周聰,謝晴,2,薛夢琪,,張耀鴻*,婁運生,賈仲君,高霄鵬
(1南京信息工程大學氣象災害預報預警與評估協同創新中心/江蘇省農業氣象重點實驗室,江蘇南京 210044;2氣象防災減災湖南省重點實驗室,湖南長沙 410118;3中國科學院南京土壤研究所土壤與農業可持續發展國家重點實驗室,江蘇南京 210008;4曼尼托巴大學,加拿大溫尼伯R3T2N2)
【研究意義】稻田是陸地甲烷(CH4)排放的重要源。據估算,稻田CH4排放約占全球CH4總排放量的17%(Schimel,2000)。稻田土壤中產生的CH4氣體在進入大氣之前大部分被氧化去除,是CH4消減的最主要過程(Cai and Mosier,2000)。其中,以好氧CH4氧化作用最重要,對穩定大氣CH4含量及減緩全球溫室效應具有重要意義。聯合國政府間氣候變化專門委員會第五次報告顯示,近半個世紀全球平均地表溫度持續變暖,近地氣溫增幅呈明顯的晝夜不對稱性,即夜間增幅顯著高于白天(IPCC,2014)。夜間增溫對稻田CH4氧化的影響受到人們普遍關注(劉燕等,2020;郭家宏等,2022)。硅是植物的有益元素之一,且是水稻的必需營養元素。葉片的硅化細胞對于散射光的透過量為綠色細胞的10倍,可使其吸收更多的光源,促進光合作用;還可促進碳水化合物的長距離轉運,協調植物的庫—源關系(高臣等,2011)。因此,研究硅肥對稻田CH4氧化過程及其溫度敏感性的影響,對于緩解陸地生態系統典型濕地CH4排放及探索有效的減排措施具有重要意義。【前人研究進展】CH4排放通量是CH4產生過程和氧化過程的凈綜合結果。一般認為,增溫強烈影響水稻的光合速率、光合碳分配、根系分泌及輸導組織泌氧等生理過程,對根際土壤微環境(營養水平、酸堿度、氧化還原電位等)產生重要影響,進而對微生物驅動的CH4產生和氧化過程有顯著影響效應(Voigt et al.,2017;Zhang et al.,2017;Li et al.,2020;Liu et al.,2020)。Zhou等(2018)研究認為,陸地濕地系統CH4排放量的土壤溫度敏感系數(Q10值)介于1.7~28.0,強烈受CH4氧化作用貢獻的影響。Wang等(2022)在雙季稻田中進行田間開放式增溫后發現,增溫提高了水稻有效分蘗數和根系生物量,有利于O2從葉片運輸到根際中,促進根際土壤的CH4氧化速率,而對CH4氧化菌功能基因pmoA的豐度無明顯影響。Yan等(2022)研究發現,增溫導致全球濕地系統CH4排放通量增加10.1%,而CH4氧化過程對此增幅的貢獻尚不清楚。此外,鋼渣硅肥具有提高水稻產量、提升土壤肥力的特性,在日本和韓國等地區已普遍施用(Das et al.,2019)。Lim等(2022)發現,施硅降低了水稻生長季CH4排放量的15%,其原因是鋼渣硅肥提高了水稻根際的氧化還原電位,有利于CH4好氧氧化作用的進行;同時鋼渣硅肥中含有豐富的Fe3+和Mn4+,可作為電子供體促進CH4厭氧氧化過程(Ali et al.,2008;Wang et al.,2015)。相反,有報道發現,鋼渣硅肥促進了泥炭濕地CH4排放,原因是鋼渣硅肥中釋放出的P、Ca、Mg等元素促進了CH4產生菌的活性(Reithmaier et al.,2017;H?mberg et al.,2021)。Nakamura等(2022)研究發現,施硅對森林濕地土壤的CH4排放通量和產生過程均無影響,暗示施硅對CH4氧化過程也無明顯影響。【本研究切入點】目前,有關增溫或施硅單因子對稻田土壤CH4排放通量的影響已有報道,但二者耦合對稻田土壤CH4消減過程的影響尚不清楚;且以往的報道大多基于培養箱或玻璃溫室進行增溫,不能代表大田夜間增溫的真實情況。因此,有必要研究增溫/施硅對稻田CH4氧化過程的影響效應,闡明施硅條件下增溫稻田CH4好氧氧化驅動的固碳特征變化規律。【擬解決的關鍵問題】采用田間開放式夜間增溫系統提供長期增溫環境,運用13CH4穩定性同位素標記法研究夜間增溫/施硅對稻田土壤CH4好氧氧化過程及其有機碳累積的影響,為探索稻田溫室氣體減排措施提供科學依據和實踐途徑。
田間試驗在南京信息工程大學農業氣象試驗站進行。試驗點屬于亞熱帶濕潤氣候區,年均降水量1100 mm,年均氣溫15.6℃。土壤為潴育型水稻土,灰馬肝土屬,質地為壤質粘土。農作方式為當地典型的稻麥輪作制。供試氮、磷、鉀肥料為當地普遍施用的高濃度復合肥(15-15-15)。供試硅肥為鋼渣硅肥,取自南京鋼鐵集團有限公司,該粉狀礦渣型硅肥有效硅(SiO2)含量為13.8%。
試驗站自2016年6月采用田間開放式增溫系統設置長期試驗一直持續至今。增溫設2個水平,即夜間常溫和夜間增溫;施硅設2個水平,即不施硅和施硅(SiO2)200 kg/ha。試驗共設4個處理,即夜間常溫不施硅(CK)、夜間增溫不施硅(NW)、夜間增溫施硅(NW+Si)及夜間常溫施硅(Si)。采用隨機區組試驗設計,每處理3次重復。小區面積4 m2(2 m×2 m)。在每處理區內采用根袋法,將根際土與非根際土用300目尼龍袋隔開。夜間增溫采用被動式增溫方式進行,即在試驗小區四周搭設不銹鋼管支架,將鋁箔反光膜架設于支架上,在農作物(水稻/小麥)生長期內,夜間(19:00—6:00,隨日長有所增減)用反光膜覆蓋農作物冠層,白天將鋁箔反光膜卷起。隨農作物生長發育進程,及時調整支架高度,使反光膜與農作物冠層保持在0.3 m左右。為保持各試驗小區植物受光度的一致性,在常溫對照區內也搭設不銹鋼管支架,而無反光膜覆蓋。采用溫度記錄儀自動記錄作物冠層和土壤5 cm處全生育期溫度,數據記錄間隔為30 min。前期試驗結果表明,與常溫對照區相比,水稻冠層和5 cm土層的全生育期平均夜溫分別提高1.21和0.62℃,增溫效果明顯(鄭澤華等,2017)。
2020年9月,分別從各處理稻田中采集0~10 cm耕層的根際土與非根際土。一部分鮮土用于測定各試驗處理區耕層土壤的基本理化性質;另一部分鮮土用于培養試驗,測定稻田土壤的CH4好氧氧化速率。其中,土壤有機碳(SOC)采用H2SO4消煮—FeSO4滴定法測定,可溶性有機碳(TOC)采用TOC分析儀測定,土壤總氮采用凱氏定氮法測定,銨氮(NH4+)和硝氮(NO3-)采用KCl提取—流動分析儀測定,土壤有效磷采用鉬藍比色法測定,土壤速效鉀采用火焰光度計測定(Gao et al.,2022)。
稱取2.000 g鮮土放入12 mL的Labco頂空瓶,加入2 mL去離子水后蓋好蓋子,充分搖晃30 s成均勻泥漿,25℃預培養1 d。然后培養瓶中抽真空—充氬氣3次,再置換等量的4 mL高純O2和1 mL13CH4后進行正式培養(胡敏杰等,2017)。每個瓶子的頂空空間在培養開始時含有約10%的CH4濃度,25℃避光培養。同時,進行3種不同形態氮添加處理,分別為:NH4+-N、NO3--N和尿素(Urea),使瓶中最終N濃度為5 mmol/L。每個稻田土壤樣品共計4個培養添加處理,每處理3次重復。采用氣相色譜儀(Agilent 7890B)測定0時刻CH4和CO2起始濃度。之后分別在第3、6、9和12 d采氣測定培養瓶頂空氣體的CH4和CO2濃度。根據CH4濃度隨時間的變化計算CH4氧化速率(R)。
式中,C0為零時刻頂空氣體中的CH4濃度(μL/L),Ct為培養t時刻后的CH4濃度(μL/L),V為培養瓶體積(L),ρ為標準狀態下CH4密度(g/L),t為培養時間(d),m為土壤干土質量(g)。
培養結束后,瓶內加入2 mol/L的HCl溶液進行土壤酸化處理(去除無機碳),然后將土壤泥漿冷凍干燥后測定有機碳含量及其13C有機碳(13C-SOC)豐度值和凈增量。
試驗數據采用Excel 2016和SPSS 21.0進行整理分析,并對處理間土壤理化性質、CH4氧化速率及其固碳量進行方差分析和多重比較,對CH4氧化速率與土壤理化性質進行相關分析。利用Origin 2021制圖。
經過4年多的長期增溫/施硅處理后,各試驗小區耕層土壤的理化性質發生明顯變化。由表1可知,Si處理的稻田耕層土壤有機碳和可溶性有機碳含量分別較CK顯著提高10.5%和26.7%(P<0.05,下同);而NW處理的這2個指標則分別較CK顯著降低11.9%和9.9%。NW+Si處理的稻田可溶性有機碳含量較CK顯著提高16.4%,而有機碳和總氮含量均顯著低于CK;Si處理的土壤總氮、氨氮、硝氮含量均顯著高于其他處理,而NW處理的氮含量均為最低。施加硅肥處理(Si和NW+Si)的有效磷和速效鉀含量普遍高于未施硅肥處理(CK和NW),且Si處理的土壤有效磷和速效鉀含量顯著高于NW處理。以上結果表明,施加硅肥有利于提升耕層土壤的有機碳、活性碳及磷和鉀含量。

表1 長期試驗處理下稻田土壤的理化性質Table 1 Soil physicochemical properties of paddy fields under long-term experimental treatments
由培養期間起始和終止時刻頂空氣體CH4濃度變化可計算得到土壤CH4好氧氧化速率。由圖1可知,稻田非根際土的CH4好氧氧化速率明顯高于根際土,且4個處理間無顯著差異(P>0.05,下同),其數值介于16.0~17.0μg/(g·d)。對于根際土而言,4個處理的稻田CH4好氧氧化速率存在顯著差異,施硅處理(Si和NW+Si)的氧化速率顯著高于未施硅處理(CK和NW),其中Si處理的土壤CH4好氧氧化速率最高,為10.9μg/(g·d),而NW處理則最低,為7.5μg/(g·d)。
將根際土和非根際土的CH4氧化速率分別與土壤(包括根際土和非根際土)理化性質進行相關分析,發現根際土CH4氧化速率與土壤有機碳和總氮含量呈顯著正相關,相關系數分別為0.71和0.74;與水溶性有機碳、礦質態氮、有效磷和速效鉀含量均呈極顯著正相關(P<0.01),相關系數在0.83~0.89。表明增溫/施硅處理后,土壤理化性質的變化可能是稻田根際土壤CH4氧化速率產生差異的重要原因。相反,非根際土CH4氧化速率與土壤理化性質之間未表現出顯著相關性。
測定CH4氧化速率的培養試驗結束后,將培養瓶內的泥漿酸化處理后冷凍干燥,分析其有機碳含量及13C豐度值,進而計算由底物13CH4被氧化并同化進入到土壤中的13C-SOC凈增量。由圖2可知,所有供試土壤的13C-SOC豐度值均遠高于其自然豐度值(1.08%),表明培養瓶內進行了明顯的13CH4好氧氧化過程,且有相當一部分底物13CH4被同化進入了土壤中。其中,在非根際土中,施硅處理(Si和NW+Si)的13C-SOC豐度值顯著高于未施硅處理(CK和NW),Si稻田土壤13C-SOC豐度值最高,達3.45%,而NW處理則最低,為3.28%。根際土也表現出與非根際土類似的變化規律,且其13C-SOC豐度值總體均明顯低于非根際土。
由圖2還可看出,在底物13CH4好氧氧化過程中,有一部分13CH4被同化到土壤有機碳中。對于根際土而言,Si處理的土壤13C-SOC凈增量為13.6μmol/g,顯著高于其他處理。對于非根際土而言,施硅處理(Si和NW+Si)的13C-SOC凈增量顯著高于未施硅處理(CK和NW),其中NW+Si處理最高,達13.2μmol/g,而CK最低。總體而言,根際土的13C-SOC凈增量小于非根際土(Si稻田除外)。
將土壤的13C-SOC凈增量與13CH4凈消耗量相比,可反映出稻田土壤CH4好氧氧化過程的固碳效率。本研究中發現,施硅處理(Si和NW+Si)的CH4好氧氧化固碳效率為61%~66%,明顯高于CK和NW處理的固碳效率(51%~54%),表明施硅有利于CH4好氧氧化過程中有較多的CH4碳源被固定到土壤中,促進土壤有機碳的累積。
在測定CH4氧化速率的培養試驗中,分別添加NH4+-N、NO3--N和Urea進行培養,以模擬增溫/施硅稻田在田間施加化學氮肥情景下CH4氧化過程的變化特征。由圖3可知,在添加3種氮形態條件下,4個處理非根際土中的CH4氧化速率均明顯高于根際土(NO3--N的Si處理除外),這與無氮添加下的氧化速率特征一致,表明施加氮肥對根際土與非根際土之間的CH4氧化速率差異無明顯影響作用。對于非根際土而言,添加NH4+-N、NO3--N或Urea條件下,4個處理的CH4氧化速率差異明顯,且均以NW+Si處理的氧化速率最高,達33.6~36.8μg/(g·d)。相對于無氮添加處理,添加NH4+-N和Urea均明顯提高了4個處理土壤的CH4氧化速率,且以添加NH4+-N效果更明顯。對于根際土而言,添加NH4+-N條件下,CK的CH4氧化速率顯著高于NW和Si處理,而NW+Si處理則最低。添加NO3--N條件下,Si處理的CH4氧化速率顯著高于其他處理,與無氮添加條件下的速率特征一致。添加Urea條件下,NW+Si處理的CH4氧化速率為18.2 μg/(g·d),顯著高于其他處理,而NW稻田則最低。
綜合來看,與無氮添加相比,添加氮條件下4個處理的根際土和非根際土CH4氧化速率總體有大幅提升,說明施加氮肥對增溫/施硅稻田的CH4好氧氧化具有促進作用。在3種氮添加條件下,NW+Si處理非根際土的CH4氧化速率均顯著高于其他處理,且相對無氮添加處理其增幅也最大,說明NW+Si處理非根際土CH4好氧氧化對外源氮輸入的響應度最高。
由圖4可知,在添加3種氮形態條件下,4個處理非根際土中的13C-SOC凈增量均明顯高于根際土(Si處理除外),與無氮添加下的凈增量特征一致,表明施加氮肥對根際土與非根際土的13C-SOC凈增量差異無明顯影響。對于根際土而言,在添加3種形態氮條件下,Si處理土壤CH4氧化過程驅動的13C-SOC凈增量顯著高于其他處理,與無氮添加處理的變化特征一致。對于非根際土而言,施硅處理(Si和NW+Si)的13C-SOC凈增量顯著高于未施硅處理(CK和NW),其中NW+Si處理最高,達13.3μmol/g,與不添加氮條件下的凈增量基本持平。總體而言,與不添加氮處理相比,添加3種氮條件下4個處理的土壤CH4氧化過程介導的13C-SOC凈增量絕對值變化幅度很小,說明施加氮肥對增溫/施硅稻田CH4氧化驅動的土壤固碳量無明顯影響。此外,添加3種氮條件下,施硅處理(Si和NW+Si)的CH4好氧氧化固碳效率(48%~55%)明顯高于CK和NW處理的固碳效率(38%~51%),與無氮添加下固碳效率的規律一致,但施加氮肥降低了增溫/施硅稻田土壤CH4氧化驅動的固碳效率。
CH4好氧氧化作用是稻田土壤CH4消減的主要過程,其由好氧甲烷氧化菌在有O2參與條件下催化完成,該微生物以CH4為唯一碳源和能源進行生長。首先甲烷好氧氧化菌利用其所含的甲烷單加氫酶(MMO)將CH4氧化為甲醇,然后在甲醇脫氫酶(MDH)作用下氧化為甲醛,甲醛通過RuMP循環或Serine循環合成細胞物質,或甲醛被進一步氧化為甲酸,最終降解為CO2。由此可見,CH4好氧氧化過程的碳源流向有兩個:一方面CH4碳源被同化到土壤微生物中,提高了土壤微生物碳含量,另一方面微生物好氧呼吸將其異化為CO2。本研究中將土壤的13CSOC凈增量與13CH4凈消耗量相比,計算出試驗稻田CH4好氧氧化的固碳效率為51%~66%。與Trimmer等(2015)報道發現英國Chalk河流沉積物的CH4好氧氧化平均固碳效率約為50%的結果相似。然而,有報道發現,在CH4濃度較高的覆蓋土中CH4好氧氧化的固碳效率可達69%,而在CH4濃度較低的森林土壤中其固碳效率僅為31%~43%(Roslev et al.,1997)。從功能菌代謝途徑來看,以RuMP途徑進行碳代謝的II型CH4好氧菌傾向于將較高比例的C-CH4轉化到微生物體內,顯著高于以Serine途徑的I型CH4好氧菌的固碳效率(蔡朝陽等,2016)。可見,稻田中的CH4好氧氧化過程不僅可將CH4轉化為增溫潛勢較小的CO2氣體,更重要的是可將一半以上的甲烷碳源同化進入土壤微生物中,促進土壤有機碳累積。
本研究發現,4個處理中非根際土的CH4好氧氧化速率均顯著高于根際土,可能與根際微環境中的營養養分水平有關。已有研究發現,水稻光合碳總量的7.6%~23.5%以有機酸(蘋果酸、檸檬酸、琥珀酸等)的形式分泌到根際微域中,為微生物生長提供了一個富碳營養區(Wei et al.,2019)。CH4好氧氧化菌具有底物代謝多樣性,可以蘋果酸、檸檬酸、琥珀酸等作為碳源進行合成代謝(Chen et al.,2019)。因此,根際土壤中豐富的有機酸對CH4好氧氧化菌利用CH4分子產生底物競爭,使得本研究中通過CH4濃度變化計算出的CH4好氧氧化速率可能被低估。不僅如此,水稻根系從根際土壤中強烈吸收營養元素磷和鉀等,通常造成根際土壤礦質營養元素的普遍匱乏。新近的研究發現,磷缺乏顯著降低水稻根際土壤CH4好氧氧化速率及其相關微生物功能基因pmoA的總豐度,改變了I型和II型CH4好氧氧化菌的相對豐度(Gao et al.,2022)。這種效應在NW處理中表現最明顯,即在無氮添加條件下非根際土的CH4氧化速率比根際土高出1.27倍,在添加尿素條件下也表現出相同特征。夜間增溫可能刺激了水稻根系分泌較多的有機酸,抑制了CH4氧化菌對CH4分子的利用;同時夜間增溫有利于水稻根系生長,促進根系對根際土壤營養元素的吸收,從而對CH4氧化菌的礦質營養元素利用造成不利影響。由此可見,水稻根系生長對根際微環境的養分狀態產生重要影響,在此生境中CH4好氧氧化過程對環境條件變化(如增溫/施硅)表現出較高的響應性。因此,在研究其他環境要素對CH4好氧氧化過程的影響效應時,選用根際土進行分析可能會得出更科學可靠的結論。
CH4好氧氧化作用是微生物驅動的生化過程,凡是影響微生物活性或代謝的環境因素均會對CH4好氧氧化速率產生影響。其中,溫度是CH4好氧氧化過程的重要因素之一(郭家宏等,2022)。本研究發現,無氮添加條件下夜間增溫抑制了稻田根際土CH4好氧氧化速率,且該速率與土壤有機碳、總氮和活性氮含量等均呈顯著正相關。有報道認為,夜間增溫會降低水稻根系活力,減少進入土壤的有機碳量,使得根際土壤中甲烷氧化菌所需養分減少,進而降低甲烷氧化菌活性(Zhang et al.,2020)。而且,稻田夜間溫度敏感性系數Q10相對于白天更大,說明在夜間增溫后微生物活性受溫度影響更大(賈慶宇等,2020)。因此,增溫導致土壤理化性質發生改變,進而影響CH4好氧氧化微生物的活性可能是本研究夜間增溫抑制CH4好氧氧化的主要原因之一。不僅如此,溫度升高會使得土壤中其他微生物活性增強和有機物分解速率增加,導致土壤中O2消耗量增大,CO2濃度上升,養分資源匱乏,誘導底物性競爭,最終抑制CH4的好氧氧化(Zhang et al.,2020)。
硅是水稻生長的必需營養元素,有關硅對稻田CH4好氧氧化過程及其功能微生物影響的報道十分鮮見。一般認為,施加硅肥促進水稻葉片的硅化細胞發育,提高光合速率,可將較多的光合產物以根際分泌物方式釋放到根際土壤中(張萬洋和李小坤,2020);且對水稻根系生長也有促進作用,可增加水稻根部泌氧能力(Ma,2001)。這將極大改善根際土壤的微生物生長環境,有利于CH4好氧氧化菌活性的提升。本研究發現,施硅稻田根際土壤的CH4好氧氧化速率均高于不施硅稻田,以Si處理最高。此外,施硅與增溫處理對CH4好氧氧化速率的影響存在顯著的交互作用,表明硅肥對稻田根際土壤CH4好氧氧化過程的促進效應會受到夜間溫度變化的強烈影響。盡管如此,NW+Si處理根際的CH4好氧氧化速率顯著高于NW處理,表明在夜間增溫條件下施硅對CH4好氧氧化速率仍具有促進效應;說明在未來增溫背景下施加硅肥可能是促進CH4氧化、緩解CH4排放的有效途徑之一。劉燕等(2020)的田間試驗結果也表明,在夜間增溫條件下,施硅處理的水稻全生育期CH4累計排放量下降39%,說明其CH4好氧氧化速率的提升是全生育期CH4累計排放量下降的主要原因。另一方面,本研究中,Si處理土壤的13C-SOC凈增量顯著高于其他處理,且施加硅肥處理的CH4好氧氧化固碳效率明顯高于不施硅處理。暗示施硅可能改變了土壤中CH4氧化菌的群落結構,更有利于II型CH4好氧菌的生長繁殖,促使較多的CH4碳源被固定到土壤微生物碳中,促進土壤有機碳的累積。
外源氮對CH4好氧氧化過程具有重要影響。本研究中,總體來看,與無氮添加相比,添加3種不同形態氮條件下稻田土壤CH4好氧氧化速率大幅增加,尤其以非根際土更明顯。說明施加氮肥可促進稻田的CH4好氧氧化作用。其原因可能是外源氮緩解了微生物細胞生長對氮素的限制,促進了好氧甲烷氧化菌落的活性及相關反應的酶合成。然而有研究表明,由于氮輸入的形態、濃度、施肥方法等均會對CH4好氧氧化造成不同影響,所以氮對CH4好氧氧化的研究結果并不一致(Ravishankara et al.,2009;Ettwing et al.,2016)。本研究中,外源氮對稻田CH4好氧氧化速率起促進效應的總體表現為NH4+-N>Urea>NO3--N。有研究認為,NH4+-N可與微生物的CH4單加氧酶結合,從而抑制CH4氧化過程(Schimel,2000)。Cai和Mosier(2000)的研究卻發現NH4+-N對CH4氧化的抑制作用隨CH4濃度的增加而減弱,最終表現為促進CH4氧化。本研究中,CH4底物濃度超過10%,其較高的濃度可能導致外源氮促進CH4氧化過程。在不同處理中,NW+Si處理非根際土對外源氮添加的響應度最高,表明夜間增溫背景下,通過合理配施氮肥和硅肥可能是提高稻田CH4氧化速率并異化為CO2的一條有效途徑。值得注意的是,外源氮對增溫/施硅稻田CH4氧化驅動的固碳凈增量無明顯影響,導致固碳效率有所下降。這可能是因為外源氮提高了CH4氧化微生物的代謝活性,而未促進微生物繁殖生長所致。所以,綜合來看,施加氮條件下,增溫/施硅稻田CH4氧化為CO2的潛勢大幅提高,而同化到土壤中的13C-SOC固碳量并無明顯變化。
長期夜間增溫抑制了稻田根際土的CH4好氧氧化速率,同時降低其驅動的固碳效率。施硅可緩解夜間增溫對稻田CH4氧化過程的抑制作用,并可提高CH4氧化過程的固碳潛力。施加氮肥可大幅提高稻田CH4好氧氧化速率,而其驅動的13C-SOC固碳量無明顯變化。