種鈣調節激素，廣泛分布于腎臟、子宮內膜和肺等組織中，可以通過激活鈣通道蛋白1(Oria1)介導鈣庫操縱的鈣內流(SOCE)[4]。因此，本研究假設STIM1可能是與哮喘AHR相關的重要上皮衍生因子，其通過介導Ca2+流入來調節ASM收縮。驗證這一假設，本研究擬通過建立哮喘小鼠模型，探討STIM1/Orail信號通路介導的SOCE在AHR中的作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

36只雌性Balb/c小鼠[8～10 周齡, (20.0±1.1) g]購自北京維通利華實驗動物技術有限公司。小鼠在標準條件[溫度為(22±1) ℃; 濕度為55%～60%; 12 h明暗循環)]下飼養，可自由獲取水和食物。適應1周后，將小鼠隨機分為3組(每組12只)，即對照組(CON)、雞卵清蛋白(OVA)組和OVA+sh-STIM1組(OVA來源于雞蛋，是一種常用的過敏原，可在實驗室嚙齒動物中誘發過敏性肺部炎癥。)。參照文獻[5]中方法建立OVA誘導的小鼠急性哮喘模型。除對照組外，其他組分別在第0、7、14天通過腹腔注射50 μg OVA(純度≥98%, 美國Sigma-Aldrich公司)致敏。小鼠用異氟醚麻醉，連續3 d(第21、22、23天)通過吸入溶解在100 μL生理鹽水中的150 μg OVA進行致敏。對照組采用等量生理鹽水處理。OVA+sh-STIM1組小鼠在第21、22、23天用OVA致敏前8 h, 通過鼻內給予100 μL慢病毒介導的STIM1小干擾RNA[sh-STIM1, 漢恒生物科技(上海)有限公司]。

1.2 慢病毒介導的短發夾載體的構建與感染

對于短發夾RNA (shRNA) 介導的STIM1敲低，用從上海GeneChem Corporation公司購買的STIM1-pGCSIL-GFP質粒產生的慢病毒顆粒轉染細胞。……