多指標綜合評分法優選蘇木提取工藝

★ 周慧慧 韓康寧 劉云龍 劉文靜 歐濤 秦冰倩 王小平,2（.陜西中醫藥大學藥學院 陜西 咸陽 72046；2.陜西省中藥基礎與新藥研究重點實驗室 陜西 咸陽 72046）

蘇木別名蘇枋木，始載于《唐本草》，為豆科云實屬植物蘇木Caesalpinia sappanL.的心材［1］，性平，味甘、咸，歸心、肝、脾經，具有活血祛瘀、消腫止痛、舒筋通絡之功效［2-4］。有研究表明，原蘇木素B、巴西蘇木素是蘇木的有效成分，不僅具有活血化瘀、消炎止痛的作用，還對肺癌、乳腺癌、胃癌等多種惡性腫瘤具有顯著抑制作用［5-12］，故本實驗選擇原蘇木素B、巴西蘇木素和出膏率的綜合評分為評價指標，采用正交試驗優選蘇木的提取工藝。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

十萬分之一電子分析天平（瑞士Mettler Toledo）；戴安Ultimate 3000全自動高效液相色譜儀（賽默飛世爾上海儀器有限公司）；101-2型電熱鼓風干燥箱（北京科維永興儀器有限公司）；Direct-Q 3UV 純化水機（默克密理博）；KQ-300VDE型雙頻數控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；HH-2型電熱恒溫水浴鍋（北京科維永興儀器有限公司）。

1.2 藥材和試劑

蘇木藥材購自陜西中醫藥大學校醫院，經檢驗為蘇木真品；巴西蘇木素對照品（批號：B20024，含量≥98%）、原蘇木素B對照品（批號：B21622，含量≥98%）均購自上海源葉科技有限公司；甲醇、乙腈（色譜純）均購自美國默克公司；超純水（自制）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 提取工藝優選

2.1.1 正交試驗設計精密稱定蘇木藥材粗粉10 g，以溶劑用量、提取次數、溶劑濃度、提取時間為考察因素，每個因素設3個水平，按照L9（34）正交試驗安排表的因素水平組合進行試驗，因素水平表見表1。

表1 正交試驗因素水平表

2.1.2 多指標綜合評分方法建立本實驗以各成分的平均含量及出膏率作為權重系數為依據，將原蘇木素B、巴西蘇木素的權重系數分別設為0.4，出膏率的權重系數設為0.2。綜合評分=（原蘇木素B含量÷原蘇木素 B最高含量）×0.4×100+（各組合中巴西蘇木素含量÷巴西蘇木素最高含量）×0.4×100 +（各組合中出膏率÷出膏率最高值）×0.2×100［13-16］。

2.2 原蘇木素B、巴西蘇木素含量的測定

色譜柱為Thermo Hypersil GOLD C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈（A）∶水（B），梯 度 洗 脫，0～5 min 80% B，5～25 min 80%～60% B，25～30 min 60%～80% B；柱溫25 ℃；檢測波長220 nm；流速1 mL/min，進樣量10 μL。

分別精密稱取巴西蘇木素1.24 mg，原蘇木素B 2.54 mg，置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，即得儲備液。精密吸取上述貯備液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得混合對照品溶液。分別精密吸取上述對照品溶液1，2，3，5，20 μL 注入高效液相色譜儀，記錄各色譜峰的峰面積，以進樣量（ng）為橫坐標、峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸。原蘇木素B、巴西蘇木素回歸方程分別為：Y= 0.006 5X-0.096 8，（r=0.999 8），Y= 0.007 8X-0.095 7，（r=0.999 8），表明兩成分分別在25.4～508. 0 ng、12.4～248.0 ng范圍內線性關系良好。

2.3 浸出率的測定

精密移取提取液25 mL，置于恒重的蒸發皿中，水浴加熱，再置于105 ℃烘箱中干燥3 h，取出放至室溫，迅速精密稱定，計算浸出率（%）。

2.4 最佳工藝的確定

按正交試驗安排表的因素水平組合進行試驗，并對實驗數據進行多指標綜合評分。結果見表2、表3。

表2 蘇木正交試驗安排與結果

表3 方差分析

2.4.1 結果分析通過對正交實驗結果進行直觀分析，結果表明各因素對提取的影響程度為A＞C＞B＞D，即乙醇濃度＞提取次數＞料液比＞提取時間；方差分析結果表明，除D因素外，其余因素均具有顯著性。綜合分析初步選定提取工藝為A2B3C1D2，即以12倍量濃度為55%的乙醇回流提取1次，提取時間120 min。

鑒于正交實驗中乙醇濃度設計參數過寬，因此根據結果進一步對乙醇濃度進行考察。

2.4.2 乙醇濃度的考察取蘇木10 g，精密稱定，分別以35%、55%和75%乙醇進行回流提取，以12倍量乙醇提取1次，每次120 min。結果顯示當乙醇濃度為35%時，原蘇木素B、巴西蘇木素的含量分別為（14.55±0.08）mg/g、（5.43±0.03）mg/g，出 膏 率為（9.40±0.11）%；當乙醇濃度為55%時，原蘇木素B、巴西蘇木素的含量分別為（20.87±0.17）mg/g、（6.18±0.06）mg/g，出膏率為（12.35±0.03）%；當乙醇濃度為75%時，原蘇木素B、巴西蘇木素的含量分別為（9.13±0.05）mg/g、（4.58±0.13）mg/g，出膏率為（9.95±0.07）%。因此，綜合分析選定最佳提取工藝為12倍量濃度為55%的乙醇回流提取1次，提取時間120 min。

3 討論

蘇木主要含有巴西蘇木素類、原蘇木素類、高異黃酮類以及査爾酮類等有效成分［17-21］，以單一指標成分進行工藝優選與中藥多組分、多靶點的特點不相符合［22］，故本試驗以原蘇木素B、巴西蘇木素的含量以及浸出率作為指標，采用多指標綜合評分進行工藝優選。在方差分析表中，為了估價試驗誤差和方差分析，若無空白列，則選擇離差平方和中最小者做近似估計，雖然D項值略大，但是與其他各項水平值相比，還是有很大差異，故以D項（提取時間）做近似估計。權重系數的設定以各成分在質量評價中出現的頻次以及藥理活性作為主要依據［23-26］。該提取工藝科學、簡單、合理、可行，為后期蘇木藥材的開發利用提供了實驗依據。