超高效液相串聯質譜快速檢查橘紅顆粒（膠囊、片）中水麥冬酸

★ 鄧茂芝 洪燕 周云峰 吳喆 鄧杰華 黃炳泉（.宜春市檢驗檢測中心 江西 宜春336000；.江西省藥品檢驗檢測研究院 南昌 33009）

橘紅顆粒（膠囊、片）是由化橘紅、陳皮、法半夏等藥味制成的復方制劑，具有化痰止咳、清肺的功效，收載于《中華人民共和國藥典》2020年版一部［1］。橘紅顆粒方中的法半夏為天南星科植物半夏塊莖的炮制加工品，具有燥濕化痰的療效［2-3］。近年來，隨著半夏野生資源減少、需求量增大、人工栽培技術滯后等問題日益凸顯［4］，正品半夏的供給越來越難以滿足市場的需要，以致出現半夏同屬或同科偽品混用、冒充現象［5-8］。雖然已有快速檢查半夏藥材和虎掌南星藥材中水麥冬酸的方法報道［9］，但是該方法僅針對半夏原藥材是否摻偽品進行鑒別檢查。虎掌南星為天南星科植物虎掌的干燥塊莖［10］，外觀與半夏類似，常規性狀鑒別難以分辨，易帶入以半夏為原料的中藥復方制劑中，給該類制劑的安全有效用藥帶來隱患。目前，橘紅顆粒（膠囊、片）的質量研究主要集中在有效成分柚皮苷的鑒別或含量測定方面［11-12］，而中藥成方制劑中開展半夏真實性的檢查尚無文獻報道。

本研究以虎掌南星的特征性成分水麥冬酸為定性指標，采用超高效液相串聯質譜技術（UPLCMS/MS）建立橘紅顆粒（膠囊、片）中水麥冬酸快速檢查方法，篩查制劑是否存在以虎掌南星代替投料的行為。該方法的建立為控制制劑中半夏原料的質量奠定基礎，更是為提高橘紅顆粒（膠囊、片）的藥品質量提供監管手段。

1 儀器與試藥

H-class/xevo超高效液相色譜-三重串聯四極桿質譜儀（美國waters公司）；KH-250DB超聲波清洗儀（昆山禾創超聲儀器有限公司）。

水麥冬酸（批號：112042-202002，質量分數100%）購于中國食品藥品檢定研究院；法半夏對照藥材（批號：DSTYF000101）、虎掌南星對照藥材（批號：DST210910-109）均購自成都德思特生物技術有限公司；橘紅制劑樣品32批次，其中橘紅顆粒26批（樣品序號1～26），橘紅膠囊3批（樣品序號27～29），其余為橘紅片，樣品信息見表1；缺法半夏的橘紅顆粒陰性樣品、含虎掌南星的橘紅顆粒陽性樣品由江西海爾思藥業股份有限公司提供。

表1 樣品信息

2 方法與結果

2.1 儀器檢測條件

色 譜 柱：Waters ACQUITY UPLC?CSHTMC18柱（1.7 μm× 2.1 mm×100 mm）；柱溫：30 ℃；進樣量：2 μL；流動相：A為乙腈，B為0.03%氨水溶液，梯度 洗脫：0～2 min 5%A～5%A，2～2.5 min 5%A～75%A，2.5～4 min 75%A～75%A，4～5 min 75%A～5%A，5～8 min 5%A～5%A；流速：0.2 mL/min。質譜掃描模式：ESI+；數據采集模式：多反應監測（MRM）；水麥冬酸的檢測離子對為m/z 206→125和m/z 206→171。

2.2 溶液的配制

水麥冬酸對照品溶液：取水麥冬酸對照品適量，加20%甲醇溶液制成1 mL約含300 ng的對照品溶液。

供試品溶液：取本品約2 g，置100 mL量瓶中，加入20%甲醇溶液約80 mL，超聲30 min，放冷至室溫，加20%甲醇溶液至刻度，搖勻，取續濾液，即得。

陰性樣品溶液：稱取不含法半夏的橘紅顆粒樣品約2 g，按供試品溶液的處理方法制備陰性樣品溶液。

陽性樣品溶液：稱取含虎掌南星的橘紅顆粒樣品約2 g，按供試品溶液的處理方法制備陽性樣品溶液。

對照藥材溶液：稱取半夏、法半夏和虎掌南星對照藥材各約0.1 g（按處方量換算），按供試品溶液的處理方法制備對照藥材溶液。

2.3 專屬性

將“2.2”項下配制的各種溶液依照“2.1”項的條件依次進樣，結果見圖1。由圖可見，虎掌南星對照藥材溶液、陽性樣品溶液均出現與水麥冬酸對照品保留時間一致的色譜峰，而法半夏對照藥材和陰性樣品均無與水麥冬酸對照品保留時間一致的色譜峰，說明橘紅顆粒中法半夏和其他藥味對虎掌南星的水麥冬酸的測定無干擾。

圖1 MRM監測圖

2.4 檢測限

取水麥冬酸對照品溶液，逐級稀釋成一系列溶液依次測定。以信噪比S/N約為3對應的濃度為檢出限，最低檢出濃度為6.6 μg/L。

2.5 精密度

取“2.2”項配制的水麥冬酸對照品溶液，連續進樣6次，記錄水麥冬酸離子對m/z 206→171的峰面積，水麥冬酸峰面積的RSD為3.46%，表明精密度良好。

2.6 重復性

平行取陽性樣品6份，按制備供試品溶液方法處理，記錄峰面積，采用外標法計算含量，含量RSD為4.11%，表明重復性較好。

2.7 穩定性

取一份重復性項下的陽性樣品溶液，分別在0、1、2、4、8 h記錄峰面積，比較峰面積的波動性，峰面積RSD為3.87%，提示在8 h內樣品溶液較穩定。

2.8 樣品測定

對收集的32批橘紅顆粒（膠囊、片）樣品依次測定，均未檢出水麥冬酸成分。對于保留時間與對照品一致的樣品，在與對照品濃度相近時，比較離子豐度比（K）是否與對照品溶液相一致，如不一致，可確定未檢出，判斷依據見表2。

表2 離子豐度比允許偏差

3 討論

敬勇等［13］采用高效液相色譜法對半夏中的虎掌南星偽品進行了檢查分析，本研究初期借鑒了該法對陽性樣品進行定性檢測，但發現要達到原藥材的取樣量，按處方量需稱取橘紅顆粒樣品18 g左右，且考慮到該法樣品前處理較復雜、檢測耗時較長、雜質峰干擾較多，最后采用樣品需求量少、靈敏度高、分析速度快的UPLC-MS/MS技術進行測定，可有效檢出陽性樣品中的水麥冬酸。

為使水麥冬酸的質譜響應達到最佳水平，需探索優化液相和質譜條件。通過考察乙腈-0.1%甲酸、乙腈-5 mmol/L乙酸銨、乙腈-5 mmol/L乙酸銨（含0.1%甲酸）、乙腈-0.03%氨水溶液4個流動相體系和質譜監測模式、掃描模式，最終選擇乙腈-0.03%氨水溶液流動相體系、MRM監測和正離子掃描。水麥冬酸的檢測離子對為m/z 206→125和m/z 206→171，其裂解規律為在正離子模式下水麥冬酸的母離子206［M+H+NH3］+失去一分子NH3和一分子H2O后成子離子171［M+H+NH3-NH3-H2O］+，該子離子進一步失去一分子CH3CH2OH裂解成子離子125［M+H+NH3-NH3-H2O-CH3CH2OH］+。

水麥冬酸的極性較強，在反相色譜系統中保留時間較短，在對方法的耐用性考察時發現不同型號的C18柱、柱溫、流速等對水麥冬酸的峰形和測定結果幾無影響，只會稍微影響其出峰時間。從樣品測定結果可知，市售樣品未含有水麥冬酸而陽性樣品可檢出，說明所建方法可有效甄別橘紅顆粒（膠囊、片）中虎掌南星冒充法半夏投料的行為，但對于可檢出的最低摻入量沒有進行研究，此項工作將進一步深入展開。

總之，所建方法快速、準確，能在一定程度上獲悉橘紅顆粒（膠囊、片）中法半夏的投料情況，并作為橘紅顆粒（膠囊、片）中法半夏藥味的質量控制方法。