響應面法優化地參三萜酸提取工藝及抗氧化活性分析

李金金，孟琦，崔馨燕，石汝杰，吳應梅，楊玲，周濃

（重慶三峽學院生物與食品工程學院/三峽庫區道地藥材綠色種植與深加工重慶市工程實驗室，重慶 404120）

0 引言

【研究意義】地參（Lycopus lucidusTurcz.）為澤蘭地下部分，稱為澤蘭根，又名地筍、蟲草參，主要分布在云南、四川及山東等地，喜潮濕的中高海拔地區（國家藥典委員會，2020）。地參味道鮮美且可入藥，既是原生態的綠色保健食品，又是良好的藥食同源資源。因地參營養豐富，含有三萜酸、黃酮、多酚等多種生物活性成分，受到大眾喜愛（許泳吉等，2003；黃小蘭等，2021）。相關研究表明，地參具有一定的抗氧化能力（Lee et al.，2006），萜類物質在其他中藥材中有廣泛研究，且具有較高抗氧化活性（盧靜等，2009；江洪波和董小萍，2015；黃勤英等，2019），但地參中三萜酸對清除自由基的研究未見詳細報道。由于自由基無處不在（王洪濱和劉偉，2009），過量自由基會破壞機體系統平衡，影響人體健康，不僅會加速衰老，還會引起人體組織損傷，因此尋找天然抗氧化物質清除自由基意義重大。目前，對地參中三萜酸成分提取及抗氧化活性研究較少，通過對其提取工藝進行優化研究，有利于地參中萜類的開發和利用，對開發保健類食品有一定的參考意義。【前人研究進展】由于地參屬于良好的藥食同源植物資源，學者們對其研究較多。王文凈和高春燕（2016）采用水提醇沉法對地參多糖進行提取，測得地參多糖抗氧化活性較強，且隨采收期而變化；李月等（2018，2019）采用冷凝回流方法提取地參總多酚和總黃酮，測得其總多酚和總黃酮清除2,2-聯苯基-1-苦基肼基自由基（DPPH·）的半抑制濃度（IC50）分別為114μg/mL和46 mg/L，表明地參是良好的天然抗氧化劑，值得下一步開發和利用。成分的分離鑒定是地參開發功能性食品的前提。Ren等（2017）建立超高效液相色譜與飛行時間質譜聯用（UHPLC-Q-TOF-MS）法，在負離子模式下鑒定出地參三萜酸成分包括齊墩果酸、熊果酸和白樺脂酸3種化合物；黃小蘭等（2020）建立高效液相色譜法，測得地參中白樺脂酸、齊墩果酸和熊果酸3種萜類成分，三萜酸提取總量達2.748 mg/g。關于地參三萜酸的抗氧化能力研究甚少，但其他物種資源的三萜酸相關研究較多。黃勤英等（2019）對苦丁茶齊墩果酸優化提取，并分析其抗氧化活性，結果表明，苦丁茶齊墩果酸對DPPH·和2,2-聯氮-雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二銨鹽自由基（ABTS+）清除率均在90%以上，但效果不如抗壞血酸（Vc）；陳毓龍等（2020）研究表明，地榆根、莖、葉不同部位三萜酸含量略有差別，對DPPH·的清除能力大小為：莖＞根＞葉＞Vc；付亞玲等（2021）對比黑化紅棗中粗提物與純化物三萜酸清除DPPH·和ABTS+的IC50，通過抗氧化試驗可得黑化紅棗純化后抗氧化活性強于粗提物；徐樹來等（2022）研究表明，超高壓輔助提取法的靈芝三萜抗氧化性優于有機溶劑浸提法，靈芝三萜濃度與抗氧化活性具有相關性。【本研究切入點】三萜酸是天然活性成分（Szakiel et al.，2012；羅小芳等，2018；朱登輝等，2021），目前對地參三萜酸成分分離鑒定已有研究，但鮮見針對其提取工藝優化及抗氧化能力分析的文獻報道。【擬解決的關鍵問題】提取地參萜類成分，對白樺脂酸、齊墩果酸和熊果酸3種主要萜類成分的總含量測定進行響應面參數優化，并分析其抗氧化活性，為地參生物活性成分的進一步研究及功能性產品開發提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

地參產自重慶市萬州區（人工栽培），經重慶三峽學院生物與食品工程學院周濃教授鑒定為地參，在自然條件下烘干備用。白樺脂酸、齊墩果酸和熊果酸對照品購自成都德思特生物技術有限公司，批號分別為DST180505-026、DST171026-051和DST 180606-019，HPLC≥98%；甲醇（AR）、無水乙醇（AR）和甲酸（AR）購自重慶川東化工集團有限公司；DPPH（含量≥98%）和ABTS（BR，99%）購自西亞化學科技（山東）有限公司；七水合硫酸亞鐵（AR）購自四川西隴化工有限公司；水楊酸（AR）購自成都新都區木蘭鎮工業開發區；30%過氧化氫（AR）購自成都市科龍化工試劑廠；過硫酸鉀（AR）購自優耐德引發劑（上海）有限公司。

主要儀器設備：A2004型電子天平（上海津平科學儀器有限公司）、精密天平（梅特勒—托利多集團）、HSY-26型數顯恒溫水浴鍋（上海躍進醫療器械有限公司）、LC-20AT高效液相色譜儀（日本shimadzu株式會社）、BUCHI R-300旋轉蒸發儀（北京海富達科技有限公司）和V-1100D型可見分光光度計（上海美譜達儀器有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品溶液制備地參粉碎后過100目篩，稱取地參1.000±0.002 g置于錐形瓶中，平行3次，醇提法提取，過濾，濃縮，以甲醇溶液定容至5 mL，搖勻，過0.22μm微孔濾膜后，高效液相色譜儀檢測，計算白樺脂酸、齊墩果酸和熊果酸含量。

1.2.2 標準品制備分別精密稱取減壓干燥至恒重的白樺脂酸、齊墩果酸和熊果酸對照品適量，加甲醇溶解并制成質量濃度分別為1.082、0.878和1.016 g/mL的對照品貯備液。取3種對照品溶液各1 mL，用甲醇定容至5 mL，逐級稀釋；再分別精密吸取對照品貯備液0.001、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035和0.040 mL，加甲醇稀釋至1 mL，定容搖勻后用0.22μm微孔濾膜過濾。

1.2.3 色譜條件色譜柱為Diamonsil C18（5μm，4.6 mm×250 mm）；檢測波長210 nm；流動相為甲醇—0.03%甲酸水溶液（pH 2.50）（89∶11，v/v）；柱溫30℃；體積流量0.8 mL/min；進樣量20μL。

1.2.4 方法學考察

1.2.4.1 精密度試驗取1.2.2混合對照品溶液，按照1.2.3色譜條件連續進樣6次，計算白樺脂酸、齊墩果酸和熊果酸峰面積的相對標準偏差（Relative standard deviation，RSD）。

1.2.4.2 重復性試驗精密稱取地參粉末1.0 g，依據1.2.1方法制得地參三萜酸待測液，平行制備6份，按照1.2.3色譜條件進樣測定，計算白樺脂酸、齊墩果酸和熊果酸峰面積的RSD。

1.2.4.3 穩定性試驗精密稱取地參粉末1.0 g，依據1.2.1方法制得地參三萜酸待測液，按照1.2.3色譜條件對同一樣品分別在0、3、9、15、21和24 h進樣測定，計算白樺脂酸、齊墩果酸和熊果酸峰面積的RSD。

1.2.4.4 加樣回收率試驗分別精密稱取6份已知含量的地參粉末0.5 g，加入白樺脂酸、齊墩果酸和熊果酸對照品適量，依據1.2.1方法制得地參三萜酸化合物待測液，按照1.2.3色譜條件進樣測定，分別計算白樺脂酸、齊墩果酸和熊果酸的加標回收率和RSD。

1.2.5 單因素試驗

1.2.5.1 乙醇體積分數的選擇固定提取時間1.5 h、料液比1∶30（g/mL，下同）、提取溫度70℃，考察乙醇不同體積分數（60%、70%、80%、90%和100%）對地參三萜酸提取量的影響。

1.2.5.2 提取時間的選擇固定乙醇體積分數90%、料液比1∶30、提取溫度70℃，考察不同提取時間（1.0、1.5、2.0、2.5和3.0 h）對地參三萜酸提取量的影響。

1.2.5.3 料液比的選擇固定乙醇體積分數90%、提取時間2.0 h、提取溫度70℃，考察不同料液比（1∶20、1∶30、1∶40、1∶50和1∶60）對地參三萜酸提取量的影響。

1.2.5.4 提取溫度的選擇固定乙醇體積分數90%、料液比1∶40、提取時間2.0 h，考察不同提取溫度（35、45、55、65和75℃）對地參三萜酸提取量的影響。

1.2.6 響應面設計根據單因素試驗結果，進一步設計響應面優化試驗。選取對三萜酸提取效果最佳的因素水平，以提取時間、乙醇體積分數、料液比和提取溫度為自變量，三萜酸提取量為響應值，采取4因素3水平設計Box-Behnken Design試驗，響應面因素與水平見表1。

表1 響應面試驗因素與水平Table 1 Response surface experimental factors and level

1.2.7 抗氧化試驗

1.2.7.1 DPPH·清除率測定DPPH溶液配制：參考梁磊等（2017）的方法，略有改動。稱取0.0196 g DPPH粉末置于容量瓶中，加入無水乙醇并稀釋定容至250 mL，即配制成0.2 mmol/L DPPH溶液，避光30 min后搖勻備用。

測定方法：移取地參三萜酸提取液，將樣品溶液配制成質量濃度為0.15～0.35 mg/mL 5個不同濃度梯度的樣品液。移取已配制的0.2 mmol/L DPPH溶液，充分混勻后，避光反應30 min，在波長517 nm處測定吸光值（A0）。分別移取DPPH溶液與乙醇混勻后在同樣條件下測定空白組吸光值（A），然后移取地參三萜酸提取液與乙醇混勻，在相同條件下測定對照組吸光值（A1），分別平行3次試驗，同時以相同質量濃度的VC做對照試驗。

1.2.7.2 ABTS+清除率測定溶液配制：參照王天等（2022）的方法，稱取ABTS粉末38.41 mg，加入蒸餾水定容至10 mL容量瓶，再稱取過硫酸鉀6.62 mg，加入蒸餾水定容至10 mL容量瓶，將定容后的ABTS與過硫酸鉀溶液轉移至25 mL容量瓶并定容至刻度，混勻后在25℃下避光反應16 h備用。移取配制成質量濃度為0.15～0.35 mg/mL 5個不同濃度梯度的地參三萜酸樣品溶液于5個試管中，分別加入配制好的ABTS混合液，在25℃條件下避光反應6 min，在734 nm波長處測定吸光值（A0）；同時在相同條件下移取乙醇與ABTS混合溶液混勻后測定空白組吸光值（A），分別平行3次試驗，并以相同質量濃度的VC做對照試驗。

1.2.7.3 羥自由基（·OH）清除率測定硫酸亞鐵、過氧化氫和乙醇—水楊酸溶液配制：準確稱量硫酸亞鐵0.2502 g，加入蒸餾水稀釋定容至100 mL，配制成9 mmol/L硫酸亞鐵溶液；精密移取0.44 mL 30%過氧化氫，稀釋定容至500 mL容量瓶中，配制成8.8 mmol/L過氧化氫溶液；準確稱量0.243 g水楊酸，加入乙醇稀釋定容至100 mL，配制成9 mmol/L乙醇—水楊酸溶液。

測定方法：參照姚佳等（2021）的方法，移取配制成質量濃度為0.15～0.35 mg/mL 5個不同濃度梯度的地參三萜酸提取液于5個試管中，分別加入已配制的硫酸亞鐵溶液和乙醇—水楊酸溶液混勻，加入過氧化氫溶液設為試驗組A0，參照以上操作不加樣品設為空白組A，加入蒸餾水設為對照組A1，測定其吸光值，平行3次試驗，以相同質量濃度的VC為陽性對照。

1.3 統計分析

采用Excel 2019和Origin 2018對試驗數據進行處理分析及繪圖，以Design-Expert 12進行響應面設計及試驗分析。

2 結果與分析

2.1 線性關系考察結果

以峰面積為縱坐標（Y）、進樣濃度為橫坐標（X），繪制標準曲線，回歸方程和線性范圍見表2。白樺脂酸、齊墩果酸和熊果酸的線性范圍分別為5.41～216.40μg/mL、4.39～175.60μg/mL和5.08～203.20μg/mL，R2在0.99996～0.99998。

表2 對照品的線性關系和范圍Table 2 Linear relation and range of reference substance

2.2 方法學驗證結果

2.2.1 精密性試驗結果 計算所得白樺脂酸、齊墩果酸和熊果酸平均RSD分別為0.87%、0.36%和0.40%，小于1%，表明儀器精密度良好。

2.2.2 重復性試驗結果所測白樺脂酸、齊墩果酸和熊果酸平均RSD分別為0.97%、0.45%和0.53%，小于1%，表明重復性良好。

2.2.3 穩定性試驗結果所得白樺脂酸、齊墩果酸和熊果酸平均RSD分別為1.89%、0.49%和0.31%，白樺脂酸RSD小于2%，齊墩果酸和熊果酸RSD小于1%，說明供試品溶液在24 h內穩定。

2.2.4 加標回收試驗結果由表3可知，白樺脂酸、齊墩果酸和熊果酸的平均回收率在100.27%～103.90%，RSD分別為1.90%、1.05%和0.78%，小于3%，表明測定地參三萜酸的試驗方法可行。

表3 加標回收試驗結果（n=6）Table 3 Results of standard addition recovery test（n=6）

2.3 單因素試驗結果分析

2.3.1 乙醇體積分數對地參三萜酸提取量的影響由圖1可知，乙醇體積分數過高或過低，對三萜酸提取量均有顯著影響（P＜0.05，下同），乙醇體積分數過低，地參三萜酸的提取效果較差，隨著乙醇體積分數升高，三萜酸提取效果越好，乙醇體積分數在80%～90%時，三萜酸提取量呈顯著上升趨勢，在乙醇體積分數為90%時提取量達最大值（1.6281 mg/g），90%～100%乙醇體積分數的三萜酸提取量均在較高水平，二者間差異不顯著（P＞0.05，下同）。說明乙醇體積分數越高，樣品中的三萜酸有效成分能高效溶出。這可能是樣品與溶劑相似相溶原理，溶劑與三萜酸極性相似成分可被溶劑充分溶出而被提取，乙醇體積分數過低，樣品溶出能力較弱，提取效果較差，三萜酸的提取量低。因而選取80%、90%和100%3個乙醇體積分數作為后續響應面優化分析的水平。

2.3.2 提取時間對地參三萜酸提取量的影響 由圖2可知，隨著提取時間的延長，地參三萜酸提取量先增后減，提取1.0～1.5 h時，三萜酸提取量上升最快，提取至2.0 h時，提取量達最大值（1.5600 mg/g），此時地參中三萜酸成分已基本溶解出來。繼續延長提取時間，溶出的三萜酸成分含量直線下降，可能是選取較高的乙醇體積分數、提取溫度恒定等因素促使三萜酸成分快速溶出，也可能是提取時間過長，使三萜酸成分遭到破壞。因此，選取1.5、2.0和2.5 h作為后續響應面優化分析的水平。

2.3.3 料液比對地參三萜酸提取量的影響 由圖3可知，地參三萜酸提取量隨溶劑用量的增加呈先升高后降低的變化趨勢，料液比為1∶40時三萜酸提取量達最大值（1.6761 mg/g）。這可能是因為在一定的提取溫度、提取時間和乙醇體積分數下地參樣品的溶解度穩定，溶劑體積過少，三萜酸無法溶解完全；當達到一定的溶劑體積，三萜酸溶解已基本溶出且處于恒定狀態，三萜酸已達最大溶解量；若進一步加大溶劑體積，不僅對提取量影響小，還可能會溶解出其他成分。因此，選取料液比1∶30、1∶40和1∶50作為后續響應面優化分析的水平。

2.3.4 提取溫度對地參三萜酸提取量的影響由圖4可知，提取溫度對地參三萜酸提取量的影響趨勢呈現不規則性，提取溫度為35℃時，三萜酸成分開始溶出，隨著溫度的升高，在45℃時三萜酸提取量有所減少，可能其他成分的溶出影響了萜類成分提取，說明提取溫度低于55℃時，提取溫度對三萜酸提取量處于不穩定狀態，提取不完全，三萜酸提取量波動大，可能與地參粉末接觸不均勻，以及溫度升高使樣品組織細胞開始破碎從而有其他成分溶出等影響有關。當溫度不斷升高時，提取液中分子運動加快，與地參粉末得到充分接觸，三萜酸溶出量也不斷增加，在55℃時三萜酸提取量達最大值；超過55℃后，三萜酸提取量快速下降，可能是提取溫度過高導致乙醇溶劑易揮發，影響三萜酸結構的穩定性，從而影響三萜酸的提取效果。因此，選取45、55和65℃3水平進行響應面優化試驗。

2.4 響應面優化試驗結果分析

2.4.1 響應面回歸模型建立綜合單因素試驗結果所得，采用提取時間（A）、乙醇體積分數（B）、料液比（C）和提取溫度（D）4因素3水平的響應面中心試驗，運用Design-Expert 12進行二次多項式擬合。以地參三萜酸提取量（Y）為響應值，由回歸模型可得三萜酸與4個變量之間的線性關系，即二次回歸方程：Y=1.88+0.0106A+0.2487B+0.0446C-0.0391D+0.00037AB-0.0086AC-0.0325AD-0.0557BC+0.0364 BD-0.0209CD-0.0713A2-0.2338B2-0.1428C2-0.0361D2。

由ANOVA分析結果（表5）可知，模型F=23.95，P=0.0001，模型極顯著（P＜0.01，下同），失擬項F=2.91，P=0.1573，失擬項不顯著，表明選用的二次多項模型擬合程度良好，模型成立。模型相關系數R2=0.9599，表明該回歸方程有很好的相關性，校正決定系數=0.9385，表明有93.85%的響應值變化。影響地參三萜酸提取的因素中，B、A2、B2和C2影響極顯著，C和D影響顯著。選取的4個因素對三萜酸提取量影響排序為：B＞C＞D＞A。

表5 方差分析結果Table 5 Analysis result of variance

2.4.2 交互作用影響分析 響應面圖能直觀反映兩因素之間的交互作用對地參三萜酸提取效果的影響，由回歸方程得出響應面圖（圖5），響應面曲面越陡，表明交互作用越明顯，反之響應面曲面坡度緩，表明無交互作用。響應面投影底部為等高線圖，等高線的形狀能反映兩因素之間是否交互，圓形表示兩因素之間無明顯的交互作用，橢圓形則表示兩因素之間有交互作用。

圖5-a、圖5-b和圖5-f的等高線中橢圓度不大，趨近于圓的程度，說明兩因素間的交互作用不明顯，均未達顯著水平；圖5-c、圖5-d和圖5-e的等高線中橢圓程度相對明顯，但兩因素間交互作用相對較弱，仍未達顯著水平。圖5-a～圖5-f中，固定一個因素，地參三萜酸提取量均隨著另一個因素的增大而減小，等高線趨近于圓形，從而表明兩因素之間交互不明顯，與方差分析結果一致。

表4 響應面試驗設計及結果Table 4 Response surface experimental design and results

2.4.3 驗證試驗結果 通過單因素及響應面試驗進行優化分析，得出提取地參三萜酸的最佳工藝條件：提取時間1.944 h、乙醇體積分數95.591%、料液比1∶40.332、提取溫度51.750℃，在此工藝條件下，地參三萜酸理論提取量為1.9440 mg/g。綜合試驗條件的操作，將各參數進行調整：提取時間2.0 h、乙醇體積分數95%、料液比1∶40、提取溫度50℃，重復3次，測得地參三萜酸提取量為1.9431 mg/g，與預測值差異小，說明該試驗方法可行。

2.5 地參三萜酸抗氧化活性分析結果

2.5.1 DPPH·清除能力測定結果DPPH·清除率是常見且穩定的抗氧化指標之一，DPPH粉末醇溶物呈紫色，在517 nm處有吸收峰值。由圖6可知，地參三萜酸提取液有一定的清除DPPH·能力，隨著提取液濃度的逐漸增大，清除率呈上升趨勢，不同濃度梯度均有良好的清除能力。在0.15～0.20 mg/mL和0.30～0.35 mg/mL范圍內，三萜酸的DPPH·清除率隨濃度增大而上升，在0.20～0.30 mg/mL范圍內，清除率保持平緩穩定狀態。當三萜酸提取液質量濃度為0.15 mg/mL時，DPPH·清除率為75.89%；質量濃度為0.35 mg/mL時，DPPH·清除率達87.46%。Vc對DPPH·的清除率隨Vc質量濃度的增大而緩慢升高，在相同濃度下，Vc的清除能力強于三萜酸的清除能力。通過分析可知，地參三萜酸對DPPH·具有較強的清除能力，說明地參中三萜酸成分有較好的抗氧化活性。

2.5.2 ABTS+清除能力測定結果ABTS與過硫酸鉀反應生成的自由基在734 nm處有最大吸光值，避光反應孵育的ABTS溶液與過硫酸鉀溶液混合溶液需在測定前稀釋成工作液。由圖7可知，地參三萜酸提取液ABTS+清除率變化趨勢與Vc相似，但稍低于Vc清除率，地參三萜酸提取液最大清除率為97.57%，Vc的最大清除率為99.00%。ABTS+清除率隨著樣品溶液質量濃度增大而遞增，與質量濃度梯度呈正相關。結果表明，地參三萜酸提取液具有良好的ABTS+清除效果，抗氧化活性強。

2.5.3 ·OH清除能力測定結果·OH是一種常見的反映抗氧化活性強弱的指標，·OH易與大分子物質發生反應，Fe2+與過氧化氫反應后產生的羥基可與水楊酸反應，在510 nm處有最大吸收峰。由圖8可知，地參三萜酸對·OH的清除能力較DPPH·和ABTS+的清除能力弱，最大清除率僅為46.78%，其質量濃度越低清除率越低，而Vc陽性對照的清除率遠高于三萜酸，Vc質量濃度在0.35 mg/mL時清除率趨近于100.00%。即使三萜酸的·OH清除率低，也有一定的抗氧化活性。

3 討論

浸提法廣泛應用于中藥材及食品中有效成分提取的研究（王念等，2021），三萜酸成分多采用乙醇和甲醇等有機溶劑進行提取，黃小蘭等（2020）研究表明乙醇對地參中三萜酸成分提取效果良好。本研究結合試驗過程中實驗室條件、試驗可行性和操作簡便性等問題，綜合考察后采用醇提法提取地參三萜酸成分，并對其抗氧化作用進行研究。經單因素和響應面試驗優化，得到提取地參三萜酸工藝條件為：提取時間2.0 h、乙醇體積分數95%、料液比1∶40、提取溫度50℃，在此條件下，地參三萜酸提取量為1.9431 mg/g。劉娜（2016）對澤蘭莖葉和根部進行研究，所得地參三萜酸提取率為莖葉三萜酸提取率（3.21%）的1/3；黃小蘭等（2020）研究表明，不同產地地參三萜酸提取總量在2.099～2.748 mg/g。本研究采用醇提法對地參三萜酸的提取量略少于超聲輔助提取法（黃小蘭等，2020），但相差較小，可能因為超聲輔助提取對樣品的破碎能力強，萜類成分能更好地溶解。鄒俊等（2018）在熱浸法條件下提取連錢草三萜酸成分，所得齊墩果酸和熊果酸含量分別為0.8059和1.5683 mg/g，結果顯示乙醇體積分數為88%左右時，對連錢草三萜酸成分的提取效果最優，本研究結果與其類似，乙醇體積分數均在90%左右，進而說明乙醇體積分數較高，地參與連錢草中的三萜酸有效成分能高效溶出，與三萜酸的極性有關，可證明在乙醇體積分數越大的條件下對三萜酸提取更完全。在單因素基礎上運用響應面優化工藝條件，根據響應面及等高線結果可知，乙醇體積分數與料液比兩因素之間交互作用較弱，未達顯著水平，其余兩兩因素之間交互作用也未達顯著水平，表明兩因素之間交互作用不明顯。在單個因素中，乙醇體積分數是主要的影響因素，且響應面結果顯示對三萜酸提取量有極顯著影響。

地參含有多種生物活性成分，已有學者對其多糖、多酚、黃酮等活性成分進行提取及抗氧化活性研究（黃菊華，2015；王文凈和高春燕，2016；桑鵬和高春燕，2016；李月等，2018，2019），結果表明地參中多種生物活性成分均具有一定的抗氧化作用。本研究通過研究3種自由基清除率評價地參中三萜酸成分的抗氧化活性。在DPPH·抗氧化活性方面，地參三萜酸在最大質量濃度下的清除率為87.46%，與何策等（2021）對桑樹桑黃總三萜提取物測定的最大質量濃度下抗氧化活性結果（86.45%）類似，說明不同物種資源、不同質量濃度下三萜酸成分的抗氧化活性有相似性；在ABTS+抗氧化活性方面，李曉強等（2022）測定余甘子多酚的ABTS+清除率可達97%，本研究結果（97.57%）與其研究結果類似，說明不同物種資源、不同活性成分的抗氧化活性能力有相似性。本研究結果表明，地參三萜酸提取物質量濃度不同，抗氧化活性不同。通過對DPPH·、ABTS+和·OH 3種體外抗氧化活性進行測定，發現地參三萜酸成分清除ABTS+效果最優，其次是清除DPPH·，對·OH的清除效果最低，說明三萜酸對·OH的清除效果不明顯，可能地參中所含三萜酸的含量未達到較高抗氧化效果所需的質量濃度，與蔡天嬌（2010）、付亞玲等（2021）研究同濃度下三萜酸的·OH清除能力類似。本研究表明地參中三萜酸提取物具有一定的抗氧化活性，但未進行提取物的分離純化，總三萜酸成分復雜，后續有必要對地參三萜酸有效成分進行分離純化并對其功能進一步研究，為地參資源的高值化利用提供基礎。

4 結論

通過響應面法優化提取地參三萜酸方法可靠，獲得地參三萜酸提取量為1.9431 mg/g；地參三萜酸具有一定的抗氧化活性，可開發功能性產品。