凝集法在血型正反定型不符鑒定中的價值及不規則抗體陽性特異性結果分析

喻斌 伍慶輝

江西省萍鄉市人民醫院輸血科，江西萍鄉 337000

臨床輸血過程中，僅ABO血型相同時才能輸血，尤其對于輸血量較大者。而對于血型不符合患者，將會發生凝血反應，嚴重者可增加臨床死亡率[1]。ABO血型系統則主要依據紅細胞表面是否存在特異性抗原進行分類[2]。目前共發現35個人類血型系統，但臨床試驗中ABO血型系統與Th血型的臨床意義最為重要。其中，ABO血型分為A、B、AB及O四型，Rh血型則分為陽性與陰性兩種[3]。輸血是臨床上常用的治療干預方法，借助成分輸血技術，能降低輸血不良事件發生率，但會增加患者溶血性輸血反應發生率[4]。血型鑒定主要用于臨床腧穴、不孕癥和新生兒溶血癥病因分析、親子鑒定及在皮膚、腎移植等器官移植的時候能選擇ABO血型相符的供體。不規則抗體是由妊娠、器官移植、輸血/血液制品等免疫刺激作用下產生的ABO血型系統意外的血型抗體，主要為IgG，少數可為IgM。不規則抗體的存在能引起正反定血型不一致、主次測交叉配血不合及紅細胞輸血無效，增加新生兒溶血病等。但是，血型鑒定過程中ABO血型正反定型不符發生率較高，將會增加輸血風險[5]。本研究以進行輸血治療患者為對象，探討凝集法在血型正反定型不符鑒定中的價值及不規則抗體陽性特異性結果分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年4月至2020年5月進行輸血治療患者181例為研究對象，患者男100例，女81例；年齡21～54歲，平均（41.29±4.35）歲；疾病類型：惡性腫瘤32例，再生障礙性貧血41例，多發性骨髓瘤30例，腦出血26例，外傷28例，類風濕關節炎24例。納入標準：①所有患者均擬行輸血治療[6]，且治療前均完成血型正反定型及Rh定型分析；②生命體征尚穩定，具有完整的化驗報告單。排除標準：①認知功能異常或認為因素因子的ABO血型正反定型不符；②治療期間死亡、嚴重肝腎功能異常者。本研究已獲萍鄉市人民醫院倫理委員會批準，患者及家屬均簽署同意書。

1.2 方法

1.2.1 主要儀器與試劑主要儀器：Ortho BioVuo血型分析系統（購自于美國強生公司），血庫專用自動平衡離心機（型號：L600A，購買于湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司），微量可調移液器（購自于德國Eppendorf公司）。

主要試劑：抗A抗B血型定型試劑、RhD（IgM）血型定型試劑（購自于上海血液生物醫藥有限責任公司，試劑盒生產批號：20187241）；人ABO血型反定型用紅細胞試劑盒（紅細胞凝集法）（購自于美國Immucor公司，試劑盒生產批號：20140026）；抗D（IgG+IgM）血型定型試劑[購自于宜美康（加拿大）生物制品有限公司，試劑盒生產批號：20167351]；抗D（IgG）血型定型試劑、抗C（IgM）血型定型試劑、抗c（IgM）血型定型試劑、抗E（IgM）血型定型試劑、抗e（IgM）血型定型試劑、抗人球蛋白（IgG，C3d）檢測試劑盒（購自于上海血液生物醫藥有限責任公司，試劑盒生產批號：20192581）。

1.2.2 血型正反定型和Rh定型分析采用凝集法完成血型正反定型和Rh定型分析。借助全自動血型儀檢測每例患者血液標本的ABO正反型及Rh血型。對于ABO血型正反定型不相符時，則需要根據ABO疑難血型分布分析法對不符合標本進行正反定型分析[7]。①首先需要排除人為因素和操作失誤、試劑盒質量不過關等問題，重新采集血液標本進行檢測；②登錄醫院信息網，分析醫院以往正反定型不一致常見原因，必要時可借助可選擇鹽水法、抗人球蛋白試管法及全自動血型分析儀等完成不規則抗體篩查進行驗證[8]。③根據正反定型、Rh定型不符的原因對試驗結果進行綜合判斷，分析血型正反定型不符鑒定結果、原因，對不規則抗體陽性特異性結果進行分析，以期提高輸血安全性[9-10]。

1.3 觀察指標及評價標準

①血型抗體檢測結果。入組患者均完成血型鑒定，分析所有患者血型抗體檢測結果。②ABO血型正反型不符原因。統計ABO血型正反型不符原因，包括：造血干細胞移植、抗原減弱或發生缺失、抗體減弱或發生缺失及正反定型額外反應。③Rh定型分析。統計入組腧穴患者Rh定型情況。

1.4 統計學方法

采用SPSS 18.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血型抗體檢測結果分析

紅細胞為A型46例，血清抗體檢出率為73.91%，正反定型不相符率15.22%；紅細胞為B型78例，血清抗體檢出率為67.95%，正反定型不相符為8.97%；紅細胞為O型患者57例，血清抗體檢出率為73.68%，正反定型不相符為7.02%（表1）。

表1 血型抗體檢測結果分析

2.2 ABO血型正反型不符原因及構成比

181例進行輸血患者均采用凝集法完成血型正反定型分析，結果表明：18例患者正反型不符，占9.94%。ABO血型正反定型不符原因中排在前2位的分別為造血干細胞移植和抗原減弱或發生缺失，分別占50.0%和27.78%（表2）。

表2 ABO血型正反型不符原因及構成比

2.3 輸血患者Rh定型分析

Rh定型分析結果顯示，21例患者存在不規則抗體，占11.60%，男性患者與女性患者Rh定型分析中不規則抗體檢出率比較，差異無統計意義（P>0.05）（表3）。

表3 輸血患者Rh定型分析（例）

3 討論

輸血治療在臨床上使用較多，廣泛用于失血過多、失血性休克等人群中[11]。但是，輸血治療具有一定的適應癥，而血型匹配則是提高患者輸血安全的基礎與前體。研究表明[12]：通過檢索醫院輸血患者病案，輸血患者中存在血型正反定型不符等現象，導致輸血風險較高。因此，臨床擬進行輸血治療患者，給予抗體篩查、抗體鑒定及配合性輸注血液/成分血，對保證患者輸血安全具有重要的意義。近年來，凝集法在血型正反型與Rh定型中得到應用，且效果理想。本研究中，經正定型血清標本檢測，其中紅細胞為A型46例，正反定型不相符為15.22%；紅細胞為B型78例，正反定型不相符為8.97%；紅細胞為O型患者57例，血清抗體檢出率為73.68%，正反定型不相符為7.02%，從本研究結果看出，ABO血型正反型不符以A型血最為突出。因此，加強患者輸血前ABO血型不符、交叉配血不合原因分析，有助于提高輸血安全性[13]。凝反應屬于是一種血清學反應，顆粒型抗原（完整的病原微生物或紅細胞等）與相應抗體結合，在有電解質存在的條件下，經過一定時間，出現肉眼可見的凝集小塊。臨床上，將凝集反應分為直接凝集反應與間接凝集反應兩種，但是無論何種凝集方法，均能實現血型及不規則抗體的篩查、鑒定，為患者安全輸血提供參考依據。

血型鑒定是安全輸血的前提，主要是完成血型的鑒定及不規則抗體篩查，而前者主要涉及ABO定型與Rh定型兩種[14]。本研究中，181例進行輸血患者均采用凝集法完成血型正反型分析，結果表明：18例患者正反型不符，占9.94%。ABO血型正反型不符原因中排在前2位的分別為造血干細胞移植和抗原減弱或發生缺失，分別占：50.0%和27.78%，提示輸血治療患者ABO定型不符率較高，其原因亦相對較多，增加輸血風險。既往研究表明[15]：健康群體冷凝激素效價<1∶16，并且血液在0～4℃溫度下具有最高的活性，甚至能發生凝集反應。對于手術患者或伴有傳染性疾病患者，高效價冷凝激素含量較高，影響檢測結果。對于需要輸血患者，尤其是ABO正反定型不符合者，應善于采用“三步分析法”分析患者血型不符的原因，避免人為因素引起的ABO血型正反型不符；結合收集獲得的病歷資料，分析引起ABO血型正反型不一致的原因，并積極采取措施進行針對性試驗進行驗證，提高患者輸血安全性，促進患者恢復。血型抗體涉及內容較多，且臨床上將其分為規則（ABO血型系統抗體）、不規則（除抗-A、抗-B以外的Rh、MNS等產生的抗體）與特殊類抗體三種[16-17]。既往研究表明[18]：不規則抗體產生的原因相對較多，如：輸血、妊娠、自身免疫性疾病等。同時，不規則抗體亦是溶血性輸血反應產生的重要原因。本研究中，181例進行輸血患者均完成Rh定型分析，結果表明：21例患者存在不規則抗體，占11.60%，男性患者與女性患者Rh定型分析中不規則抗體檢出率比較，差異無統計意義（P>0.05），由此看出，輸血患者Rh定型下不規則抗體檢出率較高，亦是臨床溶血性輸血反應的主要原因之一，加強輸血患者Rh定型下不規則抗體測定，可指導臨床輸血，降低輸血不良事件發生率。

對于骨髓瘤患者，持續的病情發展將會引起紅細胞發生緡錢狀凝集，再加上某些藥物主要為血漿擴容劑，均容易引起血漿成分異常；對于血液病患者，進行ABO血型不同的異基因外周血干細胞移植后，將會引起原有的血型紅細胞衰亡，最終被供者血型的紅細胞取代；患者原有的同種凝集素在移植后消失，供者的干細胞在受著體內存活時，患者紅細胞上的血型變為與供者血型移植，會造成正反定型不抑制。同時，血漿蛋白異常亦是ABO血型正反定型不符及交叉配血不合的重要因素，尤其是伴有肝臟疾病、惡性腫瘤等，均會增加血型定型困難。因此，患者在進行輸血前應采用凝集法完成血液標本ABO血型及Rh血型定型，篩查不規則血型抗體，不僅能輔助臨床疾病診斷，亦可提高臨床輸血安全[19]。對于凝集法Rh血型定型中出現不規則抗體者，應慎重考慮輸血治療，充分考慮輸血利弊，提高患者輸血安全性，降低由于輸血異常引起的死亡[20]。但是，本研究亦存在諸多局限性，一方面研究中納入病例數較少，再加上研究時間相對較短，導致研究結果存在諸多偏倚性，均需要進一步研究與探討。

綜上所述，凝集法用于血型正反型與Rh定型中準確性較高，具有準確性、可靠性優點，能有效節約試劑，提高血型定型的自動化水平及患者輸血安全性。