基于分子對接及實驗驗證研究補腎健脾活血方通過Wnt信號通路防治骨質疏松癥的作用機制*

吳睿哲，吳 潔，劉 凱，葛殊瑋，伍 強，曾景奇，王 凡

（湖南中醫藥大學第二附屬醫院，湖南 長沙 410005）

骨質疏松癥（osteoporesis，OP）是一種以骨量丟失、骨小梁數量減少、骨密度降低導致全身骨骼強度降低為特征的原發性疾病，50歲以上女性的發病率為同齡男性的1.8倍，而絕經后女性的發病率更高。成骨-破骨平衡的改變是OP發病機制中備受關注的一種[1]，據此防治OP藥物也主要分為骨吸收抑制劑和骨合成促進劑。隨著細胞生物學的發展，激素、細胞因子、多肽等多種藥物正逐步應用于防治OP[2]。骨髓間充質干細胞（bone marrow mesenchymal stem cell，BMSC）的成骨、成脂分化及其功能的調控涉及多種蛋白及轉錄因子[3]，其中Wnt/β-catenin信號通路是促進BMSCs成骨分化不可或缺的重要信號通路。Dickkopf相關蛋白1（Dickkopf related protein 1，DKK-1）及硬化蛋白（sclerostin，Sost）是Wnt通路的抑制性蛋白，通過與Wnt競爭性結合細胞膜表面的相應受體，影響下游因子β-catenin在細胞基質內的含量，最終影響通路下游靶基因的轉錄和表達。

中醫學認為骨質疏松癥的發生主要與腎虛、脾虛、血瘀3個因素有關，補腎健脾活血方正是針對“多虛多瘀”的病機特點所創立。近來，補腎活血類方劑防治骨質疏松癥的研究取得了一定的成果[4]，課題組成員前期也已證實補腎健脾活血方可以促進成骨細胞骨形態發生蛋白-2（bone morphogenetic protein 2，BMP-2）、結締組織生長因子（connective tissue growth factor，CTGF）、成纖維細胞生長因子（fibroblast growth factor，FGF）的表達。本研究通過網絡藥理學篩選方中核心成分，利用分子對接計算探究方中核心成分與DKK-1及Sost蛋白結合的可能性，并通過含藥血清干預過表達質粒轉染兩種抑制性蛋白的MG63細胞，深入研究補腎健脾活血方防治骨質疏松癥的具體分子生物學機制?！?br>