裸花紫珠的化學成分研究

陳倩倩，鄒獻亮，侴桂新, 2*

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裸花紫珠的化學成分研究

陳倩倩1，鄒獻亮3，侴桂新1, 2*

1. 上海中醫藥大學中藥研究所，上海 201203 2. 上海中藥標準化研究中心，上海 201203 3. 萍鄉衛生職業學院，江西萍鄉 337000

研究裸花紫珠葉的化學成分。采用多種現代分離色譜技術進行分離純化，通過波譜數據和理化性質進行結構鑒定，以及ECD確定新化合物的絕對構型；采用CCK-8法對新化合物的細胞毒活性進行篩選。從裸花紫珠葉70%乙醇提取物中分離鑒定出34個化合物，其中化合物1～5為裸花紫珠烷A1（1）、(4,6)-4,6-二羥基-α-松油醇（2）、(1)-2,2-二甲基-3-羥甲基-3-環己烯-1-甲酸（3）、(1,4)-2,2-二甲基-3-亞甲基-4-羥基環己烷-1-甲酸（4）、(1)-2,2-二甲基-4-羥甲基-3-環己烯-1-甲酸（5）；化合物6～34為2,6-二甲氧基-對-苯醌（6）、對薄荷-8-烯-1,2-二醇（7）、天目地黃素B（8）、北玄參素G（9）、黃牡丹醇B（10）、香桂酮（11）、8-羥基-2,6-二甲基-(2,6)-辛二烯酸（12）、8-羥基-2,6-二甲基-(2)-辛烯酸（13）、裸花紫珠烷A（14）、丁子香烷-2β,9α-二醇（15）、丁香烷-1,9β-二醇（16）、(8,9)-異丁香烷-8,9-二醇（17）、()-(＋)-去氫催吐蘿芙葉醇（18）、(3,5,6,7)-5,6-環氧-3-羥基-7-大柱香波龍烯-9-酮（19）、脫落酸（20）、紫珠醌B（21）、12-羥基茉莉酸（22）、(?)-12-羥基茉莉酸甲酯（23）、齊墩果酸（24）、熊果酸（25）、薔薇酸（26）、5,4-二羥基-3,7,3-三甲氧基黃酮（27）、氈毛美洲茶素（28）、5,7,4′-三羥基-3′-甲氧基黃酮（29）、柳葉柴胡酚（30）、九里香亭（31）、芥子醛（32）、香草醛（33）和丁香酸（34）。化合物1～5為新化合物，分別命名為裸花紫珠烷A1～E1，化合物6～13、17～18和31均為首次從馬鞭草科中分離鑒定，化合物30、32～33均為首次在紫珠屬植物中發現，化合物15、21和28均為首次從裸花紫珠中分離得到。體外細胞毒活性篩選結果表明，化合物4對人肝癌HepG2細胞具有細胞毒活性，其半數抑制濃度（half inhibition concentration，IC50）值為24.0 μmol/L。

馬鞭草科；裸花紫珠；裸花紫珠烷A1；(1,4)-2,2-二甲基-3-亞甲基-4-羥基環己烷-1-甲酸；丁子香烷-2β,9α-二醇；紫珠醌B；氈毛美洲茶素；柳葉柴胡酚

裸花紫珠為馬鞭草科植物裸花紫珠Hook. et Arn的干燥葉，在我國主產于海南、廣東、廣西等地，具有消炎、解腫毒、化濕濁、止血等功效，已作為新增藥材收錄于《中國藥典》2020年版[1]。裸花紫珠作為傳統的黎藥而被廣泛應用于臨床[2]，目前上市的裸花紫珠制劑主要為單味藥制劑，包括片劑、顆粒劑和膠囊劑等[3]。有關裸花紫珠化學成分研究逐年增加，包括揮發油、黃酮類、三萜類、二萜類、倍半萜類、環烯醚萜類、苯丙酸、木脂素和苯乙醇苷等，其中二萜類、倍半萜類和環烯醚萜等成分是研究的熱點[4]。為進一步豐富裸花紫珠的化學信息，為闡明裸花紫珠的藥效物質基礎提供資料。本研究對裸花紫珠70%乙醇提取物的二氯甲烷部位化學成分進行系統的分離得到34個化合物，其中化合物1～5為新化合物，命名為裸花紫珠烷A1（1）、裸花紫珠烷B1（2）、裸花紫珠烷C1（3）、裸花紫珠烷D1（4）、裸花紫珠烷E1（5）；其他29個已知化合物分別鑒定為2,6-二甲氧基-對-苯醌（2,6- dimethoxy--benzoquinone，6）、對薄荷-8-烯-1,2-二醇（-menth-8-ene-1,2-diol，7）、天目地黃素B（rehmachinin B，8）、北玄參素G（buergerinin G，9）、黃牡丹醇B（paeoveitol B，10）、香桂酮（subamone，11）、8-羥基-2,6-二甲基-(2,6)-辛二烯酸 [8-hydroxy-2,6-dimethyl-(2,6)-octadienoic acid，12]、8-羥基-2,6-二甲基-(2)-辛烯酸[8-hydroxy- 2,6-dimethyl-(2)-octenoic acid，13]、裸花紫珠烷A（callnudoid A，14）、丁子香烷-2β,9α-二醇（clovane-2β,9α-diol，15）、丁香烷-1,9β-二醇（caryolane-1,9β-diol，16）、(8,9)-異丁香烷-8,9-二醇 [(8,9)-isocaryolane-8,9-diol，17]、()-(＋)-去氫催吐蘿芙葉醇 [()-(＋)-dehydrovomifoliol，18]、(3,5,6,7)-5,6-環氧-3-羥基-7-大柱香波龍烯-9-酮 [(3,5,6,7)-5,6-epoxy-3-hydroxy-7-megastigmen- 9-one，19]、脫落酸（abscisic acid，20）、紫珠醌B（callicarpaquinone B，21）、12-羥基茉莉酸（12-hydroxyjasmonic acid，22）、(?)-12-羥基茉莉酸甲酯 [(?)-methyl 12-hydroxyjasmonate，23]、齊墩果酸（oleanolic acid，24）、熊果酸（ursolic acid，25）、薔薇酸（euscaphic acid，26）、5,4′-二羥基-3,7,3′-三甲氧基黃酮（5,4′-dihydroxy-3,7,3′-trimethoxy- flavone，27）、氈毛美洲茶素（velutin，28）、5,7,4′-三羥基-3′-甲氧基黃酮（5,7,4′-trihydroxy-3′- methoxyflavone，29）、柳葉柴胡酚（salicifoliol，30）、九里香亭（murrangatin，31）、芥子醛（sinapaldehyde，32）、香草醛（4-hydroxy-3-methoxybenzaldehyde，33）、丁香酸（syringic acid，34）。化合物1和14為降半日花烷型二萜，化合物15～23為倍半萜，化合物2～5、7～13為單萜，化合物6為醌類，化合物24～26為三萜，化合物27～29為黃酮，化合物30為木脂素，化合物31為香豆素，化合物32～34為酚酸。并對分離得到的5個新化合物進行體外抗人肝癌HepG2細胞增殖活性篩選，結果表明，化合物4有明顯的抑制HepG2細胞增殖活性，其半數抑制濃度（median inhibition concentration，IC50）值為24.0 μmol/L。

1 儀器與材料

Bruker AVANCE-III型核磁共振波譜儀（400 MHz，內標為TMS，德國Bruker公司）；Waters UPLC Premior Q-TOF質譜儀、e2695型高效液相色譜儀、制備型1260高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；FT-IR紅外光譜儀（PerkinlEmer公司）；制備色譜柱（Shiseido Capcellpak C18，250 mm×20 mm，5 μm，日本資生堂）；Reveleris X2 Flash中壓液相色譜儀（MPLC，美國Grace公司）；Synergy H4酶聯免疫檢測儀（美國BioTek公司）；Sephadex LH-20凝膠（瑞典烏普薩拉阿默森生物科學公司）；MCI GEL CHP20P（75～150 μm，日本東京三菱化學工業公司）；柱色譜硅膠（100～200、200～300、300～400目，中國青島灣精細化工有限公司）；薄層色譜及制備型薄層色譜HSGF254硅膠板（煙臺江友硅膠開發有限公司）；高效液相色譜用乙腈（色譜級，美國Dikma公司）；薄層色譜用試劑均為分析純（中國醫藥集團有限公司）；柱色譜用試劑均為工業級（上海潤捷化學試劑有限公司），CCK-8試劑盒（日本，同仁500T，批號C8216990），96微孔板（Corning 3599，批號02222601），DMEM培養基（美國Gibco公司，批號MA0212-Jun-08H），胰酶-EDTA（美倫生物，批號MA0233-Jul-01H），PBS磷酸鹽緩沖液（美倫生物，批號MA0015-Jun-29H），無水乙醇（分析純，上海國藥化學試劑公司）；紫杉醇（taxol，PTX，質量分數＞98%，批號H15F10X80839，上海源葉生物科技有限公司）

裸花紫珠藥材于2019年6月在海南省五指山采收，由上海中醫藥大學吳立宏教授鑒定為裸花紫珠Hook. et Arn的干燥葉，標本（LHZZ- 20190806）保存于上海中醫藥大學中醫藥研究所標準化研究中心標本室。

2 提取與分離

干燥裸花紫珠葉50 kg，粉碎，用70%乙醇回流提取2次，減壓濃縮得到8.3 kg的干浸膏。干浸膏溶于甲醇后與等量硅膠拌樣，干燥后依次用石油醚、二氯甲烷、醋酸乙酯、甲醇抽提，回收溶劑分別得到石油醚部位（25.8 g）、二氯甲烷部位（129.1 g）、醋酸乙酯部位（657.2 g）和甲醇部位。

二氯甲烷部位經硅膠柱色譜分離（石油醚-醋酸乙酯100∶1～0∶1、醋酸乙酯-甲醇1∶1～0∶1），結合制備薄層色譜（PTLC）分析，合并得到11個組分（Fr. C1～C11）。

Fr. C7經PTLC色譜以石油醚-醋酸乙酯（2∶1）洗脫得到化合物27（20 mg）、28（4.6 mg）。

Fr. C4經MPLC色譜（甲醇-水3∶7～1∶0）分離純化，得到28個亞組分（Fr. C4-1～C4-28）。Fr. C4-5（0.195 g）經Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）等度洗脫得到9個次組分（Fr. C4-5-1～C4-5-9）。Fr. C4-5-2（23.7 mg）經PTLC色譜以石油醚-醋酸乙酯（2∶1）洗脫得到化合物11（13.4 mg）。Fr. C4-14（0.152 g）經過Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）等度洗脫得到8個次組分（Fr. C4-14-1～C4-14-9）。Fr. C4-14-6（34.7 mg）為粗結晶，經二氯甲烷洗脫得到化合物21（6.3 mg）。Fr. C4-27（0.248 g）經硅膠柱色譜（石油醚-醋酸乙酯100∶1～1∶1）洗脫得到12個次組分（Fr. C4-27-1～C4-27-12）。Fr. C4-27-9（140 mg）和Fr. C4-27-11（109 mg）分別經制備液相色譜（乙腈-水65∶35）得到化合物24（40 mg，R＝28.5 min）和25（19 mg，R＝3.5 min）。

Fr. C8（27.0g）經硅膠柱色譜梯度洗脫（石油醚-二氯甲烷5∶1～0∶1、二氯甲烷-甲醇150∶1～0∶1）系統洗脫得到7個不同亞組分（Fr. C8-1～C8-7）。Fr. C8-2（1.479 g）經Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）等度洗脫得到8個次組分（Fr. C8-2-1～C8-2-8）。Fr. C8-2-7（29 mg）經制備HPLC色譜（乙腈-水60∶40）分離純化得到化合物33（6.9 mg，R＝0.7 min）。Fr. C8-3（2.2 g）經Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）洗脫得到9個次組分（Fr. C8-3-1～C8-3-9）。Fr. C8-3-2（2.16 g）經MCI柱色譜（甲醇-水3∶7～1∶0）梯度洗脫得到11個流分（Fr. C8-3-2-1～C8-3-2-11）。Fr. C8-3-2-2（60 mg）經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇100∶1）分離以及制備HPLC（乙腈-水70∶30）純化得到化合物9（6.7 mg，R＝17.4 min）。Fr. C8-3-2-8（53.6 mg）經制備HPLC（乙腈-水60∶40）得到化合物1（9.8 mg，R＝12.4 min）。Fr. C8-3-2-3（60.8 mg）以30%甲醇洗滌晶體得到化合物6（4 mg）。Fr. C8-3-3（243 mg）經Sephadex LH-20柱色譜（甲醇）洗脫得7個流分（Fr. C8-3-3-1～C8-3-3-7）。Fr. C8-3-3-5（51.3 mg）經制備HPLC色譜（乙腈-水15∶85）分離純化得到化合物32（18 mg，R＝5.7 min）。Fr. C8-3-4（59 mg）經制備HPLC（乙腈-水15∶85）分離純化得到化合物30（25 mg，R＝8.1 min）。Fr. C8-4（9.2 g）經MPLC色譜（甲醇-水3∶7～1∶0）梯度洗脫得到28個次組分（Fr. C8-4-1～C8-4-28）。Fr. C8-4-7（1.2 g）經Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）得到5個流分（Fr. C8-4-7-1～C8-4-7-5）。Fr. C8-4-7-2（72 mg）經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得化合物8（20 mg）。Fr. C8-4-7-5（50 mg）經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物34（30 mg）。Fr. C8-4-8（412 mg）經Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）梯度洗脫得到5個流分（Fr. C8-4-8-1～C8-4-8-5）。Fr. C8-4-8-2（12 mg）經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物22（2 mg）。Fr. C8-4-9（215 mg）經Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）分離得到2個流分（Fr. C8-4-9-1～C8-4-9-2）。Fr. C8-4-9-2（105 mg）經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇20∶1）分離得到化合物18（18 mg）。Fr. C8-4-11（249 mg）經Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）洗脫得到5個流分（Fr. C8-4-11-1～C8-4-11-5）。Fr. C8-4-11-1（72 mg）經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇20∶1）分離得到化合物19（26 mg）。Fr. C8-4-11-4（19 mg）經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物7（3 mg）。Fr. C8-4-12（140 mg）經Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）洗脫得到3個流分（Fr. C8-4-12-1～C8-4-12-3）。Fr. C8-4-12-2（25 mg）經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇20∶1）分離得到化合物23（20 mg）。Fr. C8-4-23（511 mg）經Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）分離得到6個流分（Fr. C8-4-23-1～C8-4-23-6）。Fr. C8-4-23-6（107 mg）經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）以及制備HPLC（乙腈-水60∶40）分離純化得到化合物17（25 mg，R＝2.7 min）。Fr. C8-6（9.3 g）經MPLC色譜（甲醇-水3∶7～1∶0）梯度洗脫得到22個次組分（Fr. C8-6-1～C8-6-22）。Fr. C8-6-4（141 mg）經Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）洗脫得到5個流分（Fr. C8-6-4-1～C8-6-4-5）。Fr. C8-6-4-1（76 mg）經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物2（18.4 mg）。Fr. C8-6-4-4（16 mg）經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物3（6 mg）。Fr. C8-6-6（103 mg）經Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）分離得到3個流分（Fr. C8-6-6-1～C8-6-6-3）。Fr. C8-6-6-2（31 mg）經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物10（19 mg）。Fr. C8-6-6-3（20 mg）經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物31（8 mg）。Fr. C8-6-7（97 mg）經Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）分離得到5個流分（Fr. C8-6-7-1～C8-6-7-5）。Fr. C8-6-7-4（35 mg）和Fr. C8-6-7-5（20 mg）分別經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物4（18 mg）和5（4.8 mg）。Fr. C8-6-9（277 mg）經Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）得到6個流分（Fr. C8-6-9-1～C8-6-9-6）。Fr. C8-6-9-3（95 mg）經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物20（26 mg）。Fr. C8-6-9-5（44 mg）經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物12（22 mg）。Fr. C8-6-10（456 mg）經Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）分離得到6個流分（Fr. C8-6-10-1～C8-6-10-6）。Fr. C8-6-10-5（238 mg）經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物13（21 mg）。Fr. C8-6-13含有大量黃色晶體，用二氯甲烷洗脫后，得到化合物29（20 mg）。Fr. C8-6-14（760 mg）經Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）分離得到8個流分（Fr. C8-6-14-1～C8-6-14-8）。Fr. C8-6-14-2（202 mg）經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物16（14 mg）。Fr. C8-6-14-5（196 mg）經制備HPLC（乙腈-水45∶55）得到化合物14（25 mg，R＝11.7 min）。Fr. C8-6-16（1.03 g）經Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1系統）分離得到8個流分（Fr. C8-6-16-1～C8-6-16-8）。Fr. C8-6-16-2（491 mg）經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物15（15 mg）。Fr. C8-6-19經Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）分離得到7個流分（Fr. C8-6-19-1～C8-6-19-7）。Fr. C8-6-19-6經PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物26（15 mg）。

3 結構鑒定

化合物1：黃色油狀物；通過高分辨質譜（HR-ESI-MS）/289.177 7 [M＋Na]+（計算值289.177 4，C16H26O3Na），確定其分子式為C16H26O3，不飽和度為4。IR光譜顯示具有羥基3416 cm?1、羰基1732 cm?1、雙鍵1644 cm?1等特征吸收峰；1H-NMR（表1）顯示有3個甲基信號，2個為單峰H1.15 (3H, s, 19-Me), 0.67 (3H, s, 20-Me)，1個雙峰H0.94 (3H, d,= 6.9 Hz, H-11)；2個末端烯質子信號H4.77 (1H, d,= 1.7 Hz, H-17b), 4.56 (1H, d,= 1.7 Hz, H-17a)；1個甲氧基質子信號H3.68 (3H, s, 3-OMe)。13C-NMR（表1）結合DEPT顯示共有16個碳信號，包括1個羰基碳C176.0 (C-3)、2個烯碳C150.4 (C-8), 107.3 (C-17)、3個甲基碳C23.6 (C-19), 13.3 (C-20), 10.7 (C-11)、1個甲氧基碳C51.9 (3-OMe)、4個亞甲基碳C41.3 (C-1), 44.9 (C-18), 22.7 (C-6), 36.8 (C-7)、3個次甲基碳C38.3 (C-2), 56.3 (C-5), 49.9 (C-9)，另有2個季碳C72.2 (連氧季碳，C-4), 39.4 (C-10)。以上數據結合不飽和度分析，表明化合物1含有2個環。化合物1的波譜數據與本研究分離得到的已知化合物14[5]波譜數據非常相似。不同之處在于化合物1中多出1個甲氧基[H3.68 (s),C51.9] 信號，HMBC譜中，甲氧基與C-3的相關，表明化合物1為裸花紫珠烷A的甲酯化物。綜上分析，確定了化合物1的平面結構。

在NOESY譜（圖1）中，Me-20與Me-19和Me-11相關，H-2與Me-19和Me-20相關表明，H-2、Me-11、Me-19和Me-20在同一平面，定為β取向。H-9與H-5相關，表明H-9與H-5在同一平面，定為α取向。通過實驗和計算的ECD光譜（圖2）分析，推斷出化合物1的絕對構型為2、4、5、9、10。最后，確定了化合物1的結構（圖1），命名為裸花紫珠烷A1。

化合物2：無色針狀晶體（二氯甲烷-甲醇）；通過HR-ESI-MS/209.114 2 [M＋Na]+（計算值209.114 8，C10H18O3Na）確定其分子式為C10H18O3，不飽和度為2。IR光譜示有羥基3334 cm?1；1H-NMR（表1）顯示有3個甲基單峰信號分別為H1.21 (3H, s, 9-Me), 1.18 (3H, s, 10-Me), 1.81 (3H, brs, 7-Me)，1個烯質子信號H5.46 (1H, m, H-2)，1個連氧次甲基質子信號H4.00 (1H, brs, H-6)。13C-NMR（表1）結合DEPT顯示有10個碳信號，2個烯碳C135.4 (C-1), 122.6 (C-2)、3個甲基碳C24.5 (C-9), 24.4 (C-10), 21.0 (C-7)、2個亞甲基碳C34.1 (C-3), 35.3 (C-5)、1個連氧次甲基碳C69.7 (C-6)、2個連氧季碳C76.3 (C-4), 75.2 (C-8)。結合1H-1H COSY、HMQC和HMBC相關信號，推測化合物2的結構為對薄荷烷型單萜類化合物，其結構與α-松油醇[6]相似，區別在于化合物2的C-4為連氧季碳C76.3 (C-4)，C-6為連氧次甲基H4.00 (1H, H-6),C69.7 (C-6)；而α-松油醇中C-4為次甲基，C-6為亞甲基。結合相對分子質量可知化合物2比α-松油醇多了2個羥基，分別連接于C-4和C-6位上，其結構見圖3。

表1 化合物1和2的1H-NMR和13C-NMR數據(400/100 MHz)

-CDCl3-CD3OD，下表同

-CDCl3-CD3OD, same as below tables

圖1 化合物1關鍵的1H-1H COSY、HMBC和NOESY相關

圖2 化合物1～5的實驗和計算ECD

圖3 化合物2的關鍵1H-1H COSY、HMBC和NOESY相關

根據MM2力場計算，得化合物2的優勢構象為半椅式，H-6和異丙醇片段處于直立鍵，4-OH和6-OH處于平伏鍵。在NOESY譜中，可觀察到H-6與Me-9相關，故確定H-6和異丙醇片段為β取向，而4-OH和6-OH為α取向。NOESY相關信號見圖3。將化合物2實驗獲得的ECD譜與2種構型的計算ECD譜(4, 6-2a；4, 6-2b) 進行比較，化合物2的實驗ECD譜與2a的計算ECD譜Cotton效應基本一致，由此推斷化合物2的絕對構型為4,6，鑒定結構為(4,6)-二羥基-α-松油醇，命名為裸花紫珠烷B1。

化合物3：無色油狀物；通過HR-ESI-MS/207.099 3 [M＋Na]+（計算值207.099 2，C10H16O3Na）確定分子式為C10H16O3，不飽和度為3。1H-NMR（表2）顯示有2個甲基單峰信號H0.88 (3H, s, 8-Me), 1.08 (3H, s, 9-Me)，1個烯質子信號H5.58 (1H, m, H-4)。13C-NMR（表2）結合DEPT135顯示共有10個碳信號，包括1個羰基碳C179.3 (C-7)，2個烯碳C151.6 (C-4), 123.3 (C-3)，2個甲基碳C20.9 (C-8), 25.9 (C-9)，3個亞甲基碳（其中1個為連氧亞甲基碳）35.7 (C-5), 34.7 (C-6), 60.0 (C-10)，1個次甲基碳C46.9 (C-1)，1個季碳C46.4 (C-2)。以上數據表明化合物3是單環單萜類化合物，其1H-和13C-NMR譜與2,2,3-三甲基-3-環己烯-1-羧酸[7]相似，唯一不同的是2,2,3-三甲基-3-環己烯-1-羧酸中C-10處的甲基信號，在化合物3中被羥甲基[H4.18 (2H, brs, H-10),C60.0 (C-10)] 所取代，進一步由HMBC譜中H-10與C-2 (C46.4), C-3 (C151.6), C-4 (C123.3) 的相關信號所證實。確定了化合物3的平面結構為2,2-二甲基-3-羥甲基-3-環己烯-1-羧酸，比較化合物3的實驗ECD譜和計算的ECD譜，表明化合物3的ECD譜與計算的1構型的譜具有相同的趨勢，因此確定其C-1的絕對構型為，結構鑒定為(1)-2,2-二甲基-3-羥甲基-3-環己烯-1-甲酸，如圖4所示，命名為裸花紫珠烷C1。

表2 化合物3～5的1H-NMR 和13C-NMR數據(400/100 MHz)

圖4 化合物3的關鍵1H-1H COSY和HMBC相關

化合物4：無色油狀物，HR-ESI-MS/202.143 5 [M＋NH4]+（計算值202.143 8，C10H20NO3）推斷其分子式為C10H16O3，不飽和度為3。1H-NMR（表2）顯示有2個甲基單峰信號H0.83 (3H, s, H-8), 1.16 (3H, s, H-9)，1個環外亞甲基，2個質子的特征信號H5.03 (1H, d,= 1.5 Hz, H-10a), 5.20 (1H, d,= 1.5 Hz, H-10b)，2個次甲基，其中1個為連氧次甲基信號H4.57 (1H, d,= 8.1 Hz, H-4)，以及2個亞甲基信號。13C-NMR（表2）結合DEPT示有10個碳信號，包括1個羰基碳C178.6 (C-7)，環外雙鍵碳C164.3 (C-3), 108.6 (C-10)，2個甲基碳C27.3 (C-9), 24.0 (C-8)，2個亞甲基碳C38.4 (C-5), 34.9 (C-6)，2個次甲基碳（其中1個為連氧次甲基碳）43.5 (C-1), 73.3 (C-4)，1個季碳C43.6 (C-2)。上述數據結合不飽和度表明化合物4為具有羧基和環外雙鍵的單環單萜類化合物。化合物4的1H-1H COSY波譜顯示-CH(C-4)-CH2(C-5)-CH2(C-6)-CH(C-1)-片段。在化合物4的HMBC譜中，Me-8和Me-9與C-1、C-2和C-3相關，H-10與C-2、C-3、C-4相關，綜合上述信息，推斷出化合物4為2,2-二甲基-3-亞甲基-4-羥基環己烷-1-甲酸。在NOESY譜中，H-1與Me-9相關，H-4與Me-8相關，表明H-1和H-4不在同一平面，將H-1定為α取向，則H-4為β取向。化合物4的絕對構型由實驗與計算的ECD（圖2）確定為(1,4)，最終鑒定化合物4為(1,4)-2,2-二甲基-3-亞甲基-4-羥基環己烷-1-甲酸，結構如圖5所示，命名為裸花紫珠烷D1。

圖5 化合物4的關鍵1H-1H COSY、HMBC和NOESY相關

化合物5：黃色油狀物；通過HR-ESI-MS/207.098 8 [M＋Na]+（計算值207.099 2，C10H16O3Na）確定其分子式為C10H16O3，不飽和度為3。它的1H-和13C-NMR（表2）數據與化合物3的基本一致，均可見1個羧基、2個甲基、1個羥甲基及1個環己烯基團。比較二者1H-1H COSY，化合物3給出的是-C4-C5-C6-C1-連接片段，而化合物5給出的是-C5-C6-C1-連接片段，表明C-4位的烯碳在化合物3中為次甲基，而在化合物5中為季碳，說明化合物5的C-4有取代基團。化合物5的HMBC中，H-10與C-3、C-4、C-5相關，進一步證實羥甲基連接在C-4位。與化合物3一樣，化合物5的絕對構型（1）也由ECD光譜確定（圖2），最終確定化合物5的結構為(1)-2,2-二甲基,4-羥甲基-3-環己烯-1-甲酸，結構如圖6所示，鑒定為裸花紫珠烷E1。

圖6 化合物5的關鍵1H-1H COSY和HMBC相關

化合物6：黃色針狀晶體（甲醇）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 5.85 (2H, s, H-3, 5), 3.82 (6H, s, 2, 6-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3):187.0 (C-4), 176.8 (C-1), 157.4 (C-2, 6), 107.6 (C-3, 5), 56.6 (2, 6-OCH3)。以上數據與文獻進行對比[8]，確定化合物6為2,6-二甲氧基-對-苯醌。

化合物7：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 4.73 (2H, s, H-9), 3.64 (1H, t,= 3.6 Hz, H-2), 2.27 (1H, m, H-4), 1.93 (1H, m, H-3a), 1.78 (1H, overlapped, H-5a), 1.73 (3H, s, H-10), 1.67 (1H, t,= 4.0 Hz, H-3b), 1.57 (3H, overlapped, H-5b, 6a, 6b), 1.27 (3H, s, 7-Me)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 149.5 (C-8), 109.1 (C-9), 74.1 (C-2), 71.5 (C-1), 37.6 (C-4), 34.2 (C-3), 33.8 (C-6), 26.8 (C-7), 26.3 (C-5), 21.2 (C-10)。以上數據與文獻報道一致[9]，鑒定化合物7為對薄荷-8-烯-1,2-二醇。

化合物8：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 5.61 (1H, q,= 2.0 Hz, H-7), 3.97 (1H, d,= 12.0 Hz, H-1a), 3.53 (1H, d,= 12.1 Hz, H-1b), 3.07 (1H, m, H-5), 2.93 (1H, m, H-4a), 2.67 (1H, m, H-6a), 2.33 (1H, d,= 5.7 Hz, H-4b), 2.12 (1H, dq,= 17.2, 2.3 Hz, H-6b), 1.72 (3H, q,= 2.1 Hz, 10-Me)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 177.7 (C-3), 137.6 (C-8), 130.5 (C-7), 101.2 (C-9), 64.1 (C-1), 38.0 (C-5), 37.7 (C-4), 37.7 (C-6), 12.5 (C-10)。以上數據與文獻報道一致[10]，鑒定化合物8為天目地黃素B。

化合物9：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 4.87 (1H, dd,= 6.8, 2.0 Hz, H-1), 4.03 (1H, dd,= 12.2, 6.4 Hz, H-7a), 3.71 (1H, td,= 12.4, 3.9 Hz, H-7b), 2.78 (1H, d,= 18.0 Hz, H-4a), 2.55 (1H, overlapped, H-4b), 2.51(1H, overlapped, H-9a), 2.30 (1H, dt,= 12.8, 6.4 Hz, H-6a), 2.23 (1H, dd,= 14.9, 2.1 Hz, H-9b), 1.52 (3H, s, 10-Me), 1.49 (1H, overlapped, H-6b)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 174.7 (C-3), 107.9 (C-8), 86.1 (C-5), 84.4 (C-1), 60.1 (C-7), 42.9 (C-9), 39.4 (C-4), 29.9 (C-6), 24.1 (C-10)。以上數據與文獻報道一致[11]，鑒定化合物9為北玄參素G。

化合物10：白色無定形粉末；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.00 (1H, m, H-2), 2.47 (1H, dt,= 17.4, 4.7, 2.3 Hz, H-7a), 2.33 (1H, m, H-3a), 2.11 (1H, m, H-7b), 2.01 (1H, overlapped, H-6a), 1.98 (1H, overlapped, H-3b), 1.53 (1H, m, H-4), 1.21 (1H, dd,= 12.4, 5.1 Hz, H-6b), 1.17 (6H, s, 8, 9-Me)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 170.8 (C-10), 140.9 (C-2), 131.2 (C-1), 72.7 (C-5), 45.2 (C-4), 28.3 (C-3), 26.9 (C-8), 26.4 (C-7), 26.1 (C-9), 24.3 (C-6)。以上數據與文獻對照[12]，鑒定化合物10為黃牡丹醇B。

化合物11：無色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 6.74 (1H, t,= 1.8 Hz, H-2), 4.31 (1H, dt,= 9.8, 2.1 Hz, H-7), 2.39 (1H, dd,= 16.0, 3.8 Hz, H-5a), 2.28～2.11 (2H, overlapped, H-4, 5b), 1.93 (1H, m, H-6), 1.76 (1H, t,= 1.6 Hz, H-8), 0.98 (1H, d,= 7.1 Hz, H-10), 0.92 (1H, d,= 6.9 Hz, H-9)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 202.5 (C-1), 152.1 (C-2), 135.6 (C-3), 69.6 (C-7), 51.4 (C-6), 37.4 (C-5), 27.4 (C-4), 21.0 (C-10), 16.9 (C-9), 15.5 (C-8)。以上數據與文獻對照[13]，鑒定化合物11為香桂酮。

化合物12：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.87 (1H, t-like,= 7.4 Hz, H-3), 5.44 (1H, t-like,= 6.9 Hz, H-7), 4.18 (2H, d,= 6.8 Hz, H-8), 2.34 (2H, q,= 7.6 Hz, H-4), 2.17 (2H, t,= 7.6 Hz, H-5), 1.84 (3H, brs, 9-Me), 1.70 (3H, brs, 10-Me)；13C-NMR (400 MHz, CDCl3): 173.2 (C-1), 144.1 (C-3), 138.4 (C-6), 127.6 (C-2), 124.2 (C-7), 59.3 (C-8), 38.0 (C-5), 27.2 (C-4), 16.3 (C-10), 12.2 (C-9)。以上數據與文獻對比[14]，鑒定化合物12為8-羥基- 2,6-二甲基-(2,6)-辛二烯酸。

化合物13：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.88 (1H, t-like,= 7.5 Hz, H-3), 3.69 (2H, m, H-8), 2.19 (2H, qt,= 14.2, 7.8 Hz, H-4), 1.82 (3H, s, H-9), 1.62 (2H, overlapped, H-6, 7a), 1.45 (2H, overlapped, H-5a, 7b), 1.30 (1H, m, H-5b), 0.92 (3H, d,= 6.3 Hz, H-10)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 173.3 (C-1), 145.1 (C-3), 127.2 (C-2), 61.0 (C-8), 39.6 (C-7), 35.7 (C-5), 29.4 (C-6), 26.5 (C-4)，19.5 (C-10), 12.1 (C-9)。以上數據與文獻對比[15]，鑒定化合物13為8-羥基-2,6-二甲基-(2)-辛烯酸。

化合物14：無色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 4.77 (1H, q,= 1.7 Hz, H-17a), 4.57 (1H, q,= 1.7 Hz, H-17b), 2.49 (1H, overlapped, H-2), 2.43 (1H, overlapped, H-7a), 2.08 (1H, td,= 13.0, 5.2 Hz, H-7b), 1.99 (1H, overlapped, H-18a), 1.96 (1H, overlapped, H-6a), 1.95 (1H, overlapped, H-9), 1.90 (1H, overlapped, H-1a), 1.53 (1H, t,= 12.9 Hz, H-18b ), 1.46 (1H, dd,= 12.6, 2.6 Hz, H-5), 1.34 (1H, td,= 12.7, 4.2 Hz, H-6b), 1.25 (1H, t,= 12.9 Hz, H-1b), 1.13 (3H, s, 19-Me), 0.96 (3H, d,= 6.8 Hz, 11-Me), 0.70 (3H, s, 20-Me)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 179.8 (C-3), 151.8 (C-8), 107.4 (C-17), 72.9 (C-4), 57.1 (C-5), 51.2 (C-9), 45.9 (C-18), 42.7 (C-1), 40.3 (C-10), 39.3 (C-2), 38.0 (C-7), 23.8 (C-6), 23.3 (C-19), 13.6 (C-20), 11.0 (C-11)。以上數據與文獻報道一致[5]，鑒定化合物14為裸花紫珠烷。

化合物15：無色針狀晶體（二氯甲烷-甲醇）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 3.79 (1H, dd,= 10.2, 5.7 Hz, H-2), 3.32 (1H, s, H-9), 1.98 (1H, m, H-10a), 1.70 (2H, overlapped, H-3a, 11a), 1.64 (1H, overlapped, H-10b), 1.53 (2H, overlapped, H-3b, 12a), 1.44 (1H, overlapped, H-7a), 1.40 (1H, overlapped, H-5), 1.37 (1H, overlapped, H-6a), 1.29 (1H, m, H-6b), 1.11 (1H, overlapped, H-7b), 1.06 (1H, overlapped, H-11b), 1.03 (3H, s, 14-Me), 0.95 (3H, s, 15-Me), 0.90 (1H, d,= 13.7 Hz, H-12b) 0.85 (3H, s, H-13)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 81.0 (C-2), 75.3 (C-9), 50.7 (C-5), 47.6 (C-3), 44.3 (C-1), 37.2 (C-4), 35.6 (C-12), 34.8 (C-8), 33.2 (C-7), 31.5 (C-14), 28.5 (C-15), 26.5 (C-11), 26.1 (C-10), 25.5 (C-13), 20.8 (C-6)。以上數據與文獻報道一致[16]，鑒定化合物15為丁子香烷-2β,9α-二醇。

化合物16：無色針狀晶體（二氯甲烷-甲醇）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 3.45 (1H, t,= 3.3 Hz, H-9), 2.23 (1H, m, H-2), 2.05 (1H, m, H-10a), 1.90 (1H, m, H-5), 1.79 (1H, m, H-10b), 1.66 (1H, td,= 12.4, 5.3 Hz, H-11a), 1.17 (1H, m, H-7b), 1.60～1.47 (5H, overlapped, H-3a, 3b, 6a, 6b, 11b), 1.46～1.36 (3H, overlapped, H-7a, 12a, 12b), 1.17 (1H, m, H-7b), 1.03 (3H, s, 14-Me), 1.01 (3H, s, 13-Me), 0.94 (3H, s, 15-Me)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 72.4 (C-9), 70.9 (C-1), 44.1 (C-5), 42.6 (C-12), 39.5 (C-8), 38.3 (C-2), 35.6 (C-7), 35.2 (C-4), 34.2 (C-3), 33.6 (C-11), 30.7 (C-14), 28.3 (C-10), 26.8 (C-15), 21.0 (C-13), 20.6 (C-6)。以上數據與文獻對照[17]，鑒定化合物16為丁香烷-1,9β-二醇。

化合物17：無色針狀晶體（甲醇）；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 3.45 (1H, dd,= 9.4, 7.8 Hz, H-9), 2.13 (1H, m, H-2), 2.00 (1H, m, H-10a), 1.84～1.72 (4H, overlapped, H-5, 6a, 6b, 10b), 1.65(1H, m, H-11a), 1.51 (1H, dd,= 9.6, 7.9 Hz, H-3a), 1.47～1.37 (3H, overlapped, H-7a, 12a, 12b), 1.36 (1H, overlapped, H-3b), 1.28 (1H, m, H-11b), 1.05 (1H, overlapped, H-7b), 1.03 (3H, s, 14-Me), 1.02 (3H, s, 13-Me), 0.83 (3H, s, 15-Me)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 79.6 (C-9), 77.4 (C-8), 49.1 (C-12), 46.6 (C-5), 39.2 (C-2), 38.7 (C-11), 36.8 (C-3), 35.8 (C-4), 34.0 (C-1), 33.3 (C-7), 31.0 (C-15), 29.9 (C-10), 26.6 (C-13), 21.8 (C-14), 21.1 (C-6)。以上數據與文獻對照[18]，鑒定化合物17為(8,9)-異丁香烷-8,9-二醇。

化合物18：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.83 (1H, d,= 15.7 Hz, H-7), 6.45 (1H, d,= 15.7 Hz, H-8), 5.93 (1H, s, H-4), 2.47(1H, m, H-2a), 2.34 (1H, d,= 1.1 Hz, H-2b), 2.29 (3H, s, 10-Me), 1.87 (3H, d,= 1.4 Hz, 11-Me), 1.08 (3H, s, 13-Me), 1.00 (3H, s, 12-Me)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 197.8 (C-9), 197.4 (C-3), 161.1 (C-5), 145.4 (C-7), 130.5 (C-8), 127.7 (C-4), 79.3 (C-6), 49.7 (C-2), 41.6 (C-1), 28.4 (C-10), 24.5 (C-13), 23.1 (C-12), 18.9 (C-11)。以上數據與文獻數據[19]對比，鑒定化合物18為()-(＋)-去氫催吐蘿芙葉醇。

化合物19：無色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.00 (1H, d,= 15.6 Hz, H-7), 6.25 (1H, d,= 15.6 Hz, H-8), 3.86 (1H, m, H-3), 2.35 (1H, ddd,= 14.4, 5.1, 1.7 Hz, H-4a), 2.25 (3H, s, H-10), 1.64 (1H, m, H-4b), 1.59 (1H, m, H-2a), 1.23 (1H, m, H-2b), 1.16 (6H, s, 11, 13-Me), 0.94 (3H, s, 12-Me)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 197.7 (C-9), 142.7 (C-7), 132.6 (C-8), 69.6 (C-6), 67.4 (C-5), 63.9 (C-3), 46.7 (C-4), 40.6 (C-2), 35.2 (C-1), 29.4 (C-11), 28.3 (C-10), 25.0 (C-12), 19.9 (C-13)。以上數據與文獻對照[20]，鑒定化合物19為(3,5,6,7)-5,6-環氧-3-羥基-7-大柱香波龍烯-9-酮。

化合物20：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.80 (1H, d,= 16.0 Hz, H-4), 6.16 (1H, d,= 16.1 Hz, H-5), 5.97 (1H, brs, H-8), 5.74 (1H, brs, H-2), 2.48 (1H, d,= 17.2 Hz, H-10a), 2.28(1H, d,= 17.2 Hz, H-10b), 2.03 (3H, d,= 1.3 Hz, 15-Me), 1.92 (3H, d,= 1.4 Hz, 14-Me), 1.10 (3H, s, Me-12), 1.02 (3H, s, 13-Me)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 198.5 (C-9), 171.0 (C-1), 163.2 (C-3), 151.7 (C-7), 137.0 (C-5), 128.4 (C-4), 127.1 (C-8), 118.1 (C-2), 80.0 (C-6), 49.8 (C-10), 41.8 (C-11), 24.4 (C-14), 23.2 (C-13), 21.5 (C-15), 19.2 (C-12)。以上數據與文獻對照[21]，鑒定化合物20為脫落酸。

化合物21：黃色針狀晶體（甲醇）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 12.17(1H, s, 5-OH), 7.75 (1H, dd,= 7.4, 1.2 Hz, H-8), 7.61( 1H, dd,= 8.5, 7.5 Hz, H-7), 7.26 (1H, dd,= 8.4, 1.2 Hz, H-6), 6.81 (1H, s, H-11), 1.69 (6H, s, 14, 15-Me)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 186.8 (C-4), 172.8 (C-1), 168.4 (C-12), 162.4 (C-5), 152.0 (C-2), 136.4 (C-7), 132.9 (C-9), 131.2 (C-3), 125.4 (C-6), 120.1 (C-8), 115.3 (C-10), 102.4 (C-11), 69.6 (C-13), 28.9 (C-14, 15)。以上數據與文獻報道一致[22]，鑒定化合物21為紫珠醌B。

化合物22：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 5.46 (2H, overlapped, H-9, 10), 3.70 (2H, t,= 6.1 Hz, H-12), 2.65 (1H, m, H-2a), 2.50～2.22 (8H, overlapped, H-2b, 3, 4a, 5a, 8a, 8b, 11a, 11b), 2.12 (1H, m, H-5b), 1.94 (1H, m, H-7), 1.53 (1H, m, H-4b)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 219.2 (C-6), 176.0 (C-1), 129.0 (C-9), 128.5 (C-10), 62.4 (C-12), 54.5 (C-7), 39.0 (C-2), 38.0 (C-5), 37.9 (C-3), 30.9 (C-11), 27.6 (C-4), 25.6 (C-8)。以上數據與文獻報道一致[23]，鑒定化合物22為12-羥基茉莉酸。

化合物23：黃色油狀物；1H-NMR (00 MHz, CDCl3)5.45 (2H, m, H-9, 10), 3.68 (3H, s, 13-Me), 3.64 (2H, t,= 6.3 Hz, H-12), 2.68 (1H, m, H-2a), 2.47～2.17 (8H, overlapped, H-2b, 3, 4a, 5a, 8a, 8b, 11a, 11b), 2.10 (1H, m, H-5b), 1.91 (1H, m, H-7), 1.48 (1H, m, H-4b)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 219.3 (C-6), 172.8 (C-1), 128.6 (C-9), 128.4 (C-10), 62.2 (C-12), 54.1 (C-7), 51.9 (C-13), 38.9 (C-2), 37.9 (C-5), 37.9 (C-3), 31.0 (C-11), 27.4 (C-4), 25.5 (C-8)。以上數據與文獻對比[24]，鑒定化合物23為(?)-12-羥基茉莉酸甲酯。

化合物24：白色無定形粉末；1H-NMR (400MHz, CDCl3):5.27 (1H, brs, H-12), 3.22 (1H, dd,= 11.0, 4.7 Hz, H-3α), 2.81 (1H, dd,= 13.9, 4.6 Hz, H-18β), 1.13 (3H, s, 27-Me), 0.98 (3H, s, 23-Me), 0.92 (3H, s, 29-Me), 0.91 (3H, s, 24-Me), 0.90 (3H, s, 30-Me), 0.77 (3H, s, 25-Me), 0.74 (3H, s, 26-Me)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3):183.7 (C-28), 143.7 (C-13), 122.8 (C-12), 79.2 (C-3), 55.3 (C-5), 47.8 (C-9), 46.7 (C-19), 46.0 (C-17), 41.7 (C-14), 41.1 (C-18), 39.4 (C-8), 38.9 (C-4), 38.5 (C-1), 37.2 (C-10), 33.9 (C-21), 33.2 (C-30), 32.7 (C-22), 32.6 (C-7), 30.8 (C-20), 28.2 (C-23), 27.8 (C-15), 27.3 (C-2), 26.1 (C-27), 23.7 (C-29), 23.5 (C-16), 23.0 (C-11), 18.4 (C-6), 17.3 (C-26), 15.7 (C-25), 15.5 (C-24)。以上數據與文獻對比[25]，鑒定化合物24為齊墩果酸。

化合物25：白色無定形粉末；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 5.25 (1H, t,= 3.7 Hz, H-12), 3.17 (1H, dd,= 11.1, 4.9 Hz, H-3), 2.23 (1H, d,= 11.3Hz, H-18), 1.14 (3H, s, 23-Me), 1.00 (3H, s, 29-Me), 0.99 (3H, s, 27-Me), 0.98 (3H, s, 26-Me), 0.90 (3H, d,= 6.4 Hz, 30-Me), 0.87 (3H, s, 24-Me), 0.79 (3H, s, 25-Me)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD):139.7 (C-13), 126.8 (C-12), 79.7 (C-3), 56.7 (C-5), 54.4 (C-18), 49.8 (C-17), 43.3 (C-14), 40.8 (C-4), 40.5 (C-19), 40.4 (C-20), 40.0 (C-1), 39.8 (C-8), 38.2 (10), 38.1 (C-22), 34.3 (C-7), 31.8 (C-21), 29.2 (C-2), 28.8 (C-23), 27.9 (C-15), 25.4 (C-16), 24.4 (C-27), 24.1 (C-11), 21.6 (C-30), 19.5 (C-6), 17.8 (C-29), 17.7 (C-24), 16.4 (C-26), 16.0 (C-25)。以上數據與文獻中熊果酸比對[26]，發現氫譜一致，化合物25的碳譜比熊果酸少了1個羰基信號，經TLC多個體系展開與對照品的f值均一致，故鑒定化合物25為熊果酸。

化合物26：白色無定形粉末；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 5.30 (1H, s, H-12), 3.93 (1H, ddd,= 12.0, 4.4, 2.8 Hz, H-2), 3.33 (1H, d,= 2.9 Hz, H-3), 2.59 (1H, td,= 14.4, 13.2, 5.8 Hz, H-16a), 2.50 (1H, s, H-18), 1.35 (3H, s, 29-Me), 1.20 (3H, s, 27-Me), 0.99 (6H, s, 26-Me), 0.93 (3H, d,= 6.6 Hz, 25-Me), 0.87 (3H, s, 24-Me), 0.79 (3H, s, 23-Me)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 182.3 (C-28), 140.0 (C-13), 129.3 (C-12), 80.1 (C-3), 73.6 (C-19), 67.2 (C-2), 55.1 (C-18), 49.3 (C-5), 49.3 (C-17), 48.2 (C-9), 43.1 (C-20), 42.7 (C-14), 42.5 (C-1), 41.2 (C-4), 39.5 (C-10), 39.4 (C-8), 39.0 (C-22), 34.1 (C-7), 29.6 (C-15), 29.2 (C-23), 27.3 (C-11), 27.1 (C-27), 26.6 (C-16), 24.9 (C-29), 24.7 (C-6), 22.5 (C-24), 19.3 (C-21), 17.5 (C-25), 16.9 (C-30), 16.6 (C-26)。以上數據與文獻對比[27]，鑒定化合物26為薔薇酸。

化合物27：黃色針狀晶體（石油醚-醋酸乙酯）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 12.63 (1H, s, 5-OH), 7.67 (1H, overlapped, H-2′), 7.64 (1H, overlapped, H-6′), 7.02 (1H, d,= 8.4 Hz, H-5′), 6.41 (1H, d,= 2.0 Hz, H-8), 6.32(1H, d,= 2.0 Hz, H-6), 5.27 (1H, s, 4′-OH), 3.96 (3H, s, 3′-OCH3), 3.85 (3H, s, 7-OCH3), 3.83 (3H, s, 3-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 178.9 (C-4), 165.6 (C-7), 162.2 (C-9), 156.9(C-5), 156.1 (C-2), 148.6 (C-4′), 146.6 (C-3′), 139.0 (C-3), 122.9 (C-6′), 122.6 (C-1′), 114.8 (C-5′), 111.1 (C-2′), 106.2 (C-10), 98.1 (C-6), 92.4 (C-8), 60.4 (3-OCH3), 56.3 (7-OCH3), 56.0 (3′-OCH3)。以上數據與文獻對比[28]，鑒定化合物27為5,4-二羥基-3,7,3-三甲氧基黃酮。

化合物28：黃色針狀晶體（石油醚-醋酸乙酯）；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.53 (1H, s, H-4′), 7.45 (1H, d,=? 8.3 Hz, H-6′), 7.38 (1H, s, H-3), 6.94 (1H, d,=? 8.4 Hz, H-5′), 6.56 (2H, overlapped, H-2′, 8), 6.33 (1H, d,=? 2.0 Hz, H-6), 3.96 (3H, s, 7-OMe), 3.88 (3H, s, 3′-OMe)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 183.2 (C-4), 166.4 (C-7), 165.7 (C-2), 162.1 (C-5), 158.5 (C-9), 151.3 (C-4′), 148.7 (C-3′), 123.0 (C-1′), 121.3 (C-6′), 116.3 (C-5′), 109.9 (C-2′), 105.8 (C-10), 104.1 (C-3), 98.9 (C-6), 93.2 (C-8), 56.4 (7-OCH3), 56.2 (3′-OCH3)。以上數據與文獻報道一致[29]，鑒定化合物28為氈毛美洲茶素。

化合物29：黃色針狀晶體（二氯甲烷）；1H-NMR (400 MHz, Pyr-5): 13.83 (1H, s, OH-5), 7.67 (1H, dd,= 8.3, 2.1 Hz, H-6′), 7.62 (1H, d,= 2.1 Hz, H-2′), 7.29 (1H, d,= 8.3 Hz, H-5′), 6.99 (1H, s, H-3), 6.88 (1H, d,= 2.0 Hz, H-6), 6.78 (1H, d,= 2.0 Hz, H-8), 3.83 (3H, s, 3′-OMe)；13C-NMR (100 MHz, Pyr-5): 183.1 (C-4), 166.3 (C-7), 164.9 (C-2), 163.5 (C-9), 158.9 (C-5), 152.8 (C-4′), 149.3 (C-3′), 122.9 (C-1′), 121.7 (C-6′), 117.3 (C-5), 110.7 (C-2′), 105.4 (C-10), 104.6 (C-3), 100.4 (C-6), 95.3 (C-8), 56.4 (3′-OMe)。以上數據與文獻報道一致[30]，鑒定化合物29為5,7,4′-三羥基-3′-甲氧基黃酮。

化合物30：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.97～6.83 (2H, overlapped, H-2, 5), 6.80 (1H, dd,= 8.1, 2.0 Hz, H-6), 5.74 (1H, s, 4-OH), 4.61 (1H, d,= 6.9 Hz, H-2), 4.49 (1H, dd,= 9.8, 6.8 Hz, H-8a), 4.35 (1H, overlapped, H-4a), 4.31 (1H, overlapped, H-8b), 4.17 (1H, dd,= 9.3, 3.8 Hz, H-4b), 3.90 (3H, s, 3-OCH3), 3.44 (1H, m, H-5), 3.12 (1H, m, H-1)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3):178.3 (C-6), 147.1 (C-3), 146.0 (C-4), 130.7 (C-1), 119.2 (C-6), 114.6 (C-5), 108.6 (C-2), 86.2 (C-2), 70.1 (C-4), 70.0 (C-8), 56.1 (3-OMe), 48.3 (C-5), 46.1 (C-1)。以上數據與文獻對比[31]，鑒定化合物30為柳葉柴胡酚。

化合物31：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.62 (1H, d,= 9.4 Hz, H-4), 7.39 (1H, d,= 8.6 Hz, H-5), 6.87 (1H, d,= 8.6 Hz, H-6), 6.25 (1H, d,= 9.5 Hz, H-3), 5.30 (1H, d,= 8.4 Hz, H-1′), 4.64 (1H, s, H-4′a), 4.58 (1H, s, H-4′b), 4.52 (1H, d,= 8.3 Hz, H-2′), 3.96 (3H, s, 7-OCH3), 1.77 (3H, s, H-5′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 160.3 (C-2), 160.2 (C-7), 153.0 (C-9), 143.9 (C-4), 143.9 (C-3′), 128.7 (C-5), 116.1 (C-8), 113.9 (C-10), 113.6 (C-4′), 113.2 (C-3), 107.9 (C-6), 78.5 (C-2′), 69.7 (C-1′), 56.4 (7-OCH3), 17.5 (C-5′)。以上數據與文獻對比[32]，鑒定化合物31為九里香亭。

化合物32：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 9.64 (1H, d,= 7.7 Hz, H-9), 7.37 (1H, d,= 15.8 Hz, H-7), 6.80 (2H, s, H-2, 6), 6.60 (1H, dd,= 15.8, 7.7 Hz, H-8), 5.99 (1H, s, 4-OH), 3.92 (6H, s, 3, 5-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 193.6 (C-9), 153.4 (C-7), 147.5 (C-3, 5), 138.2 (C-4), 126.8 (C-8), 125.6 (C-1), 105.7 (C-2, 6), 56.5 (3,5-OCH3)。以上數據與文獻對比[33]，鑒定化合物32為芥子醛。

化合物33：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 9.83 (1H, s, 1-CHO), 7.43 (1H, overlapped, H-6), 7.42 (1H, overlapped, H-2), 7.04 (1H, d,= 8.5 Hz, H-5), 3.97 (3H, s, 3-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 191.3 (1-CHO), 152.0 (C-4), 147.5 (C-3), 130.2 (C-1), 127.9 (C-6), 114.7 (C-5), 109.1 (C-2), 56.5 (3-OCH3)。以上數據與文獻報道一致[34]，鑒定化合物33為香草醛。

化合物34：無色針狀晶體（二氯甲烷-甲醇）；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.32 (2H, s, H-2, 6), 3.88 (6H, s, 3, 5-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 169.9 (C-7), 148.8 (C-3, 5), 141.7 (C-4), 121.8 (C-1), 108.2 (C-2, 6), 56.7 (3, 5-OCH3)。以上數據與文獻報道一致[35]，鑒定化合物34為丁香酸。

4 體外抗HepG2細胞增殖活性篩選

HepG2細胞培養于含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 U/mL鏈霉素的DMEM培養基中，置于37 ℃、5% CO2細胞培養箱中培養至細胞達到90%融合狀態，消化接種于96微孔板，每孔8000個細胞，置培養箱中孵育12 h后，設置對照組、PTX組及實驗組，分別加入100 μL DMEM培養基、PTX及待測化合物，每組5個復孔，給藥后繼續放入培養箱中孵育24 h后取出，用吸液泵吸去孔內上清液后，向每孔中加入100 μL 10% CCK-8試劑的DMEM培養基，在細胞培養箱中共同孵育30 min。重復3次實驗。使用酶標儀在450 nm處檢測吸光度（）值，并計算細胞存活率。結果（圖7）顯示，化合物4在25 μmol/L時細胞存活率約為50%。采用SPSS 20.0軟件計算IC50值，得化合物4的IC50為24.0 μmol/L。

圖7 化合物4對HepG2細胞活性的影響

5 討論

本研究報道了裸花紫珠中的34個化合物，包括5個新化合物和22個首次從裸花紫珠中報道的化合物。化合物類型以萜類成分為主，共25個，表明裸花紫珠中的萜類成分值得進一步關注。本研究結果不僅豐富了裸花紫珠的化學成分和信息，也可為裸花紫珠的進一步開發利用提供一定的依據。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Chemical constituents from

CHEN Qian-qian1, ZOU Xian-liang3, CHOU Gui-xin1, 2

1. Institute of Chinese Materia Medica, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China 2. Shanghai R&D Centre for Standardization of Chinese Medicines, Shanghai 201203, China 3. Pingxiang Health Vocational College, Pingxiang 337000, China

To study the chemical constituents from.A variety of modern separation chromatography techniques were used for separation and purification, structural identification through spectroscopic data and physicochemical properties, and ECD was used to determine the absolute configuration of new compounds. The cytotoxic activity of new compounds was screened by CCK-8 method.A total of 34 compounds were isolated and identified from, of which compounds 1—5 were named as callnudoid A1 (1), (4,6)-4,6-dihydroxy-α-terpineol (2), (1)-2,2-dimethyl-3-methylol-3-cyclohexene-1-carboxylic acid (3), (1,4)-2,2-dimethyl-3-methylene-4-hydroxy-cyclohexane- 1-carboxylic acid (4), (1)-2,2-dimethyl-4-methylol-3-cyclohexene-1-carboxylic acid (5); Compounds 6—34 were identified as 2,6- dimethoxy--benzoquinone (6),-menth-8-ene-1,2-diol (7), rehmachinin B (8), buergerinin G (9), paeoveitol B (10), subamone (11), 8-hydroxy-2,6-dimethyl-(2,6)-octadienoic acid (12), 8-hydroxy-2,6-dimethyl-(2)-octenoic acid (13), callnudoid A (14), clovane-2β,9α-diol (15), caryolane-1,9β-diol (16), (8,9)-isocaryolane-8,9-diol (17), ()-(＋)-dehydrovomifoliol (18), (3,5,6,7)-5,6-epoxy-3-hydroxy-7-megastigmen-9-one (19), abscisic acid (20), callicarpaquinone B (21), 12-hydroxyjasmonic acid (22), (?)-methyl 12-hydroxyjasmonate (23), oleanolic acid (24), ursolic acid (25), euscaphic acid (26), 5,4-dihydroxy- 3,7,3-trimethoxyflavone (27), velutin (28), 5,7,4-trihydroxy-3-methoxyflavone (29), salicifoliol (30), murrangatin (31), sinapaldehyde (32), 4-hydroxyl-3-methoxybenzaldehyde (33) and syringic acid (34).Compounds 1—5 were new compounds, named as callnudoid A1 (1), (4,6)-4,6-dihydroxy-α-terpineol (2), (1)-2,2-dimethyl-3-methylol-3-cyclohexene-1- carboxylic acid (3), (1,4)-2,2-dimethyl-3-methylene-4-hydroxy-cyclohexane-1-carboxylic acid (4), (1)-2,2-dimethyl-4- methylol- 3-cyclohexene-1-carboxylic acid (5). Compounds 6, 7—13, 17—18 and 31 were all isolated and identified from Verbenaceae for the first time, compounds 30 and 32—33 were found for the first time in the genus, and compounds 15, 21 and 28 isolated for the first time from. Cytotoxicity screening results showed that compound 4 possessed the cytotoxicity on HepG2 cell line with the IC50values of 24.0 μmol/L.

Verbenacase;Hook. et Arn; callnudoids A1; (1,4)-2,2-dimethyl-3-methylene-4-hydroxy-cyclohexane-1-carboxylic acid; clovane-2β,9α-diol; callicarpaquinone B; velutin; salicifoliol

R284.1

A

0253 - 2670(2023)01 - 0015 - 14

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.01.003

2022-09-02

重大新藥創制專項基金資助項目（2019ZX09735002-004）

陳倩倩，女，碩士研究生，研究方向為中藥化學成分及質量標準。Tel: 19821267292 E-mail: 598029330@qq.com

通信作者：侴桂新，男，研究員，從事中藥化學成分與質量標準研究。E-mail: chouguixinzyb@126.com

[責任編輯 王文倩]