結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)聯(lián)合痰涂片找抗酸桿菌檢測(cè)對(duì)診斷肺結(jié)核的臨床應(yīng)用價(jià)值

陳桂茹，周欣瀅，黃廣榮

廣東省陽(yáng)江市陽(yáng)春市人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣東 陽(yáng)江 529600

0 引言

肺結(jié)核屬于傳染性疾病，具有傳染性強(qiáng)、發(fā)病率高的特點(diǎn)[1-2]，WHO顯示，全球每年增長(zhǎng)800萬(wàn)肺結(jié)核患者[3-4]，其中我國(guó)占16%，因此，不斷完善肺結(jié)核的診斷、治療、預(yù)防等具有重要意義。

1 資料和方法

1.1 一般資料

對(duì)2020年1月-2021年1月前來(lái)本院檢查的260例患者進(jìn)行回顧性分析，臨床診斷表明，活動(dòng)性肺結(jié)核的病例（TB病例）200例及非肺結(jié)核其他肺部疾病病例（non-TB病例）60例。260例患者中，男151例，女109例，最大年齡68歲，最小年齡39歲，中位年齡（49.52±2.07）歲。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①初診為肺結(jié)核可疑癥狀者；②確診TB病例；③確診為non-TB病例；④可提供2～3份合格痰標(biāo)本。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者不同意此項(xiàng)研究；② 痰標(biāo)本劑量少于2mL、唾液痰；③近一個(gè)月內(nèi)抗結(jié)核治療在2周以上。

每個(gè)病例收集即夜晨3份痰標(biāo)本。

1.2 試劑、儀器與方法

應(yīng)用二級(jí)生物安全柜，培養(yǎng)箱，恒溫?cái)U(kuò)增熒光檢測(cè)儀。改良羅氏培養(yǎng)基，結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)試劑盒，所有儀器和試劑均來(lái)自廣州迪澳生物科技有限公司。

恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測(cè)：將3倍體積濃度為4%的NaOH溶液與痰標(biāo)本溶液混合，震蕩15s，常溫條件下液化15min，液化時(shí)間與液化的實(shí)際情況有關(guān)，將攻濃度為14%的氫氧化鈉溶液加入其中，劑量為0.5～1mL，隨后將1mL的液化后樣品倒入螺旋蓋離心管中，離心5min，12000rpm，棄上清。將其與生理鹽水混合，劑量為1mL，再次離心5min，12000rpm，棄上清。加入DNA提取液混合，DNA提取液100μL即可。將其放置在恒溫金屬浴中，100℃條件下儲(chǔ)存10min，離心2min，同樣以12000rpm為標(biāo)準(zhǔn)，收集上清液，-20℃保存?zhèn)溆谩溆肈NA加入到檢測(cè)液中，混合DNA劑量為2.0μL，將其置入恒溫?zé)晒鈾z測(cè)儀中擴(kuò)增，63℃條件下45min的恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)，結(jié)果判讀以儀器給出的曲線和時(shí)間為標(biāo)準(zhǔn)，陽(yáng)性：曲線為S型，40min以下出峰時(shí)間,陰性：擴(kuò)增曲線呈一條直線或傾斜的直線，出峰時(shí)間為0；擴(kuò)增曲線呈S形，在40min以上，需要重新檢測(cè)，出峰時(shí)間在45min以下則為弱陽(yáng)性。

痰涂片參考《痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊(cè)》，痰培養(yǎng)操作流程參照《分枝桿菌分離培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)化操作程序及質(zhì)量保證手冊(cè)》中的方法。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn)

以臨床診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，所有患者進(jìn)行痰涂片、痰培養(yǎng)、恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)、痰涂片與恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)聯(lián)用及痰涂片和痰培養(yǎng)聯(lián)用的5種方法，分別計(jì)算出5種檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性，得出陽(yáng)性檢出率。

陽(yáng)性檢出率=陽(yáng)性例數(shù)／臨床診斷肺結(jié)核病例數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

對(duì)所有患者的臨床數(shù)據(jù)應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 17.0進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采取卡方檢驗(yàn)，用率[n(%)]表示，若P＜0.05，則證明統(tǒng)計(jì)學(xué)意義存在。

2 結(jié)果

痰涂片陽(yáng)性檢出率57.5%，痰培養(yǎng)陽(yáng)性檢出率48.00%，恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)陽(yáng)性檢出率72.00%，痰涂片與痰培養(yǎng)的陽(yáng)性檢出率59.50%，恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)聯(lián)用痰涂片的陽(yáng)性檢出率79.00%；恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)陽(yáng)性檢出率高于痰涂片和痰培養(yǎng)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），痰涂片與恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)聯(lián)用陽(yáng)性檢出率高于痰涂片、痰培養(yǎng)、恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)、痰涂片聯(lián)合痰培養(yǎng)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見(jiàn)表1。

表1 不同檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果分析

3 討論

肺結(jié)核是一種常見(jiàn)的傳染性呼吸系統(tǒng)疾病，臨床主要表現(xiàn)為咳嗽和咯血等，早期癥狀并不明顯，診斷的難度比較大[5-6]，隨著病情的發(fā)展，肺結(jié)核病癥一旦發(fā)病，患者的免疫機(jī)制往往會(huì)出現(xiàn)一定程度的功能障礙[7-8]，會(huì)造成患者呼吸道感染或是衰竭等，為此臨床上應(yīng)該不斷完善肺結(jié)核的診斷、治療和預(yù)防[9-10]，以此保證患者生命財(cái)產(chǎn)安全。目前臨床研究方法較多，總結(jié)如下：其中痰涂片找抗酸桿菌檢查是肺結(jié)核的確診、治療的主要依據(jù)，但是檢查陽(yáng)性率在30%～60%之間，其余均呈現(xiàn)陰性。痰涂片法操作簡(jiǎn)便、快速，價(jià)格低廉[11-12]。而結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群核酸檢測(cè)方法屬于恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)[13-14]，易被污染造成假陽(yáng)性。因此，使用該方法要嚴(yán)格按照操作流程，避免交叉污染[15]。

本次研究結(jié)果顯示：痰涂片陽(yáng)性檢出率57.5%，痰培養(yǎng)陽(yáng)性檢出率48.00%，恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)陽(yáng)性檢出率72.00%，痰涂片與痰培養(yǎng)的陽(yáng)性檢出率59.50%，恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)聯(lián)用痰涂片的陽(yáng)性檢出率79.00%；恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)陽(yáng)性檢出率高于痰涂片和痰培養(yǎng)，痰涂片與恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)聯(lián)用陽(yáng)性檢出率高于痰涂片、痰培養(yǎng)、恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)、痰涂片聯(lián)合痰培養(yǎng)，這與宋紅煥等[16]的研究基本相似，其收集確診的活動(dòng)性肺結(jié)核患者259例及其他呼吸道疾病患者68例痰標(biāo)本，并同時(shí)采用痰涂片、痰培養(yǎng)、恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)以及痰涂片與痰培養(yǎng)聯(lián)用、痰涂片與恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)聯(lián)用進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)，以臨床診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)3種檢測(cè)方法及2種方法聯(lián)用的檢測(cè)效果進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果痰涂片、痰培養(yǎng)、恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)及檢測(cè)方法聯(lián)用的陽(yáng)性檢出率分別為57.1%,74.5%,67.6%，痰涂片與痰培養(yǎng)、恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)聯(lián)用的陽(yáng)性檢出率分別為60.6%、76.1%。恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)陽(yáng)性檢出率高于痰涂片和痰培養(yǎng)，痰涂片與恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)聯(lián)用陽(yáng)性檢出率高于痰涂片、痰培養(yǎng)、恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)、痰涂片聯(lián)合痰培養(yǎng)，以上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

綜上所述，為提高結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平和工作效率，臨床中應(yīng)該應(yīng)用敏感性、特異性高的檢測(cè)方法，痰涂片與恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)聯(lián)用檢測(cè)值得臨床應(yīng)用。