臨床基因擴增實驗室進修生帶教探討

宋麗影，李雨艷，周婷婷，路放

吉林金域醫學檢驗所有限公司，吉林長春 130000

該公司PCR實驗室于2009年成立并通過臨檢中心首次驗收，2019年6月17日吉林金域正式被授予為吉林省內首家也是唯一一家“基因擴增檢驗實驗室崗前培訓實驗操作基地”。

該檢測方法可用于檢測艾滋病、乙型肝炎、人禽流感等病毒感染，檢測方法為通過病毒內所含基因進行擴增的方法，判斷出一些病毒含量不高感染者體內是否含有特定病毒。2020年后，該公司在省內開展多家PCR實驗室，而作為省內培訓基地承接了來自多家單位的PCR進修人員的帶教工作。PCR技術具備特異性高、靈敏度強、對樣品要求低等特點，但同時整個檢測操作步驟較為繁瑣，自動化程度低，整個實驗過程中任何一個環節的疏忽都可能對結果造成嚴重影響[1-2]。故此帶教老師需根據進修生進修目的，定制培訓計劃，幫助其明晰重點，做到有的放矢。兩年來，該科室一直從事臨床基因擴增實驗室進修生帶教工作，總結出幾點帶教體會，現報道如下。

1 科室設備及項目介紹

該科室擁有一支專業的技術團隊，具有完整的實驗室質量安全管理體系及規范化的室內質控管理。科室所用主要檢測設備包括ABI7500熒光定量PCR儀、MA-6000熒光定量PCR儀、Luminex200流式熒光點陣儀、DML2000雜交信號擴大儀、德同化學發光免疫分析儀及LifeECO基因擴增儀等。檢測項目近20項，包括HPV類宮頸癌篩查相關項目檢測系列、肝炎類檢測系列、葉酸代謝能力基因檢測系列、性病感染系列、septin9腸癌基因檢測等。

2 根據進修目的，制訂培訓計劃，明確重點

進修生學習時間為期1個月，由于時間較短所以必須有針對性地制訂培訓計劃，便于進修人員充分利用時間掌握要學習的知識。在制訂培訓計劃前，應了解學習需求，制訂更合理、更實用的教學內容。由于其所在原單位的情況不同，進修的目的也有所區別，有的進修生所在醫院PCR實驗室剛剛成立；有的醫院已開展幾項常規類項目，預計打算開展更多類型病毒感染檢驗項目。因此在培訓計劃中將學習內容分為3個類別，即了解、掌握和熟練掌握。有側重點帶教更有助于進修人員在有限的時間內掌握自己要學習的知識。

3 實施培訓過程

雖然大部分進修生均是具備一定工作能力和經驗的檢驗人員，但基因擴增技術能夠在短時間內完成擴增，加之PCR檢驗程序復雜，可涉及標本采集、編號、準備試劑、提取、上機擴增以及產物檢測等諸多環節，每一個步驟的嚴謹程度和準確率均關乎檢驗結果。也正因如此，使得大部分進修者帶有習慣性和經驗性錯誤的檢驗方式被不斷放大，出現不易察覺的風險。故此進修生在進入實驗室正式學習之前，第一件事為對其進行崗前教育，重點強調實驗室的分區制度、單一流向制度、日常、生物安全等。第二為強化職業責任感的培養，灌輸責任意識、服務意識，使得進修生可以時刻保持精益求精的專業態度。其次進行專業知識學習，并在培訓過程中要切實關注和掌握進修生學習動態，針對錯誤問題及時糾正，嚴格按照標準化操作流程進行操作。

4 增強進修生的安全防護意識

作為標準化的PCR實驗室，根據實際情況將其劃分為以下幾大主要區域，如試劑待檢區、標本制備區、檢測分析區等，而介于檢測標本具有一定傳染性和檢測重要性，各區域之間主要采用傳遞柜完成物品傳遞，以此可避免因人為工作造成的誤差等。同時，該科室明確規定不可將任何標本隨意帶出PCR實驗室，在避免污染環境的同時也要保障區域人民安全。而因當下科室所開展的所有檢測項目均具有一定傳染性，所以對所檢測的樣本，如血液、分泌物等均一律視為傳染性物質，檢測人員必須按照統一規定制度采取相應的防護措施，并明晰檢驗樣本前中后的順序。①檢驗前：個人防護佩戴齊整，PCR實驗室人員應帶無粉乳膠手套，因有粉手套會抑制PCR反應，影響檢測結果[3-4]。檢測不同類型樣本處理區實驗人員應采用三級防護,熟練防護服的穿脫順序。②檢驗中：將可能出現的職業風險告知如下，因為操作失誤或者人為失誤等導致玻璃器皿的破損、液體飛濺等因素可致使檢測人員感染檢測病毒，如乙肝、丙肝病毒、艾滋病病毒、梅毒等。因為實踐操作過程中，使用相關儀器將產生人類肉眼和嗅覺無法感染到的氣體，可能會增加呼吸道病毒感染概率。由于實驗室電器設備眾多，使用不當會發生觸電事故；由于接觸到患者的血液、分泌物等標本和醫療廢物，可能會引起病原微生物的感染；PCR實驗引起的感染性物質局部擴增，可能引起擴散和感染。如果檢測人員意識到上述職業風險或者發生上述情況后應立即停止當下工作，對于身體存在實質性傷口的人員應該立即從近心端向遠心端擠壓傷口，盡可能擠壓出損傷處受到污染的血液，并使用流動水源反復沖洗[5-6]。沖洗完畢后涂抹消毒物品，必要時可包扎傷口；如果無實質性傷口通過黏膜發生職業暴露時，可及時使用沖淋裝置；如通過眼睛進行傳播，需立即使用洗眼器完成眼部沖洗；無論任何職業暴露風險發生時，必須保持冷靜，及時處置，并于傷后24 h內完成上報，告知生物安全主管，采取后續監測流程[7-8]。③檢驗后：樣本嚴格按照SOP上面要求的溫度及時限進行保存。實驗結束后，對各區的工作臺面用10%次氯酸鈉液消毒液進行消毒清潔，然后用75%乙醇清潔，再用紫外線殺菌車照射1 h；地面用10%次氯酸鈉液消毒液進行消毒清潔，打開固定紫外燈消毒2 h。以《醫療廢物管理條例》為前提，所有醫療廢物必須遵守該規定條例規范處理，并必須區分生活垃圾和醫療垃圾，對于醫療垃圾可將其放置于黃色標志垃圾袋、對于生活垃圾可將其放置于黑色標志垃圾袋，并由專人完成不同垃圾的收集、處理等流程。

5 培養質量控制理念，確保結果準確性

檢驗工作質量為先，其檢測出的最終結果直接關乎臨床診斷和后續采取的治療方式，關系到患者個人生命安全、家庭生活等，由此說明檢測質量的重要性。而對于提升檢驗質量，只有不斷強化各個不同檢驗流程的質量控制，提高操作規范和人員意識，才能從根本上幫助臨床提供更加精準的檢測數據，為臨床醫師后續采取的診療計劃打下良好依托[9-10]。“每一例標本都是一顆期待的心”，我們的質量方針是：公正、準確、快速、創新，打造無縫鏈接的服務鏈，追求零缺陷的質量目標。質量是生存的根本，質量體系文件應本著系統性、協調性、唯一性和適用性的原則。臨床檢驗是應用成熟的技術及方法對患者的臨床標本進行檢測，要求每一次檢測以及對每一份標本的檢測都必須準確、及時，這就要求實驗室必須有嚴格的質量保證程序[11-12]。在帶教過程中，要培養進修生質量控制的理念，掌握定性及定量項目質控框架的建立，熟知質控規則。以乙肝病毒（HBV）為例，每批檢測至少有待檢血清、HBV-PCR反應液20管（20μl/管）、HBVDNA裂解液、陽性模板、溴化乙錠、PCR擴增儀、電泳儀、紫外線分析儀，質控品隨機放在臨床標本中，參與從提取到擴增的全過程，讓進修生理解室內質量控制是控制實驗的重復性和精密度，檢驗實驗的準確度，提高本室常規工作中的批間、批內標本檢測的一致性[13-14]。真正做到“寫你所做、做你所寫、記錄你做和分析你做”，明確人員的職責、權限和行為規范，為實驗室實現質量目標提供最有效、最切實可行的辦法。

6 提升操作技能，夯實理論知識

除了掌握理論知識，還應加強進修生的操作技能，更好地將理論與實踐相結合，學習過程中熟讀試劑說明書及項目SOP。能夠熟練掌握所學項目的方法學性能驗證和實驗操作，樣本的結果分析處理。精密度、正確度、線性、抗干擾能力等均為定量檢測方法和程序分析性能驗證內容，而測定下限、準確度以及特異性等均為定性檢測項目中應該驗證的內容[15-16]。熒光定量PCR儀和移液器均為臨床基因擴增實驗室至關重要的設備，帶教老師需要就此儀器進行詳細和全面的普及介紹，其中需包括PCR儀器使用方法、儀器保養、注意事項等[17]。同時移液器的正確使用十分關鍵，很容易在使用中出現各種細節問題，影響檢測結果，如移液器吸樣過快，導致氣溶膠產生，增加職業暴露風險，吸樣量不足，加樣器不穩污染其他標本等，使得檢測結果存在較大出入等。使用后未將移液器歸回最大量程等，這些都將直接導致實驗結果的偏差。因此要求進修生的所有操作必須在帶教老師的指導、監督下完成，當場糾正學生錯誤或不當的操作并說明原因，以確保結果的準確性。

7 制訂考核制度

進修生需要在培訓完成后根據檢驗操作標準通過考核，具體包括檢測項目操作、設備維護、操作熟練度、檢測結果準確性測評以及實驗室規章制度、臨床檢測意義等相關理論知識，所有進修生需通過考核標準。

8 結語

我國人口密度較高，在國家的重點關注下，很多基層醫院均紛紛建立了分子生物實驗室。分子生物學技術發展迅速，已應用到臨床各個方面，作為醫學檢驗分子生物實驗室檢驗人員，必須具有規范的操作技能、扎實的理論知識，才能更好地服務于臨床。針對不同目的進修學員要因材施教，計劃合理、貼近實際的學習方案，使進修生通過培訓，熟練掌握和運用臨床基因擴增實驗室的基礎知識、流程規范、管理體系、質量控制和性能驗證等，為今后從事日常臨床分子檢驗工作積累經驗。進修生在按照培訓計劃完成規定的培訓任務后，應分階段進行考核，根據人員的接受程度隨時進行調整，了解進修生在培訓過程中所存在的問題并及時解決，真正把培訓工作落到實處。在帶教過程中，我們還需與時俱進，努力提高自身知識水平，總結經驗方法，加強交流，做到教學相長，以此培養出更多技能全面、理論扎實、醫德高尚的優質檢驗人才。