基于DJ-1/Nrf2/HO-1信號通路探討北柴胡地上部分多糖組分對癲癇小鼠腦內氧化應激的影響

劉 艷，王 敏，李曉毛，匡海學，楊炳友*

基于DJ-1/Nrf2/HO-1信號通路探討北柴胡地上部分多糖組分對癲癇小鼠腦內氧化應激的影響

劉 艷1，王 敏1，李曉毛2，匡海學1，楊炳友1*

1. 黑龍江中醫藥大學，教育部北藥基礎與應用研究重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150040 2. 江蘇食品藥品職業技術學院，江蘇 淮安 223023

探討北柴胡地上部分多糖組分（polysaccharides from aerial parts of，ABP）對戊四唑致癇小鼠的預防作用及作用機制。C57BL/6小鼠隨機分為對照組、模型組、丙戊酸鈉（125 mg/kg）組、癲癇寧片（1200 mg/kg）組和ABP高、低劑量（100、25 mg/kg）組，每組10只。各給藥組ig相應藥物，對照組和模型組ig等體積0.5%羧甲基纖維素鈉溶液，1次/d，連續7 d。末次給藥后60 min，除對照組外，其余各組ip戊四唑（60 mg/kg）。通過行為學評價ABP預防癲癇的作用；采用蘇木素-伊紅（HE）染色、免疫組化法檢測海馬神經元病理形態學變化；采用ELISA法測定海馬組織中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3，Caspase-3）、膠質纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）、谷氨酸脫羧酶65（glutamic acid decarboxylase 65，GAD65）、GAD67、G蛋白偶聯的內向整流鉀通道1（G protein gated inwardly rectifying K channels 1，GIRK1）、-甲基--天冬氨酸受體1（-methyl--aspartic acid receptor，NMDAR1）、γ-氨基丁酸A型受體（γ-aminobutyric acid type A，GABA AR）水平；采用Western blotting檢測海馬組織中DJ-1、特異性蛋白1（specificity protein 1，SP1）、p-SP1、核因子E2相關因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2）、血紅素加氧酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）蛋白表達。采用過氧化氫（hydrogen peroxide，H2O2）誘導的PC12細胞氧化應激模型進行驗證。與模型組比較，ABP明顯改善小鼠癲癇癥狀，表現為軀體僵直率和死亡率降低等（＜0.01）；海馬錐體細胞排列規則，結構清晰，GFAP陽性表達面積明顯降低；顯著降低海馬組織中Caspase-3、GFAP、GAD65、GAD67、GIRK1及NMDAR1水平（＜0.01），升高GABA AR水平（＜0.01）；顯著下調癲癇小鼠海馬組織和H2O2誘導的PC12細胞中DJ-1、p-SP1、Nrf2及HO-1蛋白表達（＜0.01）。ABP可以減輕癲癇發作期間DJ-1/Nrf2/HO-1介導的癲癇氧化應激，從而發揮預防癲癇的作用。

北柴胡；多糖；癲癇；氧化應激；DJ-1/Nrf2/HO-1通路

癲癇俗稱“羊癲風”，是大腦神經元突發異常放電而導致的短暫大腦功能障礙的一種慢性疾病[1]。全世界有近5000萬人患有癲癇[2]。癲癇發作涉及氧化應激、炎癥反應、神經元損傷等諸多因素[3-4]，其常見病理特征是病理和組織學變化，如海馬區的神經膠質化和神經元死亡[5-6]。大腦中神經元興奮性異常增加及過度同步化放電是癲癇發病的基礎，神經元的異常放電會產生大量活性氧，觸發氧化應激反應，導致神經元凋亡[7]。包括癲癇在內的神經系統病癥會出現大腦氧化損傷，并削弱其抗氧化能力[8]，氧化應激在此類病癥病理中發揮重要作用。癲癇動物模型是分析抗癲癇藥物和探析其發病機制的重要環節，戊四唑可使致癇動物產生與人類極為相似的行為及神經病理學改變[1]，在戊四唑致癇小鼠的大腦中，氧化應激導致自由基產生，進而促進了癲癇的發展，氧化應激進一步破壞線粒體和內質網等細胞大分子，最終導致神經元細胞的損傷甚至死亡[9]。但到目前為止，癲癇的氧化應激機制仍在探究之中。

北柴胡DC.作為一種被臨床廣泛應用的傳統中藥，常在癲癇處方中用作君藥，已被臨床證明具有較好的抗癲癇作用[10-11]。北柴胡地上部分與其藥用部位根具有相似的成分與療效，其多糖具有較好的抗癲癇及抗氧化作用。為了進一步明確北柴胡地上部分多糖組分（polysaccharides from aerial parts of，ABP）對癲癇的預防效果及可能機制，本研究建立戊四唑致癇小鼠模型，通過行為學、ELISA、Western blotting等技術考察ABP對癲癇的預防作用及作用機制，以期充分利用北柴胡藥材植物資源，為ABP治療癲癇提供實驗依據。

1 材料

1.1 動物和細胞

SPF級雄性C57BL/6小鼠60只，4周齡，體質量18～22 g，由遼寧長盛生物科技有限公司提供，許可證號SCXK（遼）2020-0001。動物在20～23 ℃和50%～60%的標準化濕度條件下飼養。動物實驗獲得黑龍江中醫藥大學動物實驗委員會批準（批準號20201230001）。

PC12細胞由武漢大學細胞保藏中心提供。

1.2 藥材

北柴胡地上部分采摘自黑龍江省大慶市，經黑龍江中醫藥大學藥用植物學教研室樊銳鋒教授鑒定為傘形科植物北柴胡DC.的干燥莖葉，藥材樣本（編號20190901）保存在黑龍江中醫藥大學中藥化學實驗室。

1.3 藥品與試劑

戊四唑（批號MKCC5472）購自美國Sigma-Aldrich公司；丙戊酸鈉（批號AHG0462）購自Sanofi公司；癲癇寧片（批號6907911100246，國藥準字號Z53020771）購自昆明中藥廠有限公司；CCK-8試劑（批號K101819133EF5E）、過氧化氫（hydrogen peroxide，H2O2，批號BCCG3062）購自APEx BIO公司；DMEM培養基（批號8120512）購自美國Gibco公司；二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO，批號710N0314））購自美國Sigma公司；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3，Caspase-3）ELISA試劑盒（批號20210315）購自武漢博士德生物工程有限公司；膠質纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）ELISA試劑盒（批號AG02158177）購自北京Bioss生物技術有限公司；谷氨酸脫羧酶65（glutamic acid decarboxylase 65，GAD65）ELISA試劑盒（批號GR3278856-10）、GAD67 ELISA試劑盒（批號GR3278845-10）、血紅素加氧酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）抗體（批號ab189491）購自英國Abcam公司；γ-氨基丁酸A型受體（γ-aminobutyric acid type A，GABA AR）ELISA試劑盒（批號202106）購自上海酶聯生物科技公司；BCA蛋白定量試劑盒（批號042820200814）購自上海碧云天生物技術有限公司；IgG二抗（批號ZB2305）購自北京中杉金橋生物技術有限公司；DJ-1抗體（批號3560506011）、G蛋白偶聯的內向整流鉀通道1（G protein gated inwardly rectifying K channels 1，GIRK1）ELISA試劑盒（批號A9824）、核因子E2相關因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2）抗體（批號0072280102）、特異性蛋白1（specificity protein 1，SP1）抗體（批號5500002921）、GAPDH抗體（批號A102264575）、-甲基--天冬氨酸受體1（-methyl--aspartic acid receptor，NMDAR1）ELISA試劑盒（批號4000000684）購自ABclonal Technology公司；p-SP1抗體（批號EXA1384）購自FulenGen公司。

1.4 儀器

EPOCH2酶標儀（美國Bio-Tek公司）；BT25S型電子分析天平（德國Sartorius公司）；TDL-4型低速離心機（上海安亭科學儀器廠）；WT-1ND型超凈臺（北京王堂藍翼科技有限公司）；BX60型、DP72型顯微鏡（日本Olympus公司）；2695型高效液相色譜（美國Waters公司）；Western blotting凝膠成像儀（美國Bio-Rad公司）；Odyssey?CLx凝膠成像儀（美國LI-COR公司）。

2 方法

2.1 藥物制備與分析

ABP經本課題組實驗室制備，并進行了多糖的定性定量分析[12]，ABP中含有半乳糖醛酸（45.19%）、半乳糖（36.63%）、阿拉伯鼠李糖（12.13%）和甘露糖（6.05%），ABP的平均相對分子質量為1.38×103。

2.2 分組、給藥及造模

將60只C57BL/6小鼠隨機分為對照組、模型組、丙戊酸鈉（125 mg/kg）組、癲癇寧片（1200 mg/kg）組和ABP高、低劑量（100、25 mg/kg）組，每組10只。各給藥組ig相應藥物，對照組和模型組ig等體積0.5%羧甲基纖維素鈉溶液，1次/d，連續7 d。末次給藥后60 min，除對照組外，其余各組ip戊四唑（60 mg/kg）。

2.3 行為學檢測

各組小鼠ip戊四唑后立即記錄小鼠癲癇發作情況。小鼠癇性發作分級采用Racine標準：0級，無驚厥；I級，口、面部肌肉陣攣；II級，在I級基礎上出現節律點頭；III級，在II級基礎上出現前肢陣攣；IV級，在III級基礎上出現后肢伸直；V級，在IV級基礎上出現跌倒，記錄小鼠癲癇發作潛伏期、發作持續時間、僵直率和軀體死亡率，剔除不達標的小鼠。

2.4 蘇木素-伊紅（HE）染色觀察海馬組織病理變化

各組小鼠末次給藥后禁食24 h，用10%戊巴比妥鈉完全麻醉后置于解剖臺，取海馬組織，用PBS洗滌后，于4%多聚甲醛中固定6～8 h（4 ℃），然后轉移至30%蔗糖溶液（4 ℃）過夜，用石蠟固定。將石蠟切片在水中脫蠟，置于蘇木精染料溶液中5 min，并用70%鹽酸醇分化10 s。用自來水徹底沖洗切片，使核變藍，蒸餾，洗滌，并放入伊紅染料溶液中1 min，然后進行梯度醇脫水，二甲苯清除和樣品的樹脂密封，于顯微鏡下觀察。

2.5 免疫組化檢測海馬組織GFAP陽性表達

將各組小鼠海馬組織石蠟切片脫蠟至水，用抗原修復液（pH 6.0）預處理切片，3% H2O2孵育15 min以阻斷內源性過氧化物酶，之后用PBS沖洗3次。逐滴加入GFAP抗體（1∶400），4 ℃溫育過夜。將組織浸入PBS中，逐滴加入IgG抗體和Fab段-HRP多聚體。將混合物在室溫下孵育30 min，然后每次用PBS洗滌細胞5次，每次3 min。DAB顯色，于顯微鏡下觀察并拍照，Motic Med 6.0進行圖像采集分析，評估GFAP陽性表達的吸光度（）。

2.6 ELISA檢測海馬組織內相關因子水平

取各組小鼠海馬組織，PBS沖洗后，制備組織勻漿液，按ELISA試劑盒說明書檢測Caspase-3、GFAP、GAD65、GAD67、GIRK1、NMDAR1、GABA AR水平。

2.7 CCK-8法檢測ABP對H2O2誘導的PC12細胞活力的影響

取對數生長期的PC12細胞，以1×105個/孔接種于96孔板，培養過夜。加入不同質量濃度（20、40、80 μg/mL）的ABP處理24 h，加入CCK-8試劑，檢測細胞存活率。設置對照組、模型組和ABP低、中、高劑量（20、40、80 μg/mL）組，各給藥組加入不同質量濃度的ABP溶液培養24 h，模型組和各給藥組再加入經DMEM稀釋的0.5 mmol/L H2O2誘導培養24 h以建立細胞損傷模型，對照組常規培養，另設置陰性組無細胞只加培養基，加入CCK-8試劑，檢測細胞存活率。

細胞存活率＝(給藥－陰性)/(對照－陰性)

2.8 Western blotting檢測海馬組織和H2O2誘導的PC12細胞中DJ1、p-SP1、Nrf2、HO-1、SP1蛋白表達

取各組小鼠海馬組織，用PBS沖洗2遍，放在冰盒上，加入RIPA裂解液，用組織研磨器研磨后轉至離心管，13 500 r/min離心20 min，收集上清蛋白。

取對數生長期的PC12細胞，以1×106個/孔接種于6孔板，培養過夜。設置對照組、模型組、丙戊酸鈉（1 μmol/L）組和ABP（80 μg/mL）組，各給藥組加入藥物培養24 h，模型組和各給藥組再加入0.5 mmol/L H2O2培養24 h，對照組常規培養，收集細胞。加入RIPA裂解液提取蛋白。

采用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度，95 ℃金屬浴5 min使蛋白變性。蛋白樣品經10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉至PVDF膜，于5%脫脂牛奶中封閉，加入一抗，4 ℃搖床過夜；TBST緩沖液洗滌3次，每次5 min，加入二抗（1∶5000），室溫孵育1 h，熒光發光曝光，采用凝膠成像儀進行成像分析。

2.9 統計學分析

3 結果

3.1 ABP減輕小鼠癲癇癥狀

如圖1所示，與對照組比較，模型組小鼠表現出前肢痙攣并伴隨不同程度的直立、強直陣攣和跌倒等的癥狀；與模型組比較，丙戊酸鈉組、癲癇寧片組和ABP高劑量組均能明顯改善小鼠癲癇癥狀，同時能夠顯著延長小鼠驚厥潛伏期（＜0.01），減少癲癇持續時間（＜0.01），顯著降低軀體強直性痙攣發生率和死亡率（＜0.01）。表明高劑量的ABP能夠預防癲癇的發生及發展。

與對照組比較：##P＜0.01；與模型組比較：*P＜0.05 **P＜0.01，下圖同

3.2 ABP減輕癲癇小鼠海馬神經元損傷

如圖2所示，對照組小鼠海馬CA3區錐體細胞形態規則，呈圓形及橢圓形，胞核大而圓，核仁較清晰，細胞排列有規律；模型組小鼠海馬組織CA3區可見少量錐體細胞固縮深染，細胞形狀不規則，少量錐體細胞水腫，胞質疏松；丙戊酸鈉組、癲癇寧片組和ABP高劑量組小鼠海馬錐體細胞排列規則，結構清晰，胞核大而圓，染色質少，核仁明顯，未見明顯異常。表明ABP能夠改善戊四唑誘導的神經元炎癥的發生。

紅色箭頭：炎癥浸潤；黑色箭頭：少量錐體細胞固縮深染，細胞形狀不規則，少量錐體細胞水腫，胞質疏松

3.3 ABP抑制癲癇小鼠海馬星形膠質細胞活化

如圖3所示，與對照組比較，模型組小鼠海馬中GFAP陽性表達面積明顯增加；與模型組比較，丙戊酸鈉組、癲癇寧片組和ABP高劑量組GFAP陽性表達面積明顯降低。表明ABP能夠抑制戊四唑誘導的癲癇小鼠海馬星形膠質細胞的活化。

3.4 ABP降低癲癇小鼠海馬組織中Caspase-3、GFAP、GAD65、GAD67、GIRK1、NMDAR1水平并升高GABA AR水平

如圖4所示，與對照組比較，模型組小鼠海馬組織中Caspase-3、GFAP、GAD65、GAD67、GIRK1及NMDAR1水平均顯著升高（＜0.01），GABA AR水平顯著降低（＜0.01）；與模型組比較，丙戊酸鈉組、癲癇寧片組和ABP高劑量組海馬組織中Caspase-3、GFAP、GAD65、GAD67、GIRK1及NMDAR1水平均顯著降低（＜0.05、0.01），GABA AR水平顯著升高（＜0.01）。表明ABP能夠逆轉戊四唑誘導的凋亡因子、神經遞質以及離子受體異常水平。

圖3 ABP對戊四唑致癇小鼠海馬組織GFAP蛋白表達的影響(×200)

圖4 ABP對戊四唑致癇小鼠海馬組織中凋亡因子及神經遞質水平的影響(, n = 10)

3.5 ABP下調癲癇小鼠海馬組織中DJ-1、P-SP1、Nrf2、HO-1蛋白表達

如圖5所示，與對照組比較，模型組小鼠海馬組織中DJ-1、p-SP1、Nrf2及HO-1蛋白表達水平均顯著升高（＜0.01），SP1的表達無明顯變化；與模型組比較，丙戊酸鈉組、癲癇寧片組和ABP高劑量組海馬組織中DJ-1、p-SP1、Nrf2及HO-1蛋白表達水平均顯著降低（＜0.01）。表明戊四唑誘導的癲癇機制與氧化應激密切相關，ABP能夠通過抑制氧化應激相關蛋白的表達發揮預防癲癇的作用。

3.6 ABP抑制H2O2誘導的PC12細胞凋亡

如圖6所示，ABP（20～80 μg/mL）對PC12細胞無毒性作用。與對照組比較，H2O2誘導24 h后，PC12細胞活力明顯下降（＜0.01）；與模型組比較，40、80 μg/mL的ABP均能預防神經元損傷（＜0.01），且80 μg/mL ABP預防神經元損傷作用最強。表明ABP能夠抑制H2O2導致的PC12細胞凋亡，發揮抵抗氧化應激反應的作用。

3.7 ABP下調H2O2誘導的PC12細胞中DJ-1、P-SP1、Nrf2、HO-1蛋白表達

如圖7所示，與對照組比較，模型組細胞DJ-1、p-SP1、Nrf2及HO-1蛋白表達水平均顯著升高（＜0.01），SP1表達無明顯變化；與模型組比較，丙戊酸鈉組和ABP組DJ-1、p-SP1、Nrf2及HO-1蛋白表達水平均顯著降低（＜0.01）。表明ABP能夠抵抗H2O2誘導的氧化應激反應，通過調控氧化應激相關通路來發揮預防癲癇的作用，與體內實驗結果一致。

圖5 ABP對戊四唑致癇小鼠海馬組織中氧化應激相關蛋白表達的影響(, n = 10)

圖6 ABP對PC12細胞 (A) 和H2O2誘導的PC12細胞(B) 活力的影響(, n = 5)

圖7 ABP對H2O2誘導的PC12細胞中氧化應激相關蛋白表達的影響(, n = 5)

4 討論

癲癇的發病以腦神經元過度放電導致反復性、發作性和短暫性的中樞神經系統功能失常為特征。海馬神經元細胞是癲癇的主要病變部位之一，主要參與記憶、情感認知等功能的神經共病[13]，其神經元損傷甚至死亡可引起海馬結構完整性丟失[14]，可誘發記憶障礙[15-16]。癲癇發作已被證明以多種方式參與海馬神經源性級聯反應[17]。神經元興奮性和抑制性的不平衡被認為是癲癇發生的原因之一。

近年來，越來越多的研究表明癲癇發作與氧化應激之間存在密切聯系[18]。氧化應激能夠通過激活相關信號通路增加神經元細胞的超興奮性，甚至引起細胞死亡[19]，降低癲癇發作的閾值，從而導致癲癇的發生和發展[20]。另外，癲癇發作會產生大量自由基，這時抗氧化系統和增多的氧自由基之間平衡失調[21]，導致氧化應激損傷，在多種癲癇動物模型中和癲癇患者腦組織標本及血液標本中，均可檢測到氧化應激標記物，如誘導型一氧化氮合酶[22]。針對癲癇的氧化應激研究為進一步明確癲癇的發病機制提供了重要方向。調節氧化應激的過程受諸多因素的影響，因此，更好地了解氧化損傷的發病機制和分子變化，為預防癲癇提供新思路是必要和緊迫的。來自中藥的多糖因其獨特的抗氧化能力而受到廣泛關注[23-24]。本研究對ABP預防癲癇的作用及其機制進行探索。

癲癇發作期間神經系統病理損傷的機制仍有待充分了解。研究表明線粒體功能障礙可能導致廣泛的急性和慢性神經系統疾病，包括癲癇和創傷性腦損傷。在線粒體參與癲癇發作的病理過程中，導致活性氧大量蓄積并造成神經元的氧化損傷和死亡[25]，加重癲癇的發作，因此神經元的死亡在癲癇發展中起重要作用。此外，線粒體生物能學受損與大多數癲癇誘導的自由基產生有關[19]。當機體處于病態時，體內氧化還原失衡，氧自由基過度堆積，線粒體因此而受到損傷，引起一系列的細胞功能障礙，進而參與癲癇的病理變化。關于癲癇動物模型的研究表明，線粒體內氧化大分子損傷發生在癲癇發生發展的不同階段[26]。本研究結果表明，80 mg/kg的ABP可顯著降低癲癇發作嚴重程度，延長癲癇發作潛伏期，因此，以80 mg/kg的ABP進行后續機制研究。此外，癲癇發展過程中發生的病理生理變化，如海馬細胞丟失等，表明線粒體和氧化還原過程在疾病發展的不同方面具有潛在作用[27]。研究表明，海馬CA1區是難治性癲癇神經元病理變化的主要部位[28]。在難治性癲癇的動物研究中推測癲癇的發作和發展與腦組織中神經元的丟失存在關系[20]。經組織病理學圖像分析，由戊四唑誘導的小鼠海馬CA1和CA3區結果顯示有明顯的細胞損傷跡象[29]。此外，本研究結果表明ABP對神經元的丟失和細胞凋亡產生顯著的影響。

氧化應激和線粒體功能障礙在人類患者和實驗模型癲癇的發病機制中起著關鍵作用[30-31]。DJ-1是一種氧化還原敏感蛋白，保護神經元免受氧化應激和細胞死亡的影響。在分子水平上，當受到氧化應激影響時，DJ-1通過破壞氧化應激傳感器蛋白（Kelch-like ECH-associated protein 1，Keap1）/Nrf2復合物來阻止Nrf2與Keap1的相互作用，充當Nrf2的穩定劑[32]。Nrf2是細胞氧化還原穩態的主要調節因子，對維持線粒體完整性和防止自由基產生導致細胞功能障礙至關重要[33]。在穩態條件下，Nrf2與Keap1結合，促進Nrf2泛素化和蛋白質體降解，導致基礎Nrf2活性降低[34]。在氧化應激條件下，Keap1被氧化，導致其對Nrf2的親和力降低，從而使Nrf2易位到細胞核。Nrf2是多種細胞保護、抗氧化和抗炎途徑相互干擾的關鍵攔截點[34]。Nrf2及其下游信號HO-1充當促氧化應激源的傳感器，促氧化應激源作為一種代償機制被誘導。本研究結果顯示，戊四唑致癇小鼠海馬組織和H2O2誘導的PC12細胞中Nrf2蛋白表達顯著高于正常水平，在ABP預處理組中，Nrf2和HO-1蛋白表達均顯著降低。

綜上所述，ABP使戊四唑致癇小鼠海馬組織中DJ-1、Nrf2和HO-1的表達水平恢復正常，表明ABP預處理可以減輕癲癇發作期間DJ-1/Nrf2/HO-1介導的癲癇氧化應激引起的損傷，從而發揮預防癲癇的作用。但這種作用是該組分總體效果的體現，還是某一種或多種成分作用的效果，還需要進一步研究明確。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Effect of polysaccharides from aerial parts ofon oxidative stress in brains of epileptic mice based on DJ-1/Nrf2/HO-1 signaling pathway

LIU Yan1, WANG Min1, LI Xiao-mao2, KUANG Hai-xue1, YANG Bing-you1

1. Heilongjiang University of Chinese Medicine, Key Laboratory of Basic and Application Research of Beiyao, Ministry of Education, Harbin 150040, China 2. Jiangsu Food & Pharmaceutical Science College, Huai’an 223023, China

To investigate the preventive effect and mechanism of polysaccharide from aerial parts of(ABP) on pentylenetetrazole-induced epilepsy in mice.C57BL/6 mice were randomly divided into control group, model group, sodium valproate (125 mg/kg) group, epileptic tablets (1200 mg/kg) group and ABP high-, low-dose (100, 25 mg/kg) groups, with 10 mice in each group. Each administration group was ig corresponding drug, control group and model group were ig equal volume 0.5% sodium carboxymethyl cellulose solution, once a day for 7 d. 60 min after the last administration, except for control group, other groups were ip pentylenetetrazole (60 mg/kg). The effect of ABP on preventing epilepsy was evaluated by behavior; The pathomorphological changes of hippocampal neurons were detected by hematoxylin eosin (HE) staining and immunohistochemistry; The levels of cystein-asparate protease-3 (Caspase-3), glial fibrillary acidic protein (GFAP), glutamic acid decarboxylase 65 (GAD65), GAD67, G protein gated inwardly rectifying K channels 1 (GIRK1),-methyl--aspartate acid receptor 1 (NMDAR1) and γ-aminobutyric acid type A receptor (GABA AR) in hippocampus were detected by ELISA; Western blotting was used to detect DJ-1, specific protein 1 (SP1), p-SP1, nuclear factor E2 related factor 2 (Nrf2) and heme oxygenase-1 (HO-1) protein expression in hippocampus. The oxidative stress model of PC12 cells induced by hydrogen peroxide (H2O2) was used to verified.Compared with model group, ABP significantly improved the epileptic symptoms of mice, which showed a decrease in rate of body stiffness and mortality (< 0.01); Hippocampal pyramidal cells were regularly arranged with clear structure, and GFAP positive expression area was reduced; The levels of Caspase-3, GFAP, GAD65, GAD67, GIRK1 and NMDAR1 in hippocampus were significantly decreased (< 0.01); DJ-1, p-SP1, Nrf2 and HO-1 protein expressions in hippocampus of epileptic mice and H2O2-induced PC12 cells were significantly decreased (< 0.01).ABP can reduce DJ-1/Nrf2/HO-1 mediated oxidative stress during epileptic seizures, thus playing a role in preventing epilepsy.

DC.; polysaccharides; epilepsy; oxidative stress; DJ-1/Nrf2/HO-1 pathway

R285.5

A

0253 - 2670(2023)01 - 0142 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.01.017

2022-08-03

國家自然科學基金面上項目（81973440）；黑龍江省“頭雁”團隊支持項目（黑龍江省頭雁行動領導小組文件[2019]5號）

劉 艷（1987—），博士，副教授，主要研究方向為中藥藥效物質基礎研究。E-mail: lifeliuyan@163.com

通信作者：楊炳友（1970—），博士，教授，主要研究方向為中藥藥效物質基礎研究。Tel: (0451)82193007 E-mail: ybywater@163.com

[責任編輯 李亞楠]