HMGA1、S100A4與子宮內(nèi)膜癌浸潤、轉(zhuǎn)移及順鉑耐藥的相關(guān)性

郭 瑋 孫麗莎

子宮內(nèi)膜癌為常見生殖道腫瘤，近年來該腫瘤發(fā)病率逐漸增高，且發(fā)病趨于年輕化，對(duì)女性生命健康有嚴(yán)重危害[1-2]。研究顯示，腫瘤分期、轉(zhuǎn)移等為子宮內(nèi)膜癌患者病情進(jìn)展與預(yù)后的危險(xiǎn)因素[3]。目前臨床評(píng)估患者病情與預(yù)后主要依據(jù)病理和影像學(xué)等檢查結(jié)果，缺少高效特異性腫瘤標(biāo)志物。高遷移率族蛋白A1 (HMGA1)在上皮惡性腫瘤細(xì)胞中呈高表達(dá)，與癌癥進(jìn)展與預(yù)后密切相關(guān)，但臨床關(guān)于其在子宮內(nèi)膜癌中研究較少[4]。S100鈣結(jié)合蛋白A4(S100A4)為鈣離子結(jié)合家族成員，可參與細(xì)胞增殖分化等過程[5]。研究發(fā)現(xiàn)，S100A4在子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌等多腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用[6]。化療為子宮內(nèi)膜癌常見治療方式，其中順鉑具有良好療效，但易產(chǎn)生耐藥性而抑制治療效果[7]。故尋找預(yù)防且逆轉(zhuǎn)子宮內(nèi)膜癌的順鉑耐藥性有效途徑為臨床研究重點(diǎn)。本研究分析了HMGA1、S100A4表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌組織浸潤、轉(zhuǎn)移和順鉑耐藥間的關(guān)系，旨在提供參考。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2019年5月至2021年5月于我院行手術(shù)切除的96例子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本，患者年齡為35～76歲，平均(53.22±11.27)歲；絕經(jīng)52例，未絕經(jīng)44例。納入標(biāo)準(zhǔn)；符合《子宮內(nèi)膜癌診斷與治療指南(第四版)》標(biāo)準(zhǔn)[8]，且經(jīng)手術(shù)病理確診為子宮內(nèi)膜癌；初診患者；納入前無放化療治療，無手術(shù)禁忌。排除標(biāo)準(zhǔn)：心肝腎等器官病變患者；合并其他惡性腫瘤患者；造血功能障礙患者；精神疾病患者。根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)分期[9]分為Ⅰ期63例、Ⅱ期13例、Ⅲ期11例、Ⅳ期9例；WHO子宮內(nèi)膜癌分期標(biāo)準(zhǔn)：G1級(jí)47例，G2+G3級(jí)49例；63例子宮肌層浸潤深度不足1/2，33例浸潤深度≥1/2；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9例：盆腔轉(zhuǎn)移4例、腹主動(dòng)脈轉(zhuǎn)移5例，未轉(zhuǎn)移87例。另選因子宮內(nèi)膜增生手術(shù)切除的病理子宮組織標(biāo)本45例作為對(duì)照組，患者年齡為36～72歲，平均(51.37±10.16)歲；絕經(jīng)27例，未絕經(jīng)18例。兩組資料無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法

HMGA1表達(dá)檢測(cè)方法：收集受試者空腹靜脈血，經(jīng)抗凝處理后，提取受試者外周血RNA，采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(來源于Takara公司)獲取cDNA，產(chǎn)物電泳鑒別，采用RT-PCR檢測(cè)HMGA1表達(dá)。反應(yīng)體系：PCR buffer為6.5 μL，其上下游引物均為2 μL，熒光探針為1 μL，Taq為9.5 μL，cDNA設(shè)為5 μL。反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性5 min；再于94 ℃變性10 s，在64 ℃退火25 s，于72 ℃延伸45 s，重復(fù)以上40個(gè)循環(huán)。引物與探針來源于南京金斯瑞生物科技有限公司。

S100A4表達(dá)檢測(cè)：組織標(biāo)本固定，石蠟包埋后切片；DAB顯色后用蘇木精復(fù)染，梯度脫水后，二甲苯透明并封固；按說明書操作步驟，S100A4兔抗體購于Epitomics公司。

1.3 S100A4陽性判斷

子宮內(nèi)膜腺的上皮細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中有棕黃色顆粒則可判斷為陽性。計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)：切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，于顯微鏡下計(jì)算每個(gè)視野內(nèi)腺上皮細(xì)胞數(shù)與陽性細(xì)胞數(shù)比例。陽性細(xì)胞數(shù)計(jì)分：陽性細(xì)胞占比為0為陰性，計(jì)0分；不足10%計(jì)1分；10%～25%計(jì)2分；26%～50%計(jì)3分；超過50%計(jì)4分。染色程度計(jì)分：未染色計(jì)0分，呈淡黃色計(jì)1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩項(xiàng)計(jì)分相乘分?jǐn)?shù)≥3分表示陽性，反之為陰性[10]。

1.4 術(shù)后隨訪

患者術(shù)后接受順鉑化療，參照WHO腫瘤藥物客觀療效評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)：完全緩解(CR)或部分緩解(PR)為化療有效，穩(wěn)定(SD)或疾病進(jìn)展(PD)為化療無效。經(jīng)1年隨訪顯示，12例化療無效，84例化療有效。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組HMGA1、S100A4表達(dá)比較

子宮內(nèi)膜癌組HMGA1表達(dá)水平高于對(duì)照組(P<0.05)，且S100A4陽性表達(dá)率高于對(duì)照組(P<0.05)，見表1。

2.2 子宮內(nèi)膜癌組織HMGA1、S100A4表達(dá)與臨床病理參數(shù)關(guān)系分析

子宮內(nèi)膜癌組織HMGA1、S100A4表達(dá)情況在不同年齡中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，在組織學(xué)分級(jí)、FIGO分期、肌層浸潤程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、對(duì)順鉑有無耐藥方面，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 子宮內(nèi)膜癌組織中HMGA1、S100A4表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 多因素分析

經(jīng)logistics分析，HMGA1、S100A4高表達(dá)是子宮內(nèi)膜癌組織肌層浸潤≥1/2、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、對(duì)順鉑耐藥的危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見表3。

表3 HMGA1、S100A4高表達(dá)的多因素分析

2.4 相關(guān)性分析

經(jīng)相關(guān)性分析，HMGA1高表達(dá)、S100A4陽性表達(dá)與肌層浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、對(duì)順鉑耐藥呈正相關(guān)(P<0.05)。見表4。

表4 相關(guān)性分析

3 討論

子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率僅次于宮頸癌，多數(shù)患者早期經(jīng)手術(shù)治療具有良好預(yù)后，但晚期患者由于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移導(dǎo)致其預(yù)后較差，復(fù)發(fā)率高[11-12]。子宮內(nèi)膜癌發(fā)病機(jī)制尚不明確，隨著遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等發(fā)展，有研究指出子宮內(nèi)膜癌與原癌基因、抑癌基因等異常表達(dá)有關(guān)[13]。圍絕經(jīng)期女性的子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率高，部分患者未重視該階段陰道出血而錯(cuò)失最佳治療時(shí)機(jī)，導(dǎo)致后期治療的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)增加，不僅影響生活與治療結(jié)果，對(duì)生命也造成威脅。故尋找子宮內(nèi)膜癌的診斷預(yù)測(cè)癌細(xì)胞標(biāo)志物并為患者制定有效措施以提高預(yù)后具有重要意義。

HMGA1為高遷移率蛋白超家族成員，位于真核細(xì)胞中，是非組蛋白染色體結(jié)合蛋白，在多種腫瘤細(xì)胞的染色體斷裂的簇集區(qū)有定位，其中在婦科腫瘤中有特異性表達(dá)[14]。本研究中子宮內(nèi)膜癌組HMGA1表達(dá)水平高于對(duì)照組，表示子宮內(nèi)膜癌患者外周血HMGA1異常高表達(dá)。許海鶯[15]研究顯示，乳腺癌患者病灶組織與血清中HMGA1表達(dá)高于乳腺良性腫瘤者，與本研究結(jié)果類似。S100A4為多肽蛋白，由多個(gè)氨基酸組成，其分子量在11.5 kD。國外研究顯示，S100A4對(duì)細(xì)胞凋亡有抑制作用，促進(jìn)癌細(xì)胞增殖，影響細(xì)胞骨架排卵，對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移有促進(jìn)作用[16]。既往研究顯示，S100A4在膀胱癌、胰腺癌等多腫瘤組織中呈高表達(dá)狀態(tài)，可作為有效腫瘤預(yù)后標(biāo)志物[17]。S100A4在卵巢癌中可正向調(diào)節(jié)，影響患者預(yù)后，該結(jié)果可推測(cè)S100A4對(duì)子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展也有類似作用。由于國內(nèi)外有關(guān)S100A4蛋白在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)及與患者預(yù)后關(guān)系的研究較少。本研究通過免疫組化法檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌與對(duì)照組織中S100A4表達(dá)情況顯示，子宮內(nèi)膜癌組S100A4陽性率高于對(duì)照組織。

本研究通過比較不同臨床病理參數(shù)間的HMGA1、S100A4表達(dá)情況，結(jié)果顯示HMGA1、S100A4表達(dá)在組織學(xué)分級(jí)、FIGO分期、肌層浸潤程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、對(duì)順鉑有無耐藥方面具有顯著差異，后經(jīng)多因素分析顯示，子宮內(nèi)膜癌組織肌層浸潤≥1/2、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、對(duì)順鉑耐藥為HMGA1、S100A4高表達(dá)的危險(xiǎn)因素[18]。化療為子宮內(nèi)膜癌治療主要手段，順鉑為化療一線藥物，其藥敏性為改善患者預(yù)后與生活質(zhì)量關(guān)鍵因素。鉑類藥物是臨床廣泛使用于子宮內(nèi)膜癌的化療藥，但其化療效果不佳，文獻(xiàn)顯示單獨(dú)使用順鉑化療的有效率僅在30%，聯(lián)合化療可提高療效，但也增加毒性反應(yīng)[19]。如何提高順鉑化療敏感性以克服其耐藥性為子宮內(nèi)膜癌的治療研究重點(diǎn)。順鉑為一線化療藥，是腫瘤患者術(shù)后常用藥物，其中最為突出的抗癌機(jī)制為DNA損傷、抑制DNA合成及有絲分裂并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡以殺滅癌細(xì)胞[20]。少數(shù)患者對(duì)順鉑有反應(yīng)，提示腫瘤中有高異質(zhì)性與顯著順鉑耐藥群，可能隨順鉑治療時(shí)間延長、劑量增加而產(chǎn)生一定耐藥性，導(dǎo)致治療失敗[21]。本研究中順鉑耐藥組織HMGA1表達(dá)水平、S100A4陽性表達(dá)率均高于敏感者，提示HMGA1、S100A4高表達(dá)可能為導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌順鉑耐藥原因之一。經(jīng)相關(guān)性分析，HMGA1高表達(dá)、S100A4陽性表達(dá)與肌層浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、對(duì)順鉑耐藥呈正相關(guān)，提示觀察HMGA1、S100A4表達(dá)水平可對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后具有一定判斷價(jià)值。

綜上所述，HMGA1、S100A4在子宮內(nèi)膜癌中高表達(dá)，浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與順鉑耐藥為其危險(xiǎn)因素，可作為評(píng)估子宮內(nèi)膜癌預(yù)后有效指標(biāo)。