UPLC-Q-TOF-MS/MS法快速篩查保健酒中16種酞酸酯

馬春艷， 段 瓊， 平惠娟， 孟 珊， 封淑華

(河北省藥品醫療器械檢驗研究院，河北 石家莊 050200)

酞酸酯被稱為塑化劑、增塑劑，在塑料工業中大量使用, 成為全球性的主要環境污染物[1]，故不能添加在食物中，也不允許用于食品包裝材料，并且該成分在乙醇中有良好的溶解性，在藥酒及保健酒生產、加工、儲藏過程中很容易溶解到酒中。保健酒是使用蒸餾酒浸提藥食兩用藥材(海馬、鹿茸、人參等)而制得的澄清透明的液體制劑，含有大量糖分、色素、酯類、醇類，會造成酞酸酯的提取困難。

目前，酞酸酯類的檢測方法有氣相色譜法[2]、液相色譜法[3-5]、氣質聯用法[6-14]、液相色譜-三重四極桿質譜聯用法[15-17]。本實驗采用超高效液相色譜-四極桿-飛行時間高分辨質譜(UPLC-Q-TOF-MS/MS)法，基于一級母離子的精確質量數、同位素豐度比、二級碎片離子、保留時間對保健酒中16種酞酸酯進行快速篩查，以期保證其安全性。

1 材料

Triple TOF 5600+高分辨質譜儀(美國AB Sciex公司)；LC-30AD超高效液相色譜儀(日本島津公司)；旋轉蒸發儀(瑞士Buchi公司)；加熱板(美國Thermo公司)；Kinetex Biphenyl色譜柱(50 mm×3.0 mm，2.6 μm，美國菲羅門公司)；Milli-Q超純水裝置(美國Millipore公司)。

甲酸(德國Sigma公司)；甲醇、乙腈(美國Fisher公司)；鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二異丁酯、鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯、鄰苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯、鄰苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯、鄰苯二甲酸二戊酯、鄰苯二甲酸二己酯、鄰苯二甲酸丁基芐基酯、鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯、鄰苯二甲酸二環己酯、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯、鄰苯二甲酸二苯酯、鄰苯二甲酸二正辛酯、鄰苯二甲酸二壬酯均購自德國Dr.Ehrenstorfer公司。25批保健酒均購于市場。

2 方法

2.1 色譜條件 Kinetex Biphenyl色譜柱(50 mm×3.0 mm，2.6 μm)；流動相0.1%甲酸(A)-乙腈(含0.1%甲酸)(B)，梯度洗脫(0～1 min，50%B；1～3.5 min，50%～60%B；3.5～7 min，60%～75%B；7～10 min，75%～100%B；10～11 min，100%B)；體積流量0.3 mL/min；柱溫30 ℃；進樣量5 μL。

2.2 質譜條件 Turbo V離子源；電噴霧電壓5 500 V；去簇電壓80 V；離子源溫度550 ℃；霧化氣(GS1)3.4×105Pa；脫溶劑氣(GS2)3.4×105Pa；氣簾氣2.0×105Pa；TOF-MS一級正離子質譜全掃描，掃描范圍m/z100～650；一級碰撞能量10 V；基于信息觸發采集模式二級質譜全掃描模式，掃描范圍m/z100～650，二級碰撞能量40 V。

2.3 供試品溶液制備 精密稱取樣品5.0 g，置于25 mL具塞磨口瓶中，沸水浴中加熱去除乙醇后加入5 mL蒸餾水，精密加入5 mL正己烷，劇烈振搖2 min，靜置分層，取上清液1 mL，N2吹干，精密加入1 mL乙腈溶解，即得。

3 結果

3.1 提取條件選擇 考察不同體積分數乙醇的提取效果，發現不含乙醇時最好，可能是因為酞酸酯在該溶劑中的溶解性較好，萃取時在有機溶劑、乙醇-水兩相中都有分配。再對沸水浴加熱、減壓旋蒸、氮吹、電熱板直接加熱進行比較，發現沸水浴加熱去除乙醇操作簡單，速度快，提取回收率較高。

3.2 色譜條件優化 考察流動相甲醇、乙腈、甲酸、醋酸銨，發現有機相為甲醇時各酞酸酯能得到良好的分離，但峰形較差；為乙腈時色譜峰峰形尖銳，但普通C18色譜柱分離效果不好，當選用Kinetex Biphenyl色譜柱，并選擇0.1%甲酸、乙腈作為流動相, 此時各酞酸酯具有理想的峰形和分離效果，提取離子流圖見圖1。

3.3 質譜條件優化 對各酞酸酯正負離子掃描模式、碰撞能量進行考察，發現在正離子掃描模式、CE碰撞能量40 V時響應靈敏度高，參數見表1。

表1 各酞酸酯質譜參數

3.4 匹配度分析 樣品總離子流圖及鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二異丁酯、鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯提取離子圖見圖2，四者二級質譜圖(圖3)與對應對照品二級質譜圖進行比對，匹配度分別達99.5%、98.1%、97.6%、98.9%。

3.5 方法學考察 空白基質配制5、10、20、50、100、200 ng/mL對照品溶液，在“2.1”“2.2”項條件下進樣測定，以對照品質量濃度為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)進行回歸，并以信噪比(S/N)大于3為檢出限，大于10為定量限，結果見表2，可知鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯在10～200 ng/mL范圍內線性關系良好(r>0.990 0)，其余14種酞酸酯在5～100 ng/mL范圍內線性關系良好(r>0.990 0)。在空白樣品中加入50 ng/mL對照品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，在“2.1”“2.2”項條件下各進樣測定6次，計算回收率，結果見表2。

表2 各酞酸酯線性關系及加樣回收率試驗結果(n=6)

3.6 樣品含量測定 按上述方法對25批樣品進行酞酸酯快速篩查，發現普遍存在鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯，其中12批鄰苯二甲酸二丁酯含量超過0.3 mg/kg，有1批高達4.3 mg/kg。國家衛生計生委發布d1白酒產品中塑化劑風險評估，指出鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯、鄰苯二甲酸二丁酯含量分別在5、1 mg/kg以下時對飲酒者的健康風險處于可接受水平。按目前食品容器、包裝材料用添加劑使用衛生標準，鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯遷移到食品中的最大量不得超過1.5 mg/kg，鄰苯二甲酸二丁酯不得超過0.3 mg/kg。本實驗發現,鄰苯二甲酸二丁酯含量超過1 mg/kg的現象，說明企業生產過程中可能存在污染，應進一步調查原因。

4 結論

本實驗基于一級母離子的精確質量數、二級碎片離子、保留時間，采用超高效液相色譜-四極桿-飛行時間高分辨質譜(UPLC-Q-TOF-MS/MS)法快速篩查保健酒中酞酸酯，該方法簡便快速，靈敏度高，檢出限低，精密度好，可滿足相關準確定性要求。