不同姜炙方法對姜梔子揮發(fā)性成分的影響

鐘 瑞， 付小梅， 高 莎， 黃 瀟， 潘玲玲， 劉 婧

(江西中醫(yī)藥大學藥學院，江西 南昌 330004)

梔子是茜草科植物梔子GardeniajasminoidesEllis的干燥成熟果實，性寒，味苦，具有瀉火除煩、涼血解毒、清熱利濕、消腫止痛的功效，是臨床常用中藥，姜炙是其主要炮制方法之一，利用姜辛溫之性來抑制梔子寒性，同時增強其和胃止嘔的作用。

目前，姜梔子廣泛應用于中醫(yī)臨床及中藥復方制劑中[1-3]，如2020年版《中國藥典》收載的導赤丸、黃連上清丸、加味逍遙丸、小兒肝炎顆粒以及常用的清熱劑“龍膽瀉肝丸”“牛黃解毒丸”和祛痰劑“二母寧嗽丸”等均以姜梔子組方配伍入藥。然而，各地炮制規(guī)范中的姜梔子姜炙方法均不相同，導致流通于市場中的姜梔子飲片品質(zhì)有所差異，先前研究大多圍繞一些常見成分(如梔子苷、二萜色素類[4-5])進行分析，但忽略了揮發(fā)油也是主要藥效成分。因此，本實驗探討不同姜炙方法對姜梔子中揮發(fā)性成分的影響，以期為其質(zhì)量評價標準建立提供依據(jù)和支撐。

1 材料

GCMS-TQ8040 NX型三重四級桿氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(日本島津公司)；YP20002型電子天平(上海光正醫(yī)療儀器有限公司)。梔子采自江西新干梔子GAP種植基地，生姜購于江西(產(chǎn)地江西)，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學藥學院范崔生教授鑒定分別為茜草科植物梔子GardeniajasminoidesEllis的果實、姜科植物姜ZingiberofficinaleRoscoe的新鮮根莖，憑證標本保存于江西中醫(yī)藥大學中藥鑒定學科組，梔子按2020年版《中國藥典》方法進行干燥，即除去果梗和雜質(zhì)，蒸至上氣或置沸水中略燙，取出，干燥，放入自封袋中保存?zhèn)溆谩Ｒ宜嵋阴ァo水硫酸鈉均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 姜汁制備

2.1.1 生姜榨汁 生姜洗凈切片，加其15%用量的水壓榨4次，過濾，低溫旋轉(zhuǎn)濃縮，定容至1 g/mL，即得。

2.1.2 生姜煮汁 生姜洗凈切片，加5倍量水煎煮3次，每次30 min，合并汁液，濾過，濃縮至1 g/mL，即得，供5號樣品炮制用。

2.2 姜梔子制備 按照表1中炮制規(guī)范中要求進行炮制，得到樣品1～8。

表1 各地姜梔子炮制規(guī)范

2.3 揮發(fā)油提取 取表1姜梔子各100 g，過40目篩，加6倍量水浸泡過夜，加熱并保持微沸狀態(tài)，采用水蒸氣蒸餾法分別提取7 h至揮發(fā)油不再增加，收集揮發(fā)油，500 μL乙酸乙酯溶解，無水硫酸鈉脫水干燥。結(jié)果，1～8號樣品揮發(fā)油含量分別為0.9、1.2、1.4、1.3、1.4、1.2、1.5、1.4 μL/g。

2.4 分析條件 DB-5MS色譜柱(0.25 mm×30 m，0.25 μm)；程序升溫(初始溫度60 ℃，保持3 min，5 ℃/min升至250 ℃，保持5 min)；載氣高純氦氣；體積流量1.4 mL/min；進樣量1 μL；氣化溫度250 ℃；分流進樣，分流比10∶1。El離子源70 eV；離子源溫度200 ℃；全掃描采集模式，質(zhì)量范圍m/z50～500。

2.5 GC-MS分析 采用NIST Version 1.7圖譜庫檢索，結(jié)合保留時間確認化學成分，按峰面積歸一法進行計算，見圖1、表2。

表2 揮發(fā)油GC-MS分析結(jié)果

2.6 數(shù)據(jù)分析

2.6.1 主成分分析 以共有峰峰面積為變量，采用SPSS 19.0軟件進行主成分分析，結(jié)果見表3，可知前2種主成分累積貢獻率達98.803%，即能反映揮發(fā)油98.803%的信息，其中第一主成分特征值為6.923，貢獻率為86.538%；第二主成分特征值為0.981，貢獻率為12.265%。再經(jīng)方差最大正交旋轉(zhuǎn)后的因子載荷矩陣分析，篩選出有實際意義的鑒別因子，結(jié)果見表4，可知第一主成分與樣品1～4、6～8呈高度正相關(guān)，可聚為一類；第二主成分與樣品5呈高度正相關(guān)，單獨聚為一類。

表3 共有峰特征值

表4 旋轉(zhuǎn)變化后的因子矩陣

2.6.2 判別分析 以8個樣品所有色譜峰為因變量，采用SPSS 19.0軟件進行判別分析，將樣品1～4、6～8作為組別1，樣品5作為組別2，判別函數(shù)的相關(guān)性為0.873，結(jié)果見表5。由此可知，各樣品能按照預設(shè)的組別進行正確判別，樣品1～4、6～8可聚為一類，樣品5單獨聚為一類，表明不同姜炙方法存在一定差異性，能區(qū)分為2類。

表5 判別函數(shù)分類結(jié)果

3 討論與結(jié)論

本實驗按照8種姜炙方法對梔子進行炮制，并通過GC-MS法對其揮發(fā)性成分進行分析，從中分別檢出48、47、44、47、42、48、46、48種成分，其中共有成分16種，分別為2-正戊基呋喃、2,2,5,5-四甲基-3環(huán)戊烯-1-酮、異佛爾酮、4-亞甲基異佛爾酮、(E)-2-癸烯醛、茴香腦、(E,Z)-2,4-癸二烯醛、(E,E)-2,4-癸二烯醛、(+)-β-瑟林烯、2,4-二叔丁基酚、2-十五烷酮、棕櫚酸甲酯、鄰苯二甲酸二丁酯、bicyclo[9.3.1]pentadeca-3,7-dien-12-ol，4,8,12,15,15-pentamethyl-,[1R-(1R*,3E,7E,11R*,12R*)]、亞油酸甲酯、(E)油酸甲酯，占揮發(fā)油總量的69.80%～81.81%。

與生品揮發(fā)性成分進行比較，發(fā)現(xiàn)姜炙品中共有成分種類不變，但含量變化明顯，如2-正戊基呋喃、(E)-2-癸烯醛、茴香腦、(E,Z)-2,4-癸二烯醛、(E,E)-2,4-癸二烯醛等均呈現(xiàn)降低趨勢，占揮發(fā)油總量的6.91%～52.03%；2,4-二叔丁基酚、2-十五烷酮、棕櫚酸甲酯、鄰苯二甲酸二丁酯、bicyclo[9.3.1]pentadeca-3,7-dien-12-ol、亞油酸甲酯、4,8,12,15,15-pentamethyl-,[1R-(1R*,3E,7E,11R*,12R*)]、(E)油酸甲酯等呈升高趨勢，占揮發(fā)油總量的11.65%～69.56%。另外，8種姜炙品中來源于生品的成分數(shù)量分別為34、34、35、34、21、38、36、32種；與生姜比較，姜炙品中大多數(shù)揮發(fā)性成分不再出現(xiàn)，并且種類較少，僅分別為7、5、7、4、2、6、4、13種，同時含量呈降低趨勢；與生品、生姜比較，8種姜炙品中新增成分數(shù)量分別為9、10、5、11、21、6、8、5種，消失成分數(shù)量分別為48、50、48、51、66、45、49、44種，可能是梔子姜炙后苦寒藥性緩和、溫中止嘔作用增強的主要原因之一，表明不同姜炙方法對姜梔子揮發(fā)性成分含量、化學成分組成仍存在較大影響[14-16]。

為了進一步研究不同姜炙方法之間的區(qū)別，本實驗采用主成分分析、判別分析對姜梔子揮發(fā)性成分進行研究，發(fā)現(xiàn)第1～4、6～8種樣品姜炙方法為一類，第5種樣品單獨為1類，區(qū)別在于姜汁噴灑的方法，其中第2～4、6～8種樣品均為“悶潤炒制”，第5種樣品為“噴汁炒制”，表明姜炙噴灑方式對其揮發(fā)性成分含量及化學成分組成產(chǎn)生較大影響。另外，在第1種姜炙方法中雖然姜汁噴灑方法也采用了“噴汁”，但由于采用了較強的炮制火力，基本等同于炒炭的溫度，而且其間還需要滅火星，故梔子的細胞、組織結(jié)構(gòu)更疏松，更易于與姜汁進行結(jié)合反應，能達到“悶潤”效果，故梔子炒制的程度在一定程度上也會影響姜梔子揮發(fā)性成分種類和含量。

綜上所述，不同姜炙方法對姜梔子揮發(fā)性成分總量及化學組成存在一定影響。今后，將結(jié)合姜梔子溫中止嘔藥理作用來確定其主要藥效活性成分，從而為規(guī)范相關(guān)炮制工藝及質(zhì)量標準提供理論依據(jù)。