骨肉瘤干細胞生物標志物CD117和Stro-1的表達及其臨床意義

謝 靜 曹倩倩 趙 丹 黃宗強

骨肉瘤為臨床多發的非造血型原發性惡性骨腫瘤，多在青少年群體內發病，持續發展會致殘，甚至會致死[1-2]。骨肉瘤治療難度相對較大，化療的高耐藥性與高轉移性一直是臨床治療的兩大難點，且該病發生率逐年上升，給患者身心健康造成眾多負面影響[3-4]。因此，對骨肉瘤進行及時診斷，對指導臨床施行個體化的治療，促使患者獲得良好預后意義重大。相關研究提示，表達CD117與Stro-1的骨肉瘤細胞亞群，存在高水平的耐藥性、高轉移性，因而兩者已被臨床當成骨肉瘤干細胞表層的標志物，目前多用于骨肉瘤的基礎研究[5]。然而關于CD117與Stro-1在骨肉瘤組織中的表達情況的研究報道較為少見，基于此，本研究探究骨肉瘤干細胞生物標志物CD117與Stro-1的表達及其臨床意義，報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2019年5月至2021年5月本院手術切除并經病理檢查確診的58例骨肉瘤患者，將手術切除標本作為骨肉瘤組，另取其中13例患者的瘤旁正常骨組織標本作為骨組織組。納入標準：手術過后未發現腫瘤殘留；患者病歷資料齊全；患者自愿簽署知情同意書；患者依從性較高。排除標準：合并其他惡性腫瘤者；存在免疫系統病癥者；存有凝血功能異常者；存在酒精、藥物依賴史者；合并嚴重的腦器質性疾病者；存在精神疾患者；意識障礙，無法進行正常溝通者。全部患者中男性31例，女性27例；年齡23～49歲，平均年齡(31.57±2.68)歲；病程2～15個月，平均病程(9.63±1.58)個月；TNM分期：17例Ⅰ期，41例Ⅱ～Ⅲ期；腫瘤組織學類型：9例低級別骨肉瘤，49例高級別骨肉瘤；28例有轉移，30例無轉移；體質量指數18～26 kg/m2，平均體質量指數(24.75±0.83)kg/m2。

1.2 方法

組織芯片制備：于手術時留存骨組織標本，存活之后立即以4%多聚甲醛溶液施以24 h的固定，對骨塊施以充分完備的脫鈣；把獲取組織分成5 mm×15 mm×15 mm的組織塊，脫水過后進行石蠟包埋，然后制備成4 μm厚切片染色；由病理醫師依據染色的情況區分骨肉瘤組織和正常骨組織；取58例骨肉瘤和13例癌旁骨組織標本的石蠟片，各樣本取一直徑2 mm、厚度為3～4 mm的組織芯，共71個組織芯，另外設置1個定位芯；采用組織陣列儀將骨肉瘤、癌旁骨組織的71個組織芯依據病理號由小至大排列；在51 ℃下放置8 h過后施以降溫處理，處理完畢過后施行陣列切片，芯片厚度4 μm，染色，顯微鏡下觀察。兩者表達檢測：取組織芯片，經60 ℃施以2 h烘烤，以免疫組織化學法測定CD117、Stro-1水平；將烘烤后的芯片脫蠟至水化；流水洗刷之后，以3%過氧化氫(H2O2)滅活內源性酶，再一次的運用流水清洗，熱抗原修復；PBS洗滌1～2次；滴加含5%牛血清蛋白得到封閉液，20 min封閉，吸去封閉液，滴加CD117、Stro-1抗體，4 ℃過夜；第二天37 ℃復溫45 min過后，以PBS沖洗3次；滴加二抗，在室溫條件下放置30 min；PBS沖洗3次；滴加SABC，37 ℃反應20 min；PBS沖洗4次；蘇木精復染后，脫水、封片，顯微鏡下觀察；依照染色強度與陽性細胞占總細胞數的比率綜合評價；染色強度：無色：0分；淡黃色：1分；棕黃色：2分；棕褐色：3分。陽性細胞所占比例：無陽性細胞：0分；有陽性細胞但≤10%：1分；陽性細胞>10%～50%：2分；>50%～75%：3分；>75%：4分；染色強度與陽性細胞所占比例分數相乘為最終評分；0～1分為陰性，≥2分為陽性，檢測結果由2名高年資病理科醫師共同討論所得。

1.3 觀察指標

(1)骨肉瘤組與骨組織組中骨肉瘤干細胞生物標志物CD117與Stro-1的表達。(2)CD117與Stro-1表達與骨肉瘤患者臨床病理因素的關系。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 骨肉瘤組與骨組織組中骨肉瘤干細胞生物標志物CD117與Stro-1的表達對比

CD117與Stro-1在骨肉瘤組的陽性表達率高于骨組織組，有統計學差異(P<0.05)。見表1。

表1 骨肉瘤組與骨組織組中骨肉瘤干細胞生物標志物CD117與Stro-1的表達對比(例，%)

2.2 CD117與Stro-1表達與骨肉瘤患者臨床病理因素的關系

在不同年齡、不同性別、不同腫瘤直徑中CD117、Stro-1表達水平比較，無統計學差異(P>0.05)；在不同組織學類型、是否發生腫瘤轉移、TNM各分期中CD117、Stro-1表達水平比較，有統計學差異(P<0.05)。見表2。

表2 CD117與Stro-1表達與骨肉瘤患者臨床病理因素的關系(例，%)

3 討論

骨肉瘤患病率較高，會引起骨骼、關節疼痛與局部腫塊病理學癥狀[6-7]。骨肉瘤的發病機制較為復雜，臨床尚未明晰該病的發病機制，通常認為與病毒感染、化學物質等聯系緊密[8-9]。因骨肉瘤干細胞存在較高耐藥性、高轉移性等特征，其被臨床認為是導致骨肉瘤患者產生化療耐藥、腫瘤復發與發生遠處轉移的關鍵因素[10-11]。因此，對骨肉瘤干細胞的生物標志物盡早檢測，對于臨床及時明確患者病情、制定個體化的治療措施、改善其預后意義重大。

CD117在不同個體的組織、器官內均呈現出異常表達，其配體為肥大細胞生長因子[12-13]。該配體通過與CD117相互結合，再經Gαi-Gab1信號復合物介導，對下游關鍵信號通道予以激活，繼而加快骨肉瘤細胞的存活與增殖。CD117在多種惡性腫瘤中均呈現異常表達，與多種腫瘤的發生與發展聯系密切[14]。Stro-1是以CD34+的骨髓細胞為抗原生成的單克隆抗體，現已在鑒別、分離間充質干細胞內大范圍使用[15]。兩項指標在多種惡性腫瘤疾病中均呈異常表達，但在骨肉瘤中的報道較為少見，臨床還需進一步觀察。本研究結果顯示，CD117與Stro-1在骨肉瘤組的陽性表達率[72.41%(42/58)、68.97%(40/58)]高于骨組織組[30.77%(4/13)、30.77%(4/13)]，提示在骨肉瘤組織中，CD117與Stro-1陽性表達率較高。臨床可通過對CD117與Stro-1進行檢測，及時判斷骨肉瘤患者病情，并施以針對性的治療。本研究結果還顯示，CD117、Stro-1表達在不同組織學類型、是否發生腫瘤轉移、TNM不同分期中均有統計學差異，在高級別骨肉瘤、腫瘤轉移與TNMⅡ～Ⅲ期中均表現出較高的陽性率。其原因在于骨肉瘤級別越高，發生腫瘤轉移與分期越高的患者，其病情越重，癌細胞侵襲能力更強，會侵入機體更深處，因此，CD117與Stro-1的陽性表達率均處于較高水平。但值得注意的是，本研究納入樣本量較少，可能會影響試驗結果的精準性。因此，后續臨床還需不斷地完善試驗設計，繼續擴大樣本量的納入，以進行更深層次的研究，進一步證實骨肉瘤干細胞生物標志物CD117與Stro-1的表達及其臨床意義。

綜上所述，CD117與Stro-1在骨肉瘤組織中呈現出過高的陽性表達，且與組織學類型、腫瘤轉移、TNM分期密切相關，臨床需予以高度關注。