敲低FAM83B對舌鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖、遷移和凋亡的影響

黑乃恒 劉 鵬 陳彥平 靳琳玉 包 陽

舌鱗狀細(xì)胞癌在口腔癌中發(fā)病率最高，舌鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病率呈逐步上升的趨勢[1，2]，患病年齡也呈現(xiàn)出年輕化的勢頭[3，4]。舌鱗狀細(xì)胞癌患者5年生存率不足50%，惡性程度高，預(yù)后差。它的病因不明，危險因素主要包括遺傳因素、環(huán)境因素、局部不良刺激等。最新研究表明，這些危險因素繼續(xù)影響口腔組織細(xì)胞的生理環(huán)境，不同程度地導(dǎo)致分子表達(dá)異常或紊亂，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，包括FAM83B的表達(dá)。FAM83B已被證實為EGFR/RAS信號通路的重要中介物并在多種癌癥中在mRNA水平高表達(dá)，包括乳腺癌、宮頸癌、膀胱癌、肺癌、睪丸甲狀腺癌和卵巢癌[5]。目前尚未對鱗狀細(xì)胞癌患者中其蛋白表達(dá)及其與臨床病理因素的關(guān)系進(jìn)行詳細(xì)的研究，對FAM83B在舌鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及相關(guān)研究更是鮮有報道。本研究運(yùn)用MTT實驗、劃痕愈合實驗、Ttanswell實驗和流式細(xì)胞技術(shù)分別評價敲低FAM83B舌鱗癌細(xì)胞的增殖能力、遷移能力、侵襲能力及凋亡的變化，初步探討FAM83B在舌鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

資料和方法

1.材料

（1）細(xì)胞株：SCC-9、Cal-27人舌鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株購于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)細(xì)胞中心。

（2）主要試劑及器械：Transwell小室(Corning)，TRIpure（BioTeke），F(xiàn)AM83B antibody（GeneTex），凝膠成像系統(tǒng)（北京六一，北京），熒光定量PCR儀（BIONEER，韓國）。

2.方法

（1）細(xì)胞培養(yǎng)：人舌鱗癌細(xì)胞系SCC-9和Cal-27培養(yǎng)于含有10% FBS的DMEM-F12培養(yǎng)基中，培養(yǎng)箱的條件設(shè)置為37℃，5% CO2將細(xì)胞置于其中培養(yǎng)。選擇對數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

（2）小干擾RNA引物設(shè)計、分組及轉(zhuǎn)染：根據(jù)FAM83B的基因序列，通過特異性siRNA引物設(shè)計網(wǎng)站設(shè)計……