傳染性單核細胞增多癥患兒血清Toll樣受體2、Toll樣受體9與外周血T淋巴細胞亞群變化及臨床意義

馬永梅，樊 榮

(寶雞市婦幼保健院兒科，陜西 寶雞 721000)

傳染性單核細胞增多癥(Infectious mononucleosis，IM)是由EB病毒(Epstein-barr virus，EBV)感染引起的急性病，好發于兒童，以發熱、淋巴結及肝脾腫大等為主要表現，部分患兒可并發心肌炎、肝功能異常等嚴重并發癥，危及生命健康[1-2]。EBV感染可引起機體免疫功能調節紊亂，激發T淋巴細胞增殖及免疫應答，因此隨著IM病情進展及轉歸，T淋巴細胞亞群也呈相應變化[3]。Toll樣受體(Toll-like receptor,TLR)作為模式識別受體，可識別病原體，在天然免疫中發揮重要作用。其中，TLR2和TLR9在多種免疫細胞上均有表達，在機體抗病毒免疫中占據重要地位[4]?；诖?，本研究回顧性分析我院106例IM患兒臨床資料，以評估血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細胞亞群在IM診療中的應用價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象 回顧性分析2015年2月至2020年5月寶雞市婦幼保健院106例IM患兒臨床資料，其中男性61例，女性45例；年齡3～14歲，平均(7.23±1.39)歲。病例納入標準：符合《諸福棠實用兒科學》第8版[5]中IM診斷標準；年齡3～14歲。排除標準：合并慢性心功能不全、支氣管哮喘等慢性疾??；伴支原體感染、腺病毒感染等其他病原體感染；伴艾滋病、甲狀腺功能亢進、糖尿病等免疫性疾病或致免疫功能低下的疾??；合并白血病、淋巴瘤等良性或惡性腫瘤。本研究病例資料收集均獲得患兒監護人知情同意，且經寶雞市婦幼保健院醫學倫理委員會審批。

1.2 研究方法 106例IM患兒入院后給予更昔洛韋注射液(批號：H20051041)靜脈滴注，每次5 mg/kg，每次滴注時間>1 h，2次/d，連續治療7 d。再給重組人干擾素α1b注射液(批號：S20040039)霧化吸入治療，每次2～4 μg/kg+0.9%氯化鈉溶液2 ml，采用氧氣驅動霧化，每次持續15 min，2次/d，連續治療5 d。收集治療前及治療7 d時外周血，采用熒光定量聚合酶鏈式反應檢測EBV脫氧核糖核酸(EBV-DNA)，檢測試劑均購自中山大學達安基因股份有限公司(試劑盒批號：140936、160539、180934)，以EBV-DNA<500 copies/L定義為陰性。使用流式細胞儀(型號：FACSCalibur，美國BD公司)檢測外周血T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+表達水平(試劑盒批號：141119、161033、181127，均購自美國BD公司)，并計算CD4+/CD8+。采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法檢測血清TLR2、TLR9水平，試劑盒(批號：141108、160931、181044)均購自上海生工生物工程股份有限公司。收集急性期(發病后3～7 d)和恢復期(發病后45～60 d，淋巴結、脾明顯縮小，臨床癥狀消失)患者空腹外周靜脈血，檢測血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細胞亞群表達水平，檢測方法同上。

1.3 觀察指標 比較IM患兒急性期與恢復期血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細胞亞群表達水平；治療7 d時，根據EBV-DNA是否轉陰將IM患兒分為轉陰組和未轉陰組，比較兩組一般資料，以及治療7 d時血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細胞亞群表達水平；分析治療7 d時EBV-DNA載量與血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細胞亞群表達水平的關系。

2 結 果

2.1 IM患兒急性期與恢復期血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細胞亞群表達水平比較 見表1。IM患兒急性期血清TLR2、TLR9表達水平高于恢復期，外周血CD3+、CD8+表達水平高于恢復期，外周血CD4+及CD4+/CD8+表達水平則低于恢復期(均P<0.05)。

表1 IM患兒急性期與恢復期血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細胞亞群表達水平比較

2.2 兩組患兒一般資料比較 見表2。治療7 d時，106例IM患兒EBV-DNA轉陰82例(77.36%)，納入轉陰組；未轉陰24例(22.64%)，納入未轉陰組。兩組患兒性別、入院前病程及治療前白細胞計數比較差異無統計學意義(均P>0.05)。未轉陰組年齡低于轉陰組，治療前EBV-DNA載量高于轉陰組(均P<0.05)。

表2 兩組患兒一般資料比較

2.3 兩組患兒治療7 d時血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細胞亞群表達水平比較 見表3。治療7 d時，未轉陰組血清TLR2、TLR9表達水平高于轉陰組，外周血CD3+、CD8+表達水平高于轉陰組，外周血CD4+及CD4+/CD8+低于轉陰組(均P<0.05)。

表3 兩組患兒治療7 d時血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細胞亞群表達水平比較

2.4 治療7 d時EBV-DNA載量與血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細胞亞群表達水平的關系 經Pearson相關性分析，發現EBV-DNA載量與血清TLR2、TLR9及外周血CD3+、CD8+表達水平呈正相關(r=0.381、0.362、0.319、0.347，均P<0.05)，與外周血CD4+及CD4+/CD8+呈負相關(r=-0.360、-0.395，均P<0.05)。

3 討 論

研究[6-7]發現，TLR2是機體EBV感染免疫反應中最直接的模式識別受體，可直接將病原體交予抗原呈遞細胞，激活機體免疫反應。Noor等[8]也發現，B淋巴細胞是原發EBV感染最初靶細胞，而TLR9主要表達于B淋巴細胞表面，EBV感染可激活淋巴細胞上TLR9，產生抗病毒細胞因子。本研究中，IM患兒急性期血清TLR2、TLR9水平均高于恢復期，提示隨著IM病情轉歸，患兒血清TLR2、TLR9水平顯著降低。推測該結果由以下原因引起：在IM急性期，EBV入侵引起TLR2、TLR9表達上調，使機體識別抗原體，激活免疫反應，隨著治療后EBV的清除，TLR2及TLR9配體對TLR2、TLR9刺激減弱，使TLR2、TLR9表達下調[9-10]。不僅如此，治療7 d時，未轉陰組血清TLR2、TLR9水平高于轉陰組，且EBV-DNA載量與血清TLR2、TLR9水平呈正相關。考慮該結果與治療后EBV-DNA載量較高者EBV未得到有效清除，TLR2、TLR9仍然受病原體刺激而呈高表達有關[11]。因此，臨床也可通過監測血清TLR2、TLR9水平判斷EBV感染進程，評估IM患兒病情轉歸情況。

另外，本研究也對T淋巴細胞亞群的變化展開分析，發現IM患兒急性期外周血CD3+、CD8+表達水平均高于恢復期，CD4+及CD4+/CD8+則低于恢復期。其中，CD8+作為細胞毒T細胞及抑制T細胞的表面標志，在EBV感染后可大量增殖，發揮細胞毒作用，消滅感染的B細胞[12]；CD3+、CD4+則是輔助T細胞及效應T細胞表面標志，均能刺激免疫細胞的增殖、分化，以清除EBV[13]；CD8+的大量增殖可抑制CD4+的增殖、分化，而CD4+/CD8+能直接反映機體免疫功能的高低[14]。上述結果也說明，T淋巴細胞介導的免疫應答參與了EBV感染的發展及轉歸。在IM急性期，EBV的感染刺激T淋巴細胞強烈反應，引起CD3+、CD8+表達上調，CD4+/CD8+比值降低；而在恢復期，EBV被清除，免疫紊亂緩解，使CD3+、CD8+表達下降，CD4+/CD8+動態平衡改善[3，15]。另外，治療7 d時，未轉陰組外周血CD3+、CD8+表達水平高于轉陰組，外周血CD4+及CD4+/CD8+低于轉陰組，EBV-DNA載量與外周血CD3+、CD8+表達水平呈正相關，與外周血CD4+及CD4+/CD8+呈負相關，這也說明EBV感染轉歸情況與T淋巴細胞功能具有相關性，EBV清除后機體免疫功能也顯著改善[16]。故監測T淋巴細胞亞群變化情況對評估IM患兒病情變化有利[17]。

本研究還發現，未轉陰組年齡低于轉陰組，治療前EBV-DNA載量高于轉陰組，提示IM抗病毒療效可能與患兒年齡及治療前EBV感染狀況有關[18]。其原因可能為：年齡較小患兒免疫系統發育尚未完善，自身抗病毒能力弱，導致病情轉歸延遲[19]；治療前EBV-DNA載量較高提示急性期病毒復制水平較高，病情更為嚴重，造成治療難度增加[20]。

綜上所述，IM患兒在EBV感染后，TLR2、TLR9表達上調，T淋巴細胞功能紊亂，在EBV清除、病情轉歸后，TLR2、TLR9表達下調，T淋巴細胞功能恢復，因此監測血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細胞亞群表達水平有利于IM患兒病情進展及轉歸的判斷。