強直性脊柱炎患者Th17/Treg相關細胞因子及miR-155與脊柱活動度的關系*

顧維杰 鄭冰 汪池 吳旭強

(成都市第五人民醫院，四川 成都 611130)

強直性脊柱炎是一類慢性炎癥性的關節病變，累及的關節以髖部、頸部、腰部為主[1]。此外，由于強直性脊柱炎患者的骶髂關節、肌腱及其周圍附著點受到炎性細胞的浸潤致使外周關節炎的發生，嚴重影響其生存質量[2-3]。強直性脊柱炎發病原因較為復雜，目前考慮與感染、免疫、環境以及遺傳等因素有關[4]。相關研究發現T淋巴細胞免疫反應在機體自身免疫疾病發生、發展過程中發揮著關鍵作用[5]。輔助性T細胞17(Th17)是近年新發現的一種CD4+細胞亞群，可特異性產生白細胞介素，其和具有抑制炎癥反應的調節性T細胞(Treg)在自身免疫性疾病和機體防御反應中具有重要的意義[6]。微小核糖核酸-155(microRNA-155，miR-155)屬于微小核糖核酸(miRNA)家族中的一員，能調節T細胞的增殖、分化，在自身免疫疾病患者中呈異常表達狀態[7]。本研究就強直性脊柱炎患者Th17/Treg相關細胞因子、miR-155與脊柱活動度關系進行分析，現將研究結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2018年1月～2021年3月我院收治的強直性脊柱炎患者116例，并將其歸為觀察組。根據強直性脊柱炎疾病活動指數(BASDAI)[8]分為活動期(BASDAI≥4，n=52)與穩定期(BASDAI<4，n=64)。納入標準：①所有患者的診斷均符合1984年制定的強直性脊柱炎紐約標準[9]。②近三個月未接受過免疫調節治療。③患者及家屬均知曉同意。④本研究經醫院倫理委員會批準。排除標準：①存在自身免疫、血液疾病者。②心、腦、肝、腎等臟器功能嚴重不全者。③存在精神疾患、意識障礙等依從性差的情況。④存在其他類型風濕性疾病者。⑤處于妊娠期或哺乳期女性。⑥存在感染性疾病者。另選取同期于我院進行健康體檢的健康志愿者97例，設為對照組。

1.2 方法 檢測Th17/Treg相關細胞因子、miR-155表達水平 觀察組在入院第2天、對照組在體檢當日分別抽取空腹靜脈血5 mL，3000 r/min離心15 min，離心半徑10 cm，分離血清，置-80℃保存。采用酶聯免疫吸附測定法(ELISA)檢測Th17/Treg相關細胞因子，即IL-10、TGF-β、IL-17、IL-23水平，儀器為美國貝克曼庫爾特全自動免疫分析儀，試劑盒由深圳欣博盛生物科技有限公司生產。使用人淋巴細胞分離液將外周血單個核細胞分離，采用實時熒光定量反轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測外周血單個核細胞中miR-155的表達，以U6為內參，上游引物：5′-GCGA AAGCATTTGCCAAGAA-3′，下游引物：5′-GCGAA AGCATTTGCCAAGAA-3′。皆嚴格按照說明書進行操作。

1.3 觀察指標 ①對比觀察組和對照組Th17/Treg相關細胞因子、miR-155表達水平。②對比活動期和穩定期強直性脊柱炎患者Th17/Treg相關細胞因子、miR-155表達水平。③采用Bath AS測量指數(BASMI)[10]評價強直性脊柱炎患者的脊柱活動度，包括耳壁距、頸椎旋轉度、腰椎前屈、腰椎側屈、以及內踝間距5個項目，分值越低代表患者脊柱活動度越佳，并對比活動期和穩定期的脊柱活動度。④分析強直性脊柱炎患者Th17/Treg相關細胞因子、miR-155與脊柱活動度的相關性。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 觀察組男性64例，女性52例，年齡23～69歲，平均(36.71±5.98)歲；病程1～9年，平均(3.48±1.72)年。對照組男54例，女43例，年齡22～73歲，平均(37.24±7.56)歲。兩組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2 兩組Th17/Treg相關細胞因子、miR-155表達水平比較 觀察組IL-17、IL-23、miR-155表達水平明顯高于對照組(P<0.05)；兩組IL-10、TGF-β比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組Th17/Treg相關細胞因子、miR-155表達水平對比Table 1 Comparison of Th17/Treg-related cytokines and miR-155 expression levels between the study group and the control group

2.3 活動期和穩定期強直性脊柱炎患者Th17/Treg相關細胞因子、miR-155表達水平比較 活動期IL-17、IL-23、miR-155表達水平明顯高于穩定期(P<0.05)；活動期與穩定期IL-10、TGF-β比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 活動期和穩定期強直性脊柱炎患者Th17/Treg相關細胞因子、miR-155表達水平比較Table 2 Comparison of Th17/Treg-related cytokines and miR-155 expression levels in patients with active and stable ankylosing spondylitis

2.4 活動期和穩定期強直性脊柱炎患者BASMI評分比較 活動期強直性脊柱炎患者BASMI評分(1.74±0.58)分明顯高于穩定期(2.08±0.69)分(t=2.883，P<0.05)。

2.5 強直性脊柱炎患者Th17/Treg相關細胞因子、miR-155與脊柱活動度的相關性Pearson相關系數分析顯示，強直性脊柱炎患者IL-17、IL-23、miR-155表達水平與BASMI評分呈正相關，IL-10、TGF-β表達水平與BASMI評分呈負相關(P<0.05)，見表3。

表3 強直性脊柱炎患者Th17/Treg相關細胞因子、miR-155與脊柱活動度的相關性Table 3 Analysis of the correlation between Th17/Treg-related cytokines, miR-155 and spinal mobility in patients with ankylosing spondylitis

3 討論

強直性脊柱炎的發病較為隱匿，活動期和穩定期往往呈現為交替出現，并且無規律可言；其活動期是機體炎癥反應加劇、病變復發的一種急性表現，每次病變活動發作皆會引起病變加重，致使組織損害、活動受限皆進一步發展，可引起患者脊柱活動度降低[11]。強直性脊柱炎是與HLA-B27存在明確關聯的自身免疫性病變，發病原因包括微生物與宿主間的相互作用、細胞因子網絡的紊亂等多方面[12]。分析強直性脊柱炎患者機體特異性指標的表達情況，不僅可進一步了解發病機制，同時還可為強直性脊柱炎患者的治療提供思路[13]。既往研究顯示強直性脊柱炎患者外周血中miR-155表達可能影響Th17/Treg的平衡[14]，但有關上述指標與脊柱活動度關系的研究較少見。因此，本研究就強直性脊柱炎患者Th17/Treg相關細胞因子、miR-155與脊柱活動度的關系進行探討，為臨床防治提供理論依據。

Th17及Treg細胞是輔助性T細胞中的重要組成部分，參與機體的免疫反應過程[15]。Zeng等[16]研究指出，健康者體內Th17和Treg在分化和成熟方面互相制約，二者呈平衡狀態，并可通過某些細胞因子實施細胞轉化，若體內細胞環境改變，Th17/Treg與細胞免疫失衡，致使病情進一步發展。IL-23屬于促炎性細胞因子的一種，也是Th17的重要存活因子，其活化后可促進IL-17、IL-6的生成[17]。此外，IL-23由樹突狀細胞以及巨噬細胞分泌而來，僅于炎癥刺激時分泌，說明Th17細胞的長期存活依賴于機體的炎癥刺激[18]。IL-17具有強大的致炎性，能誘發促炎性細胞因子的表達，機體受炎性細胞的浸潤，從而造成組織損害[19]。本研究發現，觀察組IL-17、IL-23表達水平明顯高于對照組，且活動期IL-17、IL-23表達水平明顯高于穩定期，而IL-10、TGF-β表達水平并無顯著上升，說明強直性脊柱炎患者體內可能存在Th17與Treg細胞的紊亂。

miR-155是位于21號染色體上因子，其與機體的炎癥免疫反應存在一定的相關性，可通過調節T淋巴細胞的增殖、分化，推動炎癥因子的表達致使機體的免疫反應出現失調[20]。Zhu 等[21]研究表明miR-155參與機體免疫性疾病的發生、發展過程。本研究結果顯示，與對照組相比，觀察組miR-155表達水平明顯增加，且活動期miR-155表達水平明顯高于穩定期，這與既往研究結果報道相似[22]。表明miR-155在強直性脊柱炎患者中呈高表達，且隨著病情的進展miR-155表達水平也隨之上升。BASMI為用于評估患者脊柱功能狀況的評分，能客觀地反應患者脊柱活動度的情況[23]。本研究通過相關性分析顯示，強直性脊柱炎患者IL-17、IL-23、miR-155表達與BASMI評分呈正相關，而IL-10、TGF-β表達與BASMI評分呈負相關，提示Th17、Treg相關細胞因子及miR-155與患者病情的發生、發展有關，可在一定程度上反應患者的脊柱活動情況。但由于本研究納入的樣本量較少，可能導致研究結果出現一定偏倚，后續將擴大樣本量進行深入研究。

4 結論

強直性脊柱炎患者miR-155、Th17相關細胞因子呈高表達狀態、Treg相關細胞因子呈低表達狀態，Th17/Treg呈失衡狀態，且Th17/Treg相關細胞因子、miR-155與患者脊柱活動度具有一定的相關性，可作為臨床評估病情的輔助檢查。