一種鹽酸普拉克索片降解雜質(zhì)BI-II546CL的制備方法

劉旭，戴華山，尹利獻(xiàn)，梁慧興，羅宏軍（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，江蘇 泰州 225321）

帕金森病是繼阿爾茨海默病之后的第二大中樞神經(jīng)退行性疾病，主要病理特征包括神經(jīng)元內(nèi)出現(xiàn)路易小體、多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞凋亡等，運(yùn)動(dòng)失調(diào)和神經(jīng)功能紊亂是其最常見(jiàn)的臨床癥狀。多巴胺能神經(jīng)元減少，直接導(dǎo)致動(dòng)作遲緩、靜止震顫、姿勢(shì)步態(tài)障礙等癥狀[1-2]。

鹽酸普拉克索片是由勃林格英格翰公司（BOEHRINGER INGELHEIM）研制的一種新型治療帕金森病的藥物，1997年在美國(guó)和歐洲上市，并于2005年在中國(guó)上市，商品名：森福羅[3-6]。該藥物屬于新一代非麥角類(lèi)選擇性多巴胺D2 和D3 受體激動(dòng)劑，可有效改善早期和晚期帕金森病患者的運(yùn)動(dòng)癥狀，延緩和減輕相關(guān)運(yùn)動(dòng)并發(fā)癥的發(fā)生，發(fā)揮保護(hù)神經(jīng)、延緩疾病進(jìn)展的作用[7-11]。

《化學(xué)藥物雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》中提及臨床使用過(guò)程產(chǎn)生的不良反應(yīng)很有可能與藥品中存在的雜質(zhì)有關(guān)，因此需對(duì)藥品中的雜質(zhì)進(jìn)行充分研究。雜質(zhì)BI-II546CL（見(jiàn)圖1）為鹽酸普拉克索片高溫及光照條件下的降解雜質(zhì)，若制劑分析方法無(wú)法有效檢測(cè)出該雜質(zhì)，將會(huì)給患者帶來(lái)安全風(fēng)險(xiǎn)。為了保證制劑產(chǎn)品的質(zhì)量，需獲得雜質(zhì)BI-II546CL 對(duì)照品，用于制劑分析方法的研究，并作為已知雜質(zhì)訂入制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。Hu 等[12]報(bào)道了雜質(zhì)BI-II546CL 的制備方法（見(jiàn)圖2），但該方法制備過(guò)程中使用到液溴和濃硫酸，安全隱患大，收率也較低，最后一步收率僅有14.2%。

圖1 雜質(zhì)BI-II546CL 結(jié)構(gòu)式Fig 1 Structure of impurity BI-II546CL

圖2 文獻(xiàn)報(bào)道的雜質(zhì)BI-II546CL 合成路線[12]Fig 2 Synthetic route of impurity BI-II546CL reported[12]

本研究報(bào)道了一種雜質(zhì)BI-II546CL 的高效合成方法，該方法安全環(huán)保，未使用到高危、高毒試劑，且收率較高。制備路線如下：以7-羥基普拉克索（5）為原料，經(jīng)與（Boc）2O 反應(yīng)制得N-正丙基-N-6-（2-氨基-7-羥基-4，5，6，7-四氫苯并噻唑）氨基甲酸叔丁酯（4），4 與乙酰氯反應(yīng)制得N-正丙基-N-6-（2-乙酰氨基-7-羥基-4，5，6，7-四氫苯并噻唑）氨基甲酸叔丁酯（3），3被二氧化錳氧化制得N-正丙基-N-6-（2-乙酰氨基-7-氧代-4，5，6，7-四氫苯并噻唑）氨基甲酸叔丁酯（2），2 再在酸性條件下脫除保護(hù)基，最終制得鹽酸普拉克索片降解雜質(zhì)BI-II546CL。合成路線見(jiàn)圖3。

圖3 雜質(zhì)BI-II546CL 合成路線Fig 3 Synthetic route of impurity BI-II546CL

1 儀器與試藥

BRUKER AV-400 型核磁共振儀（瑞士Bruker公司）；Thermo Nicolet is5 紅外吸收光譜儀（ThermoFisher SCIENTIFIC 公司）；Agilent 1200-6100 LC-MS/MS 聯(lián)用儀（Agilent Technologies 公司）。

7-羥基普拉克索（四川藍(lán)勵(lì)醫(yī)藥科技有限公司，藥用級(jí)）；二碳酸二叔丁酯（TCI）；乙酰氯（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；二氧化錳（上海麥克林生化科技有限公司）。

2 合成過(guò)程

2.1 N-正丙基-N-6-（2-氨基-7-羥基-4，5，6，7-四氫苯并噻唑）氨基甲酸叔丁酯（4）的合成

將2-氨基-4，5，6，7-四氫-6-丙胺-苯并噻唑-7-醇（即7-羥基普拉克索，5）（13.3 g，58.5 mmol）、三乙胺（8.9 g，87.8 mmol）、四氫呋喃（225 mL）分別加入反應(yīng)瓶中，20～30℃條件下滴加（Boc）2O（18.4 g，84.3 mmol），保溫反應(yīng)5 h，TLC 監(jiān)測(cè)至反應(yīng)完畢。加入飽和食鹽水（150 mL），分液，收集水相，乙酸乙酯萃取（200 mL×3），濃縮有機(jī)相，濃縮物柱層析（洗脫劑：石油醚-乙酸乙酯體積比2∶1）得白色固體N-正丙基-N-6-（2-氨基-7-羥基-4，5，6，7-四氫苯并噻唑）氨基甲酸叔丁酯（4）（16.3 g，收率85.1%）。1H NMR（DMSO-d6，400 MHz）：6.84（s，2H），5.04～5.05（d，1H），4.41（s，1H），3.92～4.04（m，1H），3.11（m，2H），2.49～2.53（m，3H），2.12～2.16（m，1H），1.61～1.64（m，2H），1.40（s，9H），0.77～0.81（t，J＝7.6 Hz，3H）。

2.2 N-正丙基-N-6-（2-乙酰氨基-7-羥基-4，5，6，7-四氫苯并噻唑）氨基甲酸叔丁酯（3）的合成

將N-正丙基-N-6-（2-氨基-7-羥基-4，5，6，7-四氫苯并噻唑）氨基甲酸叔丁酯（4）（12.0 g，36.6 mmol）、三乙胺（9.3 g，91.9 mmol）、二氯甲烷（200 mL）分別加至反應(yīng)瓶中，20～25℃條件下滴加乙酰氯（5.2 g，66.2 mmol），保溫反應(yīng)2 h，TLC 監(jiān)測(cè)至反應(yīng)完畢。加入甲醇（6.3 mL）淬滅反應(yīng)，加純化水（200 mL）洗滌，有機(jī)相減壓濃縮。濃縮物柱層析（洗脫劑：石油醚-乙酸乙酯體積比1∶1）得白色固體N-正丙基-N-6-（2-乙酰氨基-7-羥基-4，5，6，7-四氫苯并噻唑）氨基甲酸叔丁酯（3）（11.5 g，收率84.9%）。1H NMR（DMSO-d6，400 MHz）：11.99（s，1H），5.33～5.35（d，1H），4.60（s，1H），3.98～4.11（m，1H），3.14（m，2H），2.65～2.73（m，2H），2.11～2.23（m，1H），1.99（s，3H），1.63～1.75（m，2H），1.41（s，9H），0.78～0.82（t，J＝7.6 Hz，3H）。

2.3 N-正丙基-N-6-（2-乙酰氨基-7-氧代-4，5，6，7-四氫苯并噻唑）氨基甲酸叔丁酯（2）的合成

將N-正丙基-N-6-（2-乙酰氨基-7-羥基-4，5，6，7-四氫苯并噻唑）氨基甲酸叔丁酯（3）（4.4 g，11.9 mmol）、二氧化錳（30 g，345 mmol）、二氯甲烷（226 mL）分別加至反應(yīng)瓶中，20～30℃條件反應(yīng)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮。向濃縮物中加入二氯甲烷（5 mL）和正庚烷（50 mL），打漿3 h，過(guò)濾，濾餅真空干燥得固體N-正丙基-N-6-（2-乙酰氨基-7-氧代-4，5，6，7-四氫苯并噻唑）氨基甲酸叔丁酯（2）（3.6 g，收率82.3%）。1H NMR（DMSO-d6，400 MHz）：12.61（s，1H），2.95～3.20（m，4H），2.50（s，1H），2.19（s，4H），1.39～1.44（m，6H），1.23（s，6H），0.83～0.87（t，J＝7.6 Hz，3H）。

2.4 鹽酸普拉克索片降解雜質(zhì)BI-II546CL（1）的合成

將N-正丙基-N-6-（2-乙酰氨基-7-氧代-4，5，6，7-四氫苯并噻唑）氨基甲酸叔丁酯（2）（2.9 g，7.9 mmol）加至1，4-二氧六環(huán)（30 mL）中，滴加濃鹽酸（15.0 g，152 mmol），15～25℃反應(yīng)。用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH 為3，有固體析出，過(guò)濾，濾餅用甲醇（126 mL）溶解，減壓濃縮至無(wú)液體下滴，加入甲醇5 mL，攪拌均勻，再加入純化水（50 mL），－10～－20℃冷凍干燥，得類(lèi)白色固體雜質(zhì)BI-II546CL（1.9 g，收率92.0%），總收率54.7%。

雜質(zhì)BI-II546CL：1H NMR（DMSO-d6，400 MHz）：δ9.25～9.49（m，2H），8.61（s，2H），4.20～4.24（m，1H），2.88～3.01（m，4H），2.51～2.56（m，1H），2.11～2.21（m，1H），1.65～1.78（m，2H），0.90～0.94（t，3H，J＝7.6Hz）；13C NMR（DMSO-d6，100 MHz）：δ182.89，175.21，169.60，116.13，58.82，46.41，25.54，25.11，19.05，10.96；IR（KBr）：ν3116，2935，2718，1636，1519 cm－1；MS（ESI＋）：[M＋H]＋＝226，與本品游離堿分子量225 相符。

3 結(jié)果與討論

制備雜質(zhì)BI-II546CL 時(shí)，首先嘗試使用二氧化錳氧化7-羥基普拉克索，達(dá)到直接將苯并噻唑環(huán)上的羥基氧化成羰基的效果，從而只需一步反應(yīng)即可完成目標(biāo)雜質(zhì)的制備。但是實(shí)際合成過(guò)程中，目標(biāo)雜質(zhì)BI-II546CL 含量很低，體系中存在多種氧化雜質(zhì)，典型的雜質(zhì)為7-羥基普拉克索氮氧化物、雜質(zhì)BI-II546CL 的氮氧化物和羥胺（見(jiàn)圖4），此類(lèi)雜質(zhì)基本都是支鏈上的仲胺或苯并噻唑環(huán)上的伯胺被氧化的產(chǎn)物。基于以上研究結(jié)果，嘗試將仲胺和伯胺進(jìn)行保護(hù)，待氧化完畢后再脫除保護(hù)基。然而苯并噻唑環(huán)上的伯胺活性較低，無(wú)法達(dá)到被氨基Boc 保護(hù)的效果，因此選擇了活性更強(qiáng)的保護(hù)基乙酰氯。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該方式效果較好，氧化過(guò)程氨基未受影響，氧化產(chǎn)物再在酸性條件下脫除保護(hù)基，最終可得到高產(chǎn)率的目標(biāo)雜質(zhì)BI-II546CL。

圖4 副反應(yīng)雜質(zhì)結(jié)構(gòu)Fig 4 Impurity structure of side reaction

4 結(jié)論

本研究以7-羥基普拉克索為原料，經(jīng)氨基Boc 保護(hù)、酰胺化、氧化、水解4 步反應(yīng)制得鹽酸普拉克索片降解雜質(zhì)BI-II546CL。LC-MS 確認(rèn)了制備得到的化合物分子式C10H15N3OS 與質(zhì)譜數(shù)據(jù)相吻合；IR 譜、1H NMR 和13C NMR 進(jìn)一步確認(rèn)，最終確證化合物結(jié)構(gòu)為2-氨基-6-（丙胺基）-5，6-二氫苯并[d]噻唑-7-酮（雜質(zhì)BIII546CL）。

本文報(bào)道的雜質(zhì)BI-II546CL 制備工藝條件溫和，與現(xiàn)有文獻(xiàn)路線相比，避免了使用高危和高毒試劑，從而保證了路線的綠色環(huán)保及安全，收率也得到了極大的提高。本研究為制備鹽酸普拉克索片雜質(zhì)BI-II546CL 提供了一條便捷、高效的合成路徑，對(duì)鹽酸普拉克索片的質(zhì)量控制具有重要的參考價(jià)值。