復發性口腔潰瘍治療前后患兒血清上皮細胞膜結合黏液素1、CC修飾趨化因子11水平變化及對復發的預測價值

韓永付，馬鵬濤，李華龍，裴 蓉，秦愛麗

(鄭州大學附屬兒童醫院 鄭州兒童醫院，河南 鄭州 450018)

復發性口腔潰瘍是發病率高達25%的口腔黏膜疾病[1]。復發性口腔潰瘍主要表現為局部潰瘍、灼熱疼痛等，具有周期性、復發性等特點[2]。兒童由于免疫系統發育不完善，導致口腔潰瘍發生頻率較高，對患兒生活質量具有一定的影響[3]。目前認為復發性口腔潰瘍是一種非特異性炎癥，在臨床上只能對癥治療，療效不佳[4]。近年來研究發現，免疫功能異常是復發性口腔潰瘍發病的關鍵原因[5]。在病理上，口腔是胃腸道與皮膚之間的過渡區，許多胃腸道免疫狀況可以影響口腔疾病的發生[6]。黏蛋白具有保護黏膜上皮的作用，上皮細胞膜結合黏液素1(Membrane-bound mucin-1 of epithelial cells，MUC1)具有維持腸道內環境穩定的作用，有研究報道，潰瘍性結腸炎患者血漿MUC1水平顯著升高，且活動期患者血漿MUC1水平明顯高于緩解期患者[7]。CC修飾趨化因子配體11(CC-modified chemokine ligand 11，CCL11)具有促炎作用。胡雪廬等[8]研究顯示，潰瘍性結腸炎患者血清CCL11水平明顯升高，活動期患者血清CCL11水平明顯高于緩解期患者。基于此，本研究探究復發性口腔潰瘍患兒治療前后血清MUC1、CCL11水平變化及對復發的預測價值，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年3月至2021年3月鄭州大學附屬兒童醫院收治的復發性口腔潰瘍患兒136例為觀察組,男72例,女64例，年齡2～12歲，平均(7.50±2.14)歲。病例納入標準[9]：①至少有2次復發性口腔潰瘍發病史，病史至少半年；②反復發作，每月發作1次以上；③入院就診前3個月內未服用免疫類制劑；④發作時表現為，潰瘍發生在唇、舌、頰黏膜等處﹐數目1～5個，直徑不超過5 mm，潰瘍充血，局部疼痛，邊界清楚，基部不硬，中央稍凹，表面覆以灰黃色或淺黃色假膜。排除標準：①合并其他口腔黏膜疾病、自身免疫性疾病、甲狀腺功能減退癥；②克羅恩病、潰瘍性結腸炎；③慢性肝臟、腎臟疾病、感染性疾病；④急性營養不良、卟啉病、代謝性疾病；⑤惡性腫瘤患兒。另選擇同期健康體檢且口腔無潰瘍者142例為對照組，男72例，女70例；年齡2～12歲，平均(7.90±2.03)歲。兩組患兒性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。研究經患兒父母或法定監護人知情同意，并經本院倫理委員會審核。

1.2 研究方法

1.2.1 對照組禁食8 h后清晨入院體檢時，研究組在治療前、治療后禁食8 h后清晨分別抽取靜脈血 4 ml，以4000 r/min離心10 min，留上清，置于-20 ℃下待測。

1.2.2 采用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定血清MUC1、CCL11、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素2(IL-2)水平：先用試劑盒攜帶的標準品，按說明書配成一系列濃度樣品，做標準曲線。然后每孔分別加入100 μl待測樣品，混勻，在37 ℃下孵育90 min。用磷酸緩沖液(PBS)洗滌反應板3次，烘干。將一抗溶液加入酶標板各孔中，混勻，在37 ℃下孵育60 min。用PBS洗滌反應板3次，烘干。各孔加入100 μl酶標工作液，在37 ℃下孵育30 min，重復洗板。在各孔加入100 μl終止液，混勻。應用酶標儀測450 nm處吸光值，計算MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平。

1.3 預后評價 對治愈后患兒進行為期1年隨訪，隨訪截止時間2022年3月。根據《復發性阿弗他漬瘍療效評價試行標準》進行評價[10]。顯效：至少6個月未復發，潰瘍面積明顯減小，基本無疼痛；有效：1年內復發1～2次，潰瘍數減少，患兒主訴疼痛感在用藥后7 d內消失；無效：潰瘍間歇期及潰瘍個數無明顯改善，患兒臨床癥狀未減輕。將無效歸為再次復發組，32例；將顯效、有效歸為未再次復發組，104例。

2 結 果

2.1 兩組患兒血清CCL11、MUC1、TNF-α、IL-2水平比較 與對照組相比，觀察組血清MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平顯著升高(均P<0.05)，見表1。

表1 兩組患兒血清CCL11、MUC1、TNF-α、IL-2水平比較

2.2 觀察組患兒治療前后血清CCL11、MUC1、TNF-α、IL-2水平比較 與治療前相比，治療后血清MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平顯著降低(均P<0.05)，見表2。

表2 觀察組患兒治療前后血清CCL11、MUC1、TNF-α、IL-2水平比較

2.3 觀察組患兒血清MUC1、CCL11與TNF-α、IL-2相關性分析 Pearson法分析顯示，血清MUC1、CCL11均與TNF-α、IL-2呈正相關(均P<0.05)，見表3。

表3 血清MUC1、CCL11與TNF-α、IL-2相關性分析

2.4 再次復發組和未再次復發組治療前后血清MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平比較 治療前再次復發組和未再次復發組血清MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平比較差異無統計學意義(均P>0.05)；治療后，與未再次復發組相比，再次復發組血清MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平顯著升高(均P<0.05)。見表4。

表4 再次復發組和未再次復發組治療前后血清MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平比較

2.5 血清MUC1、CCL11對復發性口腔潰瘍再次復發的預測價值 ROC曲線分析表明，MUC1預測復發性口腔潰瘍再次復發的曲線下面積(AUC)為0.886(95%CI:0.819～0.953)，敏感度為71.90%，特異性為92.30%，截斷值為10.21 U/ml，約登指數為0.642；CCL11預測復發性口腔潰瘍再次復發的AUC為0.813(95%CI:0.720～0.906)，敏感度為75.00%，特異性為86.50%，截斷值為3.81 pg/ml，約登指數為0.615；MUC1聯合CCL11預測復發性口腔潰瘍再次復發的AUC為0.908(95%CI:0.847～0.969)，敏感度為84.40%，特異性為86.50%，約登指數為0.709，其中兩者聯合預測的AUC值與CCL11單獨預測的AUC值相比，差異有統計學意義(Z=1.877，P=0.030)，兩者聯合預測的AUC值與MUC1單獨預測的AUC值相比，差異無統計學意義(Z=0.450，P=0.326)。見圖1。

圖1 血清MUC1、CCL11預測復發性口腔潰瘍再次復發的ROC曲線

3 討 論

復發性口腔潰瘍是口腔黏膜局限性潰瘍性疾病，好發于口腔唇、頰、軟腭等處黏膜，發作時黏膜充血、灼熱疼痛，病情嚴重時可伴有頭痛發熱、淋巴結腫大，并且影響患兒說話及進食[11-12]。目前，多數學者認為復發性口腔潰瘍發生與免疫功能異常、腸道菌群異常有密切關系[13]。機體免疫功能對外界炎癥侵擾有抵御作用，當機體細胞免疫功能發生改變后，細胞炎性反應加強，引起口腔局部潰瘍[14]。國外研究發現，口腔潰瘍的全基因組與免疫調節的基因有關[15]。

本結果顯示，觀察組血清TNF-α、IL-2水平顯著高于對照組，治療后血清TNF-α、IL-2水平顯著低于治療前，提示復發性口腔潰瘍發生過程中，TNF-α表達水平上調可促進炎癥性損傷。TNF-α是由單核巨噬細胞分泌的細胞因子，可誘導多種炎性介質分泌，在免疫和炎性反應中扮演重要角色[16-17]。IL-2是調控免疫應答中重要細胞因子，在復發性口腔潰瘍中表達明顯升高，可加重炎性反應，促進潰瘍發生[5]。

本研究發現，觀察組血清MUC1、CCL11水平顯著高于對照組，治療后血清MUC1、CCL11水平顯著低于治療前，提示MUC1、CCL11可能影響復發性口腔潰瘍的發生。CCL11屬于CC類趨化因子家族，一種嗜酸性粒細胞趨化劑，也是重要的免疫物質調節劑[18]。國外研究報道，潰瘍性結腸炎患者血漿中CCL11表達明顯升高，與TNF-α、IL-2具有密切關系[19]。以往研究顯示，TNF-α刺激的支氣管上皮細胞可通過激活STAT6信號通路增加CCL11表達[20]。MUC1是高分子量、高度糖基化的跨膜蛋白，MUC1主要表達于消化道、呼吸道和生殖道等各種組織器官的上皮細胞腺體表面[21]。早期研究表明，MUC1主要生物學功能是潤滑、細胞保護、黏附維持和細胞識別[22]。本研究發現，血清MUC1、CCL11均與TNF-α、IL-2呈正相關，提示MUC1、CCL11可能與復發性口腔潰瘍患兒體內炎性反應相關。猜測TNF-α、IL-2可能通過影響某個通路從而影響患兒體內MUC1、CCL11表達，影響復發性口腔潰瘍發生。本研究進一步發現，再次復發組血清MUC1、CCL11水平顯著高于未再次復發組，提示MUC1、CCL11可能影響復發性口腔潰瘍疾病的預后，初步研究表明，復發性口腔潰瘍患兒再次發生口腔潰瘍可能與MUC1、CCL11表達有關。ROC曲線分析表明，MUC1、CCL11預測復發性口腔潰瘍再次復發的AUC為0.886、0.813；MUC1聯合CCL11預測復發性口腔潰瘍再次復發的AUC為0.908，敏感度為84.40%，特異性為86.50%，提示MUC1、CCL11可預測復發性口腔潰瘍再次復發，MUC1聯合CCL11對復發性口腔潰瘍再次復發有較高的預測價值。

綜上所述，治療后復發性口腔潰瘍患兒血清MUC1、CCL11水平顯著降低，對預測復發性口腔潰瘍患兒再次復發具有一定價值，但是兩者參與復發性口腔潰瘍再次復發的機制有待進一步研究。