乙肝病毒血清學檢驗采用化學發光法與酶聯免疫法的效果

卓萍娟

（東?？h中醫院檢驗科，江蘇 連云港，222300）

乙型肝炎是HBV病毒引發的疾病，患者會出現肝臟炎性病變，疾病往往會累及身體的多個器官[1-2]。肝臟是人體重要器官，在人體新陳代謝過程中具有重要的作用。乙肝的傳染性較強，感染乙肝后患者會出現食欲下降、頭暈、乏力等，如果病情惡化，可發展為肝硬化，甚至是癌癥，危及患者的生命安全，所以乙肝患者應盡早確診和規范治療[3]。乙肝早期的確診對于治療和預后很重要。熒光定量PCR檢驗是乙肝診斷的金標準，但由于其對環境和操作技術要求較高，在臨床應用上會受到一定的限制。近年來，化學發光法與酶聯免疫法是常用的血清學檢驗方式，兩種檢驗方式在乙肝診斷中均有廣泛的應用[4-5]。酶聯免疫檢驗技術是將抗原與酶復配，并用顯色法進行測試?；瘜W發光法是以化學檢測系統中被測物體的數量與所發出的光強之間存在的線性關系，然后再由發光計測量其光的強度，達到對被測材料的測量[6]。為評估乙肝病毒血清學檢驗中使用酶聯免疫法與化學發光法的差異性，本研究對2020年1月～2021年1月東?？h中醫院收治的100例疑似乙型肝炎患者分別提供化學發光法檢驗以及酶聯免疫法檢驗，以此開展調研。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2020年1月～2021年1月東海縣中醫院收治的疑似乙型肝炎患者100例，均采用血清學檢驗，分別提供化學發光法檢驗以及酶聯免疫法檢驗。100例疑似乙型肝炎患者中，女43例，男57例；年齡23～80歲，平均年齡（46.85±9.49）歲。所有患者均知情同意參與本研究，且本研究已被東?？h中醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①患者均出現乏力、食欲下降以及肝區不適的癥狀；②患者臨床資料完整；③患者意識清晰，可正常溝通。

排除標準：①妊娠期和哺乳期女性；②中途退出研究者；③合并惡性腫瘤者；④合并精神類疾病者；⑤合并其他急性重癥疾病者；⑥長期使用免疫抑制劑治療者；⑦合并感染性疾病者。

1.3 方法

100例疑似乙型肝炎患者均于清晨抽取空腹靜脈血5 mL，離心處理10 min，轉速為3 000 r/min，分離上層清液后，放置在-20 ℃的環境中待檢。①化學發光法檢驗：將受試者的血液樣品放在包含HBV核抗體的聚苯乙烯試管，在37 ℃的條件下放置2 h，然后用磷酸鹽緩沖鹽溶液清洗，3 min/次，共清洗3次，添加100 uL過氧化氫+100 uL魯米洛，使用自動發光化學發光裝置進行測試。使用電化學發光免疫分析儀（生產企業：羅氏，型號：Cobas e 601）及其配套試劑開展檢驗。相關操作嚴格依據對應試劑盒說明書進行。②酶聯免疫法檢驗：試劑和微孔反應條放在室溫下30 min，隨后將樣品放入微孔反應條中，密封30 min，將樣品放入37 ℃的容器中，放置30 min，將溶液倒入微孔反應條中，使用自動樣品預處理裝置進行測試。使用全自動酶標儀（生產企業：北京若水合科技有限公司，型號：BS97-680）及其配套試劑開展檢驗。

1.4 觀察指標

①以熒光定量PCR檢驗作為金標準，比較化學發光法、酶聯免疫法的檢驗結果，即分別檢測化學發光法、酶聯免疫法檢驗的陽性率、陰性率。

②對比化學發光法、酶聯免疫法檢驗的敏感度、特異度、準確性、陽性預測值以及陰性預測值。其中，敏感度=真陽性例數/（真陽性+假陰性）例數×100%。特異度=真陰性例數/（假陽性+真陰性）例數×100%。準確性=（真陽性+真陰性）例數/（假陽性+真陰性+真陽性+假陰性）例數×100%。陽性預測值=真陽性例數/（真陽性+假陽性）例數×100%。陰性預測值=真陰性例數/（假陰性+真陰性）例數×100%。

③化學發光法、酶聯免疫法檢驗在乙肝患者中乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗體、乙肝表面抗體以及乙肝核心抗體的陽性檢出率。陽性率的判定標準：乙肝e抗原≥0.05 NCU/mL，乙肝表面抗原≥10.0 mU/mL，乙肝e抗體≥2.0 NCU/mL，乙肝表面抗體≥0.2 ng/mL，乙肝核心抗體≥1.5 NCU/mL。

④化學發光法、酶聯免疫法檢驗在乙肝患者中乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗體、乙肝表面抗體、乙肝核心抗體的表達水平。

1.5 統計學分析

采用SPSS 23.0軟件對數據進行分析處理，計量資料用（±s）表示，行t檢驗；計數資料用[n（%）]表示，行χ2檢驗。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 化學發光法、酶聯免疫法檢驗的總檢測結果比較

100例疑似乙型肝炎患者的熒光定量PCR檢驗結果：陽性率為72.00%、陰性率為28.00%?；瘜W發光法檢驗的陽性率為71.00%、陰性率為29.00%。酶聯免疫法檢驗的陽性率為62.00%、陰性率為38.00%。見表1。

表1 化學發光法檢驗、酶聯免疫法檢驗的總檢測結果比較

2.2 化學發光法檢驗、酶聯免疫法檢驗的檢測效能比較

化學發光法檢驗的敏感度、準確性和陽性預測值均高于酶聯免疫法，差異有統計學意義（P＜0.05）。但是化學發光法、酶聯免疫法檢驗在特異度、陰性預測值上比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 化學發光法檢驗、酶聯免疫法檢驗的檢測效能比較 [n（%）]

2.3 化學發光法、酶聯免疫法檢驗在不同指標中的陽性率比較

化學發光法檢驗乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗體的陽性率高于酶聯免疫法，差異有統計學意義（P＜0.05）?；瘜W發光法、酶聯免疫法檢驗在乙肝表面抗體、乙肝核心抗體陽性率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表3。

表3 化學發光法檢驗、酶聯免疫法檢驗在不同指標中的陽性率比較 [n（%）]

2.4 化學發光法、酶聯免疫法檢驗不同指標的表達水平比較

化學發光法檢驗乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗體、乙肝表面抗體、乙肝核心抗體的表達水平均高于酶聯免疫法，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 化學發光法檢驗、酶聯免疫法檢驗不同指標水平比較 （±s）

表4 化學發光法檢驗、酶聯免疫法檢驗不同指標水平比較 （±s）

檢查方式 例數 乙肝e抗原（NCU/mL）乙肝表面抗原（mU/mL）乙肝e抗體（NCU/mL）乙肝表面抗體（ng/mL）乙肝核心抗體（NCU/mL）化學發光法檢驗 72 0.11±0.02 11.56±1.32 2.99±0.31 0.30±0.05 1.69±0.20酶聯免疫法檢驗 72 0.07±0.01 10.28±1.22 2.23±0.29 0.29±0.06 1.67±0.21 t 33.941 108.612 332.441 84.853 16.971 P＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

3 討論

乙型肝炎是一種傳染性強，具有遷延性的疾病，部分患者會出現肝功能受損和黃疸，若不及時進行救治，容易引發肝硬化，甚至演變為肝癌，降低患者生存質量[7-9]。HBV是一種雙鏈DNA病毒，它會在體內長時間潛伏，當機體的免疫力下降時，HBV會被活化并在體內增殖，最終導致乙型肝炎。乙型肝炎初期一般沒有任何征兆，很難被發現，隨著病情的發展，肝組織會越來越細，患者罹患肝硬化、肝癌的風險也會越來越大，而且預后也會越來越差。因此，早期診斷對改善乙肝患者的預后非常關鍵[10-13]。

熒光定量PCR檢驗技術可以根據病毒的含量來判斷HBV在體內的增殖狀況，但是熒光定量PCR檢驗的運行過程繁瑣、成本高、對環境和操作技術的要求更高，在中小型醫院很難得到廣泛的應用。酶聯免疫法是一種常規的血清學檢查手段，它具有操作簡便、檢查費用低廉、檢驗耗時較短等優點，適合大規模樣品的檢測，所以酶聯免疫法是乙型肝炎早期篩查的重要方式[14-15]。但它的缺點是容易受到外部環境的影響，無法對其進行定量分析；同時，不同的抗膨化抗體反應也會對測試的效果產生一定的影響，造成假陽性。化學發光法是一種高靈敏度、快速檢測、定性、定量分析的新技術，在乙型肝炎檢測中具有顯著的優越性?；瘜W發光法是利用熒光基材在相應酶的催化下發出熒光，并利用熒光的光強來進行定量分析，而在這一過程中，突變抗體不會對測試的結果造成任何干擾，并且化學發光法可以精確識別出突變株，降低人工干擾，因此具有很高的精確性。HBV-M檢測可以為疾病類型的鑒別診斷提供依據。若乙肝表面抗原為陽性，說明HBV在身體中具有復制性，乙肝表面抗原作為乙肝的觀察指標，可以反映身體是否出現乙肝病毒感染，同時還可以反映機體的肝臟損傷程度，乙肝表面抗原在乙型肝炎的診斷中具有重要價值?；瘜W發光法在乙肝表面抗原陽性檢出率具有較高的優勢，檢出率高于酶聯免疫法[16-17]。本研究結果顯示，化學發光法檢驗的陽性率為71.00%高于酶聯免疫法檢驗的陽性率62.00%，說明在乙肝病毒血清學檢驗中化學發光法具有更高的陽性檢出率。本研究發現，化學發光法的敏感度、準確性和陽性預測值均高于酶聯免疫法，化學發光法檢驗乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗體的陽性率高于酶聯免疫法，化學發光法檢驗乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗體、乙肝表面抗體、乙肝核心抗體的具體值均高于酶聯免疫法，差異有統計學意義（P＜0.05）。充分說明在乙肝病毒血清學檢驗中，化學發光法具有較高的應用價值，整體檢驗效果優于酶聯免疫法。

綜上所述，化學發光法在乙肝病毒血清學檢驗中的效果優于酶聯免疫法，具有較高的陽性檢出率，并且敏感度、準確性和陽性預測值均高于酶聯免疫法，值得在臨床中應用。