不同品種嘉寶果葉提取物的酚類成分及生物活性分析

吳妙鴻，邱珊蓮，林寶妹，李海明，張帥

（福建省農(nóng)業(yè)科學院亞熱帶農(nóng)業(yè)研究所，福建漳州 363005）

0 引言

【研究意義】嘉寶果［Myrciaria cauliflora（DC.）Berg］是桃金娘科（Myrtaceae）擬愛神木屬（Myrciaria）熱帶亞熱帶常綠小喬木或大型灌木，因其果實形狀與葡萄相似，又名樹葡萄、美味熱帶葡萄（唐麗等，2014）。嘉寶果口感獨特、香味濃郁、營養(yǎng)豐富，且具有較高的觀賞價值，在原產(chǎn)地巴西是最受歡迎的水果之一。已有研究表明嘉寶果中富含縮酚酸、花青素等酚類物質(zhì)，具有抗氧化、抗炎、抗菌、降糖等生物活性（Wu et al.，2012；Plaza et al.，2016；Wu et al.，2016；只佳增等，2018），其在巴西民間被作為治療痢疾的傳統(tǒng)藥物（de Albuquerque et al.，2007）。天然植物多酚因其顯著的生物活性被視為對人體健康至關重要的物質(zhì)，近年來，由于酚類物質(zhì)的安全性和廣泛性，將其開發(fā)為抗氧化劑和功能性成分已成為國內(nèi)外研究熱點（Wu et al.，2013）。因此，對嘉寶果葉片提取物的酚類成分和生物活性進行研究，能為相關功能性產(chǎn)品的開發(fā)提供參考。【前人研究進展】嘉寶果果皮、果肉和枝葉均具有一定的營養(yǎng)價值和健康功效（徐紹絲等，2021）。Duarte等（2010）研究表明不同土壤種植的嘉寶果葉總酚干基含量為79.69～145.04 mg/g，單寧含量為34.04～63.08 mg/g；Souza-Moreira等（2010）研究表明嘉寶果葉醇提物的總酚和黃酮含量分別達62.08%和1.25%；邱珊蓮等（2018）測定分析嘉寶果根、莖、葉、果皮、果肉、種子的總酚和黃酮含量，發(fā)現(xiàn)其嫩葉的總酚和黃酮含量最高，生物活性最強；Ribeiro等（2019）研究發(fā)現(xiàn)嘉寶果葉片中含有萜類、酚類、類黃酮、單寧等物質(zhì)。已有報道表明嘉寶果葉酚類成分包括鞣花酸、沒食子酸、鄰香豆酸、楊梅苷、槲皮黃甙等（只佳增等，2018），多種酚類物質(zhì)的存在使嘉寶果葉具有較強的生物活性。邱珊蓮等（2017）研究發(fā)現(xiàn)4個品種（沙巴、四季早生、福岡和阿根廷）嘉寶果葉醇提物均具有顯著抗氧化活性。已有大量研究揭示嘉寶果葉具有抗菌活性，Mohanty和Cock（2009）研究發(fā)現(xiàn)嘉寶果葉提取物的抑菌率可達64%；嘉寶果葉提取物對口腔生物膜細菌具有顯著的殺菌作用，是開發(fā)治療牙科疾病藥物的一個優(yōu)質(zhì)、經(jīng)濟的天然來源（Macedo-Costa et al.，2009）；Oliveira等（2011）利用嘉寶果葉片提取物開發(fā)殺菌產(chǎn)品，發(fā)現(xiàn)該產(chǎn)品的總酚含量高，其對金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、表皮葡萄球菌（S.epidermidis）、大腸桿菌（Escherichia coli）、嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus）和白色念珠菌（Candida albicans）均有抑菌活性。嘉寶果葉還具有降血糖活性，林寶妹等（2020b）研究發(fā)現(xiàn)在飼料中添加4%和8%的嘉寶果葉片對高血糖小鼠具有良好的降血糖和改善脂質(zhì)代謝作用。【本研究切入點】目前，嘉寶果的主栽品種為沙巴，大紅鉆、保利斯塔和喬尼爾雖然不是主栽品種，但也具有一些優(yōu)良的性狀，如大紅鉆四季開花結果，成熟果實顏色鮮紅、味道獨特；保利斯塔果實很大、肉多汁、質(zhì)量上乘，成熟期相對較晚，可抵抗銹病（張舒平和李健，2002）；喬尼爾果實甜度高，有濃郁番石榴果香味，因此這3個品種嘉寶果也具有較大的經(jīng)濟價值和市場潛力，但目前針對這3個品種嘉寶果葉的研究尚未見報道。由于不同品種之間的酚類成分和生物活性差異較大，因此針對這幾個品種的研究對其開發(fā)應用有一定意義。同時，國內(nèi)外對嘉寶果葉的研究主要針對抗氧化活性和降糖活性等，關于其提取物中酚類成分的研究較少，而酚類成分是影響生物活性的關鍵因素，因此分析其組成十分必要。【擬解決的關鍵問題】以大紅鉆、保利斯塔和喬尼爾嘉寶果葉為試材，測定葉片提取物的總酚含量及酚類組成，研究其抗氧化活性和降糖活性，分析總酚含量與生物活性的相關性，為嘉寶果葉的開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

大紅鉆、保利斯塔和喬尼爾嘉寶果葉均于2021年3月采自福建省農(nóng)業(yè)科學院亞熱帶農(nóng)業(yè)研究所閩臺種質(zhì)資源圃（東經(jīng)117°、北緯24°），采摘質(zhì)地柔軟的枝條頂端嫩葉。福林酚試劑、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2,2′-聯(lián)氮-雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二銨鹽（ABTS）、α-葡萄糖苷酶和胰酶購自美國Sigma公司；沒食子酸、蘆丁、阿卡波糖和4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（PNPG）純度均≥98%，購自日本東京化成工業(yè)株式會社；2-氯-4-硝基苯基-α-D-麥芽三糖苷（純度95%）購自北京百靈威科技有限公司；無水乙醇、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、碳酸鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉等均為分析純，購自國藥集團化學試劑有限公司；甲醇（HPLC級）購自德國Merck公司；沒食子酸、鞣花酸、表兒茶素、兒茶素、槲皮素、楊梅苷、金絲桃苷和槲皮素-3-O-葡萄糖苷標準品純度均≥98%，購自北京索萊寶科技有限公司；總抗氧化能力測定試劑盒（FRAP法）購自南京建成生物工程研究所。

主要儀器設備：GZX-9246MBE電熱鼓風干燥箱（上海博迅實業(yè)有限公司）；BS110S分析天平（德國Sartorius集團）；PC650超聲波細胞破碎儀（上海皓莊儀器有限公司）；CR22N高速冷凍離心機（日本HITACHI公司）；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；FD-1冷凍干燥機（北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司）；L5S紫外分光光度計（上海儀電分析儀器有限公司）；iMark酶標儀（美國Biorad公司）；Waters Acqutiy UPLC H-Class超高效液相色譜、Xevo TQ-S三重四級桿質(zhì)譜（美國Waters公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 嘉寶果葉提取物制備 將嘉寶果葉在60℃下烘干至恒重，粉碎后過80目篩。按1∶20（g∶mL）的比例在粉末加入70%乙醇溶液，以240 W功率超聲15 min，隨后以200 r/min振搖提取1 h，4000 r/min離心15 min，收集上清液，重復提取2次，合并上清液。提取液在50℃下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無醇味，利用冷凍干燥除去剩余水分，即得嘉寶果葉片提取物凍干粉。

1.2.2 總酚和黃酮含量測定總酚含量采用福林—酚法測定（Tohidi et al.，2017）。以沒食子酸為標準品，質(zhì)量濃度設為0.01～0.10 mg/mL，繪制標準曲線y=10.104x+0.0251（R2=0.999），式中，x為沒食子酸質(zhì)量濃度（mg/mL），y為吸光值。嘉寶果葉提取物總酚含量以單位質(zhì)量提取物凍干粉中所含沒食子酸當 量（Gallic acid equivalent，GAE）計，單位為mg GAE/g。

黃酮含量采用硝酸鋁法測定（林寶妹等，2020c）。以蘆丁為標準品，質(zhì)量濃度設為0.10～0.80 mg/mL，繪制標準曲線y=1.1583x+0.0029（R2=0.9997），式中，x為蘆丁質(zhì)量濃度（mg/mL），y為吸光值。嘉寶果葉提取物黃酮含量以單位質(zhì)量提取物凍干粉中所含蘆丁當量（Rutin equivalent，RE）計，單位為mg RE/g。

1.2.3 超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）分析酚類成分UPLC條件：色譜柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8μm）；柱溫：40℃；流動相：（A）5 mmol/L乙酸銨+0.1%甲酸水溶液，（B）乙腈；進樣體積：4μL；流速：0.2 mL/min。梯度洗脫程序：0～5 min，90% A—10% A；5～6 min，10% A；6～8 min，10% A—50% A；8～9 min，50%A—90%A；9～10 min，90%A。

MS條件：離子源：電噴霧電離（ESI）源；離子源溫度：120℃；掃描方式：多級反應監(jiān)測（MRM）；毛細管電壓：3.0 kV（正模式）、1.5 kV（負模式）；脫溶劑氣溫度：500℃（正模式）、450℃（負模式）。8個標準品的質(zhì)譜參數(shù)見表1。

標準品溶液制備和測定：精確稱取沒食子酸、鞣花酸、表兒茶素、兒茶素、槲皮素、楊梅苷、金絲桃苷和槲皮素-3-O-葡萄糖苷標準品，用色譜純甲醇配制成1.0 mg/mL標準品儲備液。精確量取標準品儲備液，用甲醇配制成系列濃度梯度為0.2、0.5、1.0、2.0、5.0和10.0μg/mL的混合標準溶液。按照上述UPLC、MS方法及表1的質(zhì)譜參數(shù)測定，以峰面積（y）對其濃度（x，μg/mL）進行線性回歸，得到回歸方程。8個標準品的回歸方程、判定系數(shù)R2和保留時間如表1所示。

表1 標準品質(zhì)譜參數(shù)和回歸方程Table 1 Mass spectrometry parameters and regression equation of standard

供試樣品制備：準確稱取50 mg凍干粉，用甲醇定容至10 mL，配制成5 mg/mL溶液，過0.22μm有機相濾膜，取濾液待測。

1.2.4 抗氧化活性測定DPPH·、ABTS+和超氧陰離子自由基（）清除能力的測定參照文獻（Hu and Xu，2011；Tang et al.，2017；李國峰等，2021）的方法。自由基清除能力以清除率為50%時提取物的質(zhì)量濃度（IC50）評價。

總抗氧化能力的測定采用鐵離子還原/抗氧化能力法，使用總抗氧化能力測定試劑盒（FRAP法）進行測定。以單位質(zhì)量樣品將Fe3+還原成Fe2+的量計，單位為mmol/g。

參考Seeram等（2008）的方法，利用抗氧化能力綜合指數(shù)（Antioxidant potency composite index）評價不同樣品的綜合抗氧化能力。首先將不同樣品的4個抗氧化指標分別換算成陽性對照當量（Positive control equivalent，PCE），即單位質(zhì)量樣品的抗氧化能力相當于抗壞血酸的質(zhì)量，將每個指標中PCE值最高的樣品賦抗氧化指數(shù)為100，其他樣品的抗氧化指數(shù)按下式計算：

式中，PCEsample為樣品的陽性對照當量，PCEbest為樣品中最高的陽性對照當量。

4個抗氧化指標的抗氧化指數(shù)平均值即為抗氧化能力綜合指數(shù)。

1.2.5 降糖活性測定α-葡萄糖苷酶抑制活性測定參照李萌萌等（2017）的方法進行。

α-淀粉酶抑制活性測定參照Landa-Cansigno等（2020）的方法并做適當修改。用40 mmol/L磷酸鹽緩沖液（pH 6.8）配制1.4 mmol/L 2-氯-4-硝基苯基-α-D-麥芽三糖苷（CNPM）和0.5 mg/mL胰酶，在96孔酶標板中分別加入60μL不同濃度的嘉寶果葉提取物溶液和120 mL CNPM，混勻后在35℃下孵育5 min；隨后加入30μL胰酶，在35℃下反應10 min，立即置于酶標儀中測定其在405 nm下吸光值。磷酸鹽緩沖液和阿卡波糖代替樣品分別作為空白對照組和陽性對照組，磷酸鹽緩沖液代替CNPM和胰酶作為樣品本底組。

式中，Ac為空白對照組的吸光值，Ai為樣品組或陽性對照組的吸光值，Ab為樣品本底組的吸光值。

降糖活性以抑制率為50%時抑制劑的質(zhì)量濃度（IC50）評價。

1.3 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2010進行回歸分析，SPSS 22.0進行顯著性分析和相關分析。

2 結果與分析

2.1 總酚和黃酮含量測定結果

由表2可知，3個品種嘉寶果葉的總酚含量存在顯著差異（P＜0.05，下同），在150.41～176.67 mg GAE/g，提取物凍干粉的總酚含量在458.78～535.51 mg GAE/g，以喬尼爾葉的總酚含量最高，其次是保利斯塔，大紅鉆最低。葉片黃酮含量在32.81～76.42 mg RE/g，提取物凍干粉的黃酮含量在99.46～233.42 mg RE/g，大紅鉆和保利斯塔的黃酮含量無顯著差異（P＞0.05，下同），以喬尼爾最低。

表2 3個品種嘉寶果葉總酚和黃酮含量Table 2 Content of total phenols and flavonoids in leaves of the 3 jaboticaba cultivars

2.2 提取物酚類成分分析結果

由表3可知，不同品種嘉寶果葉提取物酚的種類相似，但含量存在明顯差異。大紅鉆嘉寶果葉中含量較高的酚類及其排序為：沒食子酸＞鞣花酸＞表兒茶素＞兒茶素，保利斯塔的排序為：表兒茶素＞兒茶素＞沒食子酸＞鞣花酸，喬尼爾的排序為：沒食子酸＞鞣花酸＞槲皮素-3-O-葡萄糖苷。在已檢出的8種酚類物質(zhì)中，沒食子酸和鞣花酸為羥基苯甲酸類，兒茶素和表兒茶素為黃烷醇類，槲皮素、楊梅苷、金絲桃苷和槲皮素-3-O-葡萄糖苷為黃酮醇類，大紅鉆和喬尼爾提取物中羥基苯甲酸類占比較高，分別為62.69%和84.67%，保利斯塔則是黃烷醇類占比最高，為58.85%。

表3 嘉寶果葉提取物酚類成分含量比較（mg/g）Table 3 Comparison of phenolic components in extracts from jaboticaba leaves（mg/g）

2.3 提取物的抗氧化活性測定結果

3個品種嘉寶果葉提取物的抗氧化活性見表4。在一定濃度范圍內(nèi)，DPPH·清除能力與提取物的質(zhì)量濃度呈線性關系。不同品種間的清除能力有顯著差異，喬尼爾的清除能力最強，其次是保利斯塔，大紅鉆最弱，其IC50分別為8.48、8.83和9.73μg/mL，三者的清除能力均低于抗壞血酸；抗壞血酸的PCE值最高，將其DPPH·清除能力賦值為100，則喬尼爾、保利斯塔和大紅鉆的清除能力指數(shù)分別為93.0、89.4和81.1。

嘉寶果葉片提取物的ABTS+清除能力與質(zhì)量濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關系。不同品種間的清除能力有顯著差異，喬尼爾的清除能力最強，其次是保利斯塔，大紅鉆最弱，其IC50分別為77.02、80.79和85.70 μg/mL，喬尼爾的清除能力與抗壞血酸無顯著差異，保利斯塔和大紅鉆則顯著低于抗壞血酸；抗壞血酸的PCE值最高，將其ABTS+清除能力賦值為100，則喬尼爾、保利斯塔和大紅鉆的清除能力指數(shù)分別為96.8、92.3和87.0。

嘉寶果葉片提取物的總抗氧化能力代表其還原Fe3+的能力，喬尼爾的總抗氧化能力最強，為0.922 mmol/g，大紅鉆與保利斯塔無顯著差異，總抗氧化能力分別為0.706和0.698 mmol/g，但三者的總抗氧化能力均低于抗壞血酸。把抗壞血酸的抗氧化指數(shù)定義為100，則喬尼爾、大紅鉆和保利斯塔的抗氧化指數(shù)分別為76.7、58.7和58.1。利用4個抗氧化指標對應的指數(shù)，分別計算每個樣品的抗氧化能力綜合指數(shù)，以綜合評價其抗氧化能力強弱。由表4可知，抗氧化能力綜合指數(shù)最高的是喬尼爾葉提取物，其次是保利斯塔，最低的是大紅鉆，說明喬尼爾的綜合抗氧化能力最強。

表4 嘉寶果葉提取物抗氧化活性Table 4 Antioxidant activity of extracts from jaboticaba leaves

2.4 提取物的降糖活性測定結果

3個品種嘉寶果葉提取物的降糖活性見表5。在一定濃度范圍內(nèi)，α-葡萄糖苷酶抑制率與提取物質(zhì)量濃度呈對數(shù)函數(shù)關系，保利斯塔的抑制活性最強，其IC50為14.96μg/mL，大紅鉆與喬尼爾間無顯著差異，IC50分別為28.11和28.73μg/mL，三者的抑制活性均顯著高于陽性對照阿卡波糖（IC50為2958 μg/mL）。α-淀粉酶抑制率與提取物質(zhì)量濃度呈對數(shù)函數(shù)關系，3個品種葉片提取物的α-淀粉酶抑制活性存在顯著差異，保利斯塔最強，其次是大紅鉆，喬尼爾最弱，其IC50分別為57.42、153.59和205.73μg/mL，阿卡波糖的α-淀粉酶抑制活性則顯著高于嘉寶果葉片提取物。

表5 嘉寶果葉提取物降糖活性Table 5 Hypoglycemic activity of extracts from jaboticaba leaves

2.5 提取物總酚含量與生物活性的相關分析結果

嘉寶果葉提取物總酚含量與抗氧化活性、降糖活性的相關性見表6。總酚含量與DPPH·、ABTS+和清除能力均呈極顯著正相關（0.870≤r≤0.999，P≤0.002），與總抗氧化能力呈顯著正相關（r=0.712，P=0.031），與α-葡萄糖苷酶抑制活性和α-淀粉酶抑制活性相關性不顯著。

表6 總酚含量與生物活性的相關性Table 6 Correlations between content of total phenols and biological activity

3 討論

3.1 嘉寶果葉酚類成分

本研究測得大紅鉆、保利斯塔和喬尼爾嘉寶果葉總酚含量為150.41～176.67 mg GAE/g，黃酮含量為32.81～76.42 mg RE/g，林寶妹等（2018）利用70%乙醇提取沙巴、四季早生、福岡和阿根廷4個品種嘉寶果嫩葉的總酚，發(fā)現(xiàn)其總酚含量為123.27～273.70 mg/g，本研究的3個品種總酚含量均大于福岡，小于沙巴、四季早生和阿根廷。3個品種嘉寶果葉提取物的總酚和黃酮含量分別為458.78～535.51 mg GAE/g和99.46～233.42 mg RE/g，黃艷等（2017）對同為桃金娘科且具有藥用價值的番石榴葉正丁醇提取物的總酚和黃酮含量進行測定，發(fā)現(xiàn)含量分別為215.55和17.88 mg/g，均明顯低于本研究的嘉寶果葉提取物，說明嘉寶果葉片在提取酚類、黃酮等活性物質(zhì)方面具有較大優(yōu)勢，利用嘉寶果葉提取物開發(fā)健康產(chǎn)品有巨大潛力。

本研究測得大紅鉆和保利斯塔葉片提取物中含量較多的酚類物質(zhì)為沒食子酸、鞣花酸、兒茶素和表兒茶素，喬尼爾則為沒食子酸、鞣花酸和槲皮素-3-O-葡萄糖苷；Neves等（2021）利用高效液相色譜—二極管陣列檢測器—電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用法（HPLCDAD-ESI/MS）分析5個品種嘉寶果果皮、果肉和種子的酚類成分，結果表明不同品種間存在顯著差異，嘉寶果果皮中存在大量槲皮素、楊梅素和鞣花酸的衍生物，果肉和種子存在大量的鞣花單寧類物質(zhì)、沒食子酸和鞣花酸，同時存在少量的兒茶素和沒食子兒茶素，本研究3個品種嘉寶果葉提取物中酚的種類與Neves等（2021）的研究結果相似，但含量占比存在差異，這是由于不同部位的酚類組成有所差異。林寶妹等（2021）利用HPLC法分析沙巴嘉寶果葉提取物的酚類成分，發(fā)現(xiàn)鞣花酸、楊梅苷和金絲桃苷的含量分別為11.44、10.28和3.02 mg/g，高于本研究3個品種的含量，可能是品種之間的差異導致。本研究測得嘉寶果葉提取物中8種酚類成分的總含量低于總酚含量，一方面是由于福林—酚法測得總酚含量是以沒食子酸當量計算，與實際的酚類質(zhì)量存在差異；另一方面，根據(jù)前人報道（只佳增等，2018；Ribeiro et al.，2019；林寶妹等，2021），除上述8種酚類外，嘉寶果葉中還存在鄰香豆酸、槲皮黃甙、蘆丁、單寧及其他尚未被發(fā)現(xiàn)的酚類組分，因此下一步工作將繼續(xù)對嘉寶果葉酚類組分進行測定研究，以期較全面地了解其酚類組成。

3.2 生物活性研究

本研究利用抗氧化能力綜合指數(shù)分析3個品種嘉寶果葉提取物的抗氧化活性，發(fā)現(xiàn)喬尼爾的抗氧化活性最強，其次是保利斯塔，最弱的是大紅鉆，三者的抗氧化能力綜合指數(shù)分別為68.00、61.44和57.66，對比提取物的總酚含量發(fā)現(xiàn)，總酚含量越高的品種抗氧化能力綜合指數(shù)越強。Souza-Moreira等（2010）的研究結果也表明嘉寶果葉具有顯著的抗氧化活性，且活性大小與總酚含量相關，本研究結果與其結果一致，說明酚類成分可能是抗氧化活性的主要貢獻物質(zhì)。本研究中，3個品種嘉寶果葉提取物清除DPPH·和ABTS+的IC50分別為8.48～9.73μg/mL和77.02～85.70μg/mL，林寶妹等（2021）測得沙巴嘉寶果葉片提取物清除上述2種自由基的IC50分別為7.52和60.12μg/mL，可見在清除DPPH·和ABTS+能力上，沙巴略強于本研究的3個品種。與被認為可作為天然抗氧化劑應用于食品或保健品中的金花茶葉相比，金花茶葉提取物清除DPPH·和ABTS+的IC50分別為121和655μg/mL，F(xiàn)RAP為0.822 mmol/L（張武君等，2020），抗氧化能力弱于嘉寶果葉片。

淀粉是人體攝入最多的碳水化合物之一，α-淀粉酶可將淀粉水解為寡聚糖，再由α-葡萄糖苷酶水解釋放葡萄糖，葡萄糖由腸道吸收后提高血糖濃度，因此抑制上述2種酶的活性能有效抑制餐后血糖水平升高（Goodman，2010；李美華等，2018）。本研究中，3個品種嘉寶果葉提取物對α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶均具有抑制作用，IC50分別為14.96～28.73μg/mL和57.42～205.73μg/mL，保利斯塔的抑制作用強于其他2個品種。林寶妹等（2019）研究發(fā)現(xiàn)沙巴嘉寶果嫩葉醇提物對α-葡萄糖苷酶的IC50為3.10μg/mL，活性高于本研究3個品種。嘉寶果葉片提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性明顯高于目前作為降低餐后血糖藥物的阿卡波糖，說明其降糖作用顯著，是開發(fā)降糖產(chǎn)品的優(yōu)質(zhì)天然來源。3個品種嘉寶果葉提取物的α-淀粉酶抑制活性均低于阿卡波糖，能避免由于過度抑制α-淀粉酶導致大量未被酶解的淀粉在腸道中發(fā)酵產(chǎn)氣，引起胃腸道不良反應（林寶妹等，2020a）。

3.3 總酚含量與生物活性相關分析

相關分析結果表明，嘉寶果葉提取物總酚含量與DPPH·、ABTS+和清除能力呈極顯著正相關，與總抗氧化能力呈顯著正相關，與邱珊蓮等（2017）研究發(fā)現(xiàn)4個品種（沙巴、四季早生、福岡和阿根廷）嘉寶果葉片醇提物總酚含量與清除DPPH·、ABTS+能力均呈極顯著正相關的結果一致。有大量研究已表明總酚含量與抗氧化活性具有明顯的量效關系，曹雙（2015）利用5個抗氧化能力評價指標分析番石榴抗氧化能力，發(fā)現(xiàn)其與酚類、黃酮含量具有顯著相關性；陳青青等（2020）發(fā)現(xiàn)覆盆子葉總酚對抗氧化活性貢獻程度最高；馬飛躍等（2021）研究發(fā)現(xiàn)桑葚葉總酚含量與其提取物抗氧化能力呈正相關。有報道表明，植物多酚清除自由基能力和抗氧化能力與鄰苯二酚或鄰苯三酚等酚羥基結構相關，因為鄰位酚羥基不僅可被氧化成醌類結構，還具有很強的捕捉活性氧等自由基的能力（吳建華等，2015）。本研究中，嘉寶果葉提取物總酚含量與α-葡萄糖苷酶抑制活性、α-淀粉酶抑制活性相關性均不顯著，與洪佳敏等（2019）的研究結果一致，由此可知，嘉寶果葉的降糖活性并非主要由酚類發(fā)揮作用。Ribeiro等（2019）研究發(fā)現(xiàn)嘉寶果葉提取物中除酚類外還存在熊果酸（五環(huán)三萜類物質(zhì)）、萜類和皂苷，已有大量報道表明萜類和皂苷均具有顯著降血糖活性（張玉朝，2020；金斐等，2021），因此這2類物質(zhì)極有可能是抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的主要有效成分。上述研究結果表明，嘉寶果葉酚類物質(zhì)是抗氧化活性的主要貢獻物質(zhì)，而對于降糖活性的貢獻較小。

4 結論

大紅鉆、保利斯塔和喬尼爾嘉寶果葉提取物均含有沒食子酸、鞣花酸、表兒茶素、兒茶素、槲皮素、楊梅苷、金絲桃苷和槲皮素-3-O-葡萄糖苷等酚類成分。喬尼爾的總酚含量最高，抗氧化活性最強，保利斯塔的降糖活性最強。總酚含量與抗氧化活性呈顯著正相關，與降糖活性相關性不顯著。3個品種嘉寶果葉提取物是開發(fā)抗氧化和降血糖健康產(chǎn)品的良好來源，可用于開發(fā)抗氧化護膚產(chǎn)品和系列養(yǎng)生食品。