p53基因突變與骨髓增殖性腫瘤臨床特征及預后關系*

李艷秋 丁超 胥國強 劉娟 王欣

(遂寧市中心醫院1.血液科；2.檢驗科，四川 遂寧 629000)

骨髓增殖性腫瘤(Myeloproliferative neoplasms，MPN)是一種因骨髓中一系或多系骨髓細胞持續異常增殖引起的血液系統克隆性疾病，臨床以血栓、出血、脾大等為主要表現，隨著病情進展可轉化為骨髓纖維化及急性白血病，嚴重影響患者生存質量[1-3]。近年來研究發現，絕大多數MPN患者存在不同的基因突變，給臨床MPN的診斷及患者預后評估帶來了極大的便利[4-5]。p53基因是當前發現的與人類腫瘤相關性最高的一種基因，與乳腺癌、食管癌、多發性骨髓瘤的發病、淋巴結轉移及預后關系密切，可為多種腫瘤疾病的靶向治療提供參考依據[6-7]。已有研究證實，p53基因突變在骨髓增生異常綜合征(Myelodysplastic syndromes,MDS)的發生及轉歸中發揮重要作用[8]，但有關p53基因突變在MPN患者中的分布情況研究報道較少。本研究分析了p53基因突變與MPN臨床特征及預后的關系，旨在加強對MPN發病機制的理解，為MPN預后不良高風險人群的篩查提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月～2020年1月我院收治的MPN患者126例。納入標準：①臨床檢查符合2008年WHO頒布的造血和淋巴組織腫瘤分類標準中有關MPN的診斷標準[9]，且均經骨髓檢查、影像學檢查、組織活檢等確診。②患者性別不限，年齡≥18歲，均為初診患者。③一般臨床資料、實驗室資料完整患者。④患者知情同意，簽署知情同意書。排除標準：①合并其他血液腫瘤患者。②既往存在MPN治療史患者。③合并重要臟器功能障礙、自身免疫性疾病、血液系統疾病患者。④存在嚴重認知功能障礙，難以配合治療患者。126例MPN患者中男性71例，女性55例，年齡35～70歲，平均(56.73±10.24)歲；真性紅細胞增多癥(PV)47例、原發性血小板增多癥(ET)64例、原發性骨髓纖維化(PMF)15例。本研究經醫院倫理委員會批準，符合赫爾辛基宣言。

1.2 研究方法

1.2.1 一般臨床資料收集 收集患者的性別、年齡、身體質量指數(BMI)、基礎疾病史(糖尿病、高血壓)、血紅蛋白(HB)、白細胞計數(WBC)、血小板計數(PLT)、骨髓原始細胞比例、脾腫大和血栓栓塞發生情況等一般臨床資料。

1.2.2 染色體核型分析及預后分層 患者就診后行骨髓穿刺術抽取骨髓血0.2～0.3 mL培養骨髓細胞，收集骨髓細胞常規制片，采用G顯帶技術進行核型分析；根據患者染色體核型結果參考國際預后積分系統(IPSS)染色體核型分組標準對患者進行染色體核型預后分層，分為低危、中危和高危。

1.2.3p53基因突變檢測 所有患者均于首次治療前取空腹靜脈血5 mL，低溫離心后分離血漿和血細胞，血細胞層用于提取基因組DNA。取樣品基因組DNA 10～17 ng，采用Ion Torrent檢測平臺中的Ion Ampliseq超高多重PCR靶向技術，富集112個血液腫瘤相關基因。采用二代測序技術檢測p53基因突變情況，平均基因覆蓋率為97.10%，平均測序深度為1314×；測序后數據利用dbSNP、1000genome、polyphen2、cosmic等數據庫進行篩選和突變驗證。

1.2.4 隨訪 所有患者均于確診之日起進行隨訪，隨訪形式包括門診定期隨訪、問卷及電話隨訪。隨訪截止時間為2021年6月30日，中位隨訪時間為20.0(3.0～54.0)個月，總生存(OS)時間定義為確診之日至死亡或末次隨訪時間。

2 結果

2.1 MPN患者p53基因突變情況分析 126例MPN患者中，12例(9.52%)患者檢出p53基因突變，突變分別位于4號(4/12)、6號(3/12)、5號(2/12)、8號(2/12)和7號(1/12)外顯子上。不同類型患者的p53基因突變檢出率比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 不同類型MPN患者p53基因突變情況分析[n(×10-2)]Table 1 Analysis of p53 gene mutations in patients with different types of MPN

2.2p53基因突變患者與非突變患者臨床特點分析p53突變組患者年齡大于p53非突變組，WBC水平低于p53非突變組(P<0.05)；兩組患者的性別、BMI、基礎疾病、HB、PLT、骨髓原始細胞比例、脾腫大和血栓栓塞發生情況比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 p53基因突變患者與非突變患者一般臨床資料比較Table 2 Comparison of general clinical data of patients with p53 gene mutations and non-mutated patients

2.3p53基因突變患者與非突變患者染色體核型及預后分層分析 兩組患者的染色體核型、IPSS預后分層比較差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 p53基因突變患者與非突變患者染色體核型及預后分層分析[n(×10-2)]Table 3 Chromosomal karyotype and prognostic stratification analysis of p53 gene mutation patients and non-mutated patients

2.4p53基因突變與MPN患者預后的關系 截至末次隨訪日，126例MPN患者中24例(19.05%)患者死亡，其中p53突變組死亡5例(41.67%)，p53非突變組死亡19例(16.67%)。p53非突變組患者的OS時間、累計生存率均明顯高于p53突變組患者，差異比較有統計學意義(P<0.05)，見表4、圖1。

表4 p53基因突變患者與非突變患者預后情況分析Table 4 Analysis of the prognosis of patients with p53 genemutations and non-mutated patients

圖1 p53基因突變患者與非突變患者生存曲線Figure 1 Survival curves of p53 gene mutation patients and non-mutantpatients

3 討論

既往研究表明，炎癥因子、表觀遺傳學突變及造血微環境的改變是MPN發生發展的重要因素，隨著全基內組和靶向測序技術的不斷發展，多種基因在MPN發生及轉歸中的作用被揭示[10-11]。p53基因是一種經典的抑癌基因，具有誘導細胞凋亡、基因修復、維持基因組穩定性的作用，其突變或功能缺失會影響細胞正常周期，促進惡性腫瘤的發生發展[12-13]。臨床研究證實，在人類所有的腫瘤中，p53基因突變率高達50%，并且合并p53基因突變的患者預后較未突變者更差[14]。盡管p53基因在實體腫瘤中具有較高的突變率，但其在血液系統腫瘤中的突變率普遍較低，為5%～10%。一項有關人急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)患者p53基因突變的分子遺傳學特征分析研究發現，約有9.1%的AML患者存在p53基因突變[15]。本研究結果顯示，p53基因突變在MPN患者中的發生率為9.52%，與文獻報道基本一致。對p53基因突變位點的研究發現，p53突變位點主要位于4～10號外顯子上[16]。本研究中，MPN患者的p53基因突變位于4～8外顯子，與既往研究結果一致。本研究未發現不同類型MPN患者的p53基因突變檢出率存在差異，提示p53基因突變檢測可能無法為MPN的不同類型鑒別提供依據。

進一步分析不同突變情況患者的臨床資料可知，p53突變組患者年齡大于p53非突變組，WBC水平低于p53非突變組，提示p53基因突變多發生于年長患者，且對患者的WBC水平有一定影響。Li等[17]對MDS患者的p53基因突變情況進行分析，發現p53基因突變在較年長MDS患者中更常見，認為p53基因突變頻率會隨著年齡的增加而逐漸增高。本研究的結果也進一步證實了這一觀點。

染色體核型異常是影響血液系統腫瘤患者預后的重要因素，其中復雜核型被認為是高危核型異常，與患者預后不良密切相關[18-19]。此外，IPPS較高危分組也是影響MDS、AML等血液系統腫瘤患者預后的獨立危險因素[20-21]。本研究發現，p53基因突變患者與非突變患者的染色體核型、IPSS預后分層存在明顯差異，提示p53基因突變與MPN患者的異常核型及中高危IPSS預后分層相關。分析相關原因可能是p53基因突變影響了基因組穩定性，出現染色體異常，從而使患者染色體核型發生變化[22-23]。近年來相關研究表明，p53基因突變在食管癌、乳腺癌中會導致更差的OS，均為獨立的預后不良因素[24-25]。本研究結果顯示，p53非突變組患者的OS時間、累計生存率均明顯高于p53突變組患者，提示p53基因突變會影響患者的預后。

4 結論

骨髓增殖性腫瘤患者p53基因突變發生率較高，與患者年齡、WBC水平、異常核型及IPSS預后分層相關；p53基因突變會影響患者的預后，可作為臨床篩查預后不良高風險人群的客觀指標。