結直腸癌患者的GSTP1基因類型及其臨床意義

宣 斌, 王益民

(河北省秦皇島市第一醫院普外科, 河北 秦皇島 066000)

結直腸癌發病率位于所有惡性腫瘤疾病第4位，且隨著飲食結構、環境、生活習慣等改變，發病率有上升趨勢[1]。手術是臨床治療結直腸癌的有效手段，研究報道，結直腸癌術后5年生存率低，對于晚期、復發的結直腸癌則以化療為主，常見化療藥物包括伊利替康、奧沙利鉑等[2]。隨著新輔助化療在臨床的應用，結直腸癌化療總有效率得到了提升，延長了患者生存期。近年來研究發現，結直腸癌患者對化療方案及毒性作用呈現出明顯的個體差異，考慮與遺傳多態性對藥物代謝、轉運、作用靶點等的影響有關[3]。臨床強調對結直腸癌患者治療前應行基因檢測，根據基因檢測結果選擇合理的化療藥物，以改善患者預后。作為多功能藥物代謝酶，谷胱甘肽S-轉移酶P-1(GSTP1)在人體腫瘤組織中有著廣泛的分布，尤其是上皮來源的惡性腫瘤，陽性表達率高，其對藥物代謝途徑相關酶表達有著直接的影響，但關于GSTP1基因對結直腸癌的影響及意義尚不明確。基于此，研究收集80例結直腸癌患者，觀察其GSTP1基因類型及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料:回顧性收集2014年1月至2022年1月秦皇島市第一醫院收治的80例結直腸癌病例，男性43例，女性37例；年齡26～76歲，平均年齡(58.32±6.27)歲，體重43～83kg，平均(63.28±5.68)kg。納入標準：①CT、MRI及病理學診斷確診為結直腸癌。②年齡≥18歲；③患者交流無障礙，可配合研究；④資料齊全，無重大器質性疾病；⑤可收集到患者完整的臨床檢查資料；⑥患者符合化療指征；⑦至少存在一個可測量病灶；⑧預計生存期>3個月。排除標準：①重要臟器嚴重受損；②合并精神類疾病；③合并其他類型惡性腫瘤疾病；④存在全身感染癥狀者；⑤不耐受化療方案；⑥免疫功能異常或凝血障礙；⑦有聽覺、語言交流障礙，不能與醫師有效溝通；⑧合并家族史、遺傳性結直腸癌患者。剔除標準：①臨床資料缺失者；②患者中途自愿退出者；③失訪者。患者及家屬對研究目的、流程表示了解，加入研究均屬自愿，研究申請得到秦皇島市第一醫院醫學倫理委員會批準，醫患雙方就研究相關事項達成一致，家屬簽訂知情同意書。

1.2方 法

1.2.1GSTP1基因I105V位點基因檢測:研究所用苯酚氯仿由湖北成豐化工有限公司提供，PCR聚合酶與限制性內切酶試劑盒由沃德夫聚合物(上海)有限公司提供，無水乙醇來源于無錫源之泉化工產品有限公司，TRIzol試劑來源于廣州濟恒醫藥科技有限公司。CRC患者初治階段即未行化療治療前，采集外周血4mL，基因組DNA提取采用苯酚氯仿法，將其置入-20℃冰箱環境中保存，采用PCR-RFLP法對GSTP1基因I105V位點基因分型進行檢測。上游引物：5'-CCCCAGTGACTGTGTGTT-GA-3'，下游引物:5'-CAAGAAGCCCCTTTCTTT-GT-3'，產物為225bp，產物經過孵育、消化，結合條帶數量對基因型作出判斷：可見2條帶表示AA型，可見3條帶表示AG型，可見1條帶表示GG型。

1.2.2化療方法:患者均予以以奧沙利鉑為主的化療方案治療，治療第1天，按照85mg/m2的劑量給予奧沙利鉑(成都長青制藥有限公司，國藥準字H20020647)靜脈滴注，于2h內滴注完畢。亞葉酸鈣[廣東嶺南制藥有限公司，國藥準字H20013091，規格：5mg(以亞葉酸計)]，400mg/m2實施靜脈滴注；5-FU(齊魯制藥有限公司，國藥準字H37023697，規格：50mg/10mL)采用靜脈推注的方式，劑量400mg/m2。之后按照1200mg/m2的劑量予以5-FU2持續靜滴，時間為48h。治療2周為1個周期，共進行6個周期治療。

1.2.3GSTP1表達檢測:選取18例組織標本分別檢測結直腸癌組織和癌旁組織(距病灶2cm的組織)GSTP1基因表達情況，上游引物：5'-CTAGTTTGCCCAAGGTCAAG-3'，下游:5'-AGCCACCTGAGGGGTAAG-3'，產物擴增后為493bp。采用PCR檢測，計算GSTP1 mRNA相對表達量，共進行3次實驗，取平均值。

1.3觀察指標:①通過GSTP1基因檢測，判斷其類型。②對比基因突變組(GSTP1基因突變組)、基因野生型組(GSTP1基因野生型組)的臨床及病理特征。③對比兩組臨床療效，隨訪毒副作用、無進展生存期。完全緩解：經過治療后目標病灶消失且未出現新病灶、癥狀消失，臨床指標正常；部分緩解：目標病灶減少30%以上維持1個月；疾病穩定：目標病灶未縮小或<30%，但未增大、無新病灶；疾病進展：目標病灶增加或出現新病灶。總有效率=完全緩解率+部分緩解率。④選取18例結直腸癌患者(9例突變型、9例野生型)組織標本分別檢測結直腸癌和癌旁組織GSTP1表達情況。

2 結 果

2.180例患者GSTP1基因檢測結果分析:經過基因檢測顯示，GSTP1基因編碼的I105V位點野生型45例(基因野生型組)，56.25%；突變型35例(43.75%)，將其作為基因突變組。

2.2兩組患者臨床病理特征對比分析:基因突變組與基因野生型組在年齡、性別、腫瘤分型、組織學分型、生長方式、浸潤深度、神經侵犯、脈管癌栓、淋巴結轉移等方面比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組患者臨床病理特征比較

2.3兩組患者化療效果比較:基因突變組患者的臨床資料總有效率明顯低于基因野生型組，差異有顯著性(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者臨床療效比較n(%)

2.4兩組患者毒副作用比較:兩組患者毒副作用發生情況比較，差異均無顯著性(P>0.05)。見表3。

表3 兩組患者毒副作用發生情況比較n(%)

2.5基因突變組與基因野生型組無進展生存期比較:隨訪患者無進展生存期，基因突變組(4.39±1.24)年明顯低于基因野生型組(6.49±2.15)年，差異有統計學意義(t=5.147，P<0.05)。

2.6結直腸癌和癌旁組織GSTP1基因表達情況:選取18例組織標本分別檢測結直腸癌和癌旁組織GSTP1基因表達情況，結果顯示結直腸癌組織GSTPlmRNA相對表達量(0.339±0.032)，高于癌旁組織的(0.243±0.025)，差異有統計學意義(t=15.070，P<0.05)。

3 討 論

姑息性切除與化療是臨床治療結直腸癌的常見手段，隨著醫療衛生技術的進步，臨床治療結直腸癌的化療方案增多，但化療效果呈現出個體差異，并非所有患者均能夠從中獲益。因此掌握結直腸癌患者臨床療效及預后影響因素尤為重要。

近年來研究發現，化療敏感性對化療結果有著直接的影響。化療藥物代謝相關酶的基因位點呈現出多態性變化，會對酶功能產生影響，進而對藥物代謝、化療效果產生影響[4]。作為Ⅱ相代謝酶，GSTP1與親電子細胞毒性藥物結合后，能夠強化水溶性，對化療藥物代謝具有一定的促進作用[5]。以往有學者在研究中發現，GSTP1基因A>G堿基替代會引起GSTP1酶第105位氨基酸改變，表現為異亮氨酸向纈氨酸的突變，降低酶穩定性與催化活性[6]。GSTP1基因存在野生型與突變型之分，前者主要是從大自然中獲得，非人工誘變產生；后者則是生物體受到人為誘發因素影響導致個體突變產生的細胞、病毒粒子。兩種基因型來源不同、性質不同，其對結直腸癌患者的影響尚未得到證實[7]。本研究對80例結直腸癌患者GSTP1基因進行檢測，結果顯示野生型45例(基因野生型組)，56.25%，突變型35例(43.75%)，與國外學者研究結果一致[8]。

本研究對比了兩種基因型在各項臨床病理特征方面的差異，結果顯示均無顯著差異，表明GSTP1基因多態性可能并不會影響到結直腸癌的病理發展。以往有學者提出，GSTP1基因多態性與結直腸癌易感性相關，本研究結果與之不一致，考慮是人種、地域等因素造成的結果差異[9]。研究對比了基因突變組與基因野生型組在化療治療效果及無進展生存期方面的差異，顯示基因突變組均低于基因野生型組，但兩組毒副作用差異不大，提示與GSTP1基因突變型相比，野生型患者預后更好，化療治療效果更好。有學者在研究中提出不同GSTP1基因型應用不同化療方案所獲益也呈現出一定的差異，突變型更適用以奧沙利鉑為主的化療，野生型則更能夠從伊立替康化療方案中獲益，但關于其機制尚需要進一步深入研究[10]。

另外，本研究選取18例組織標本分別檢測結直腸癌和癌旁組織GSTP1基因表達情況，結果發現結直腸癌GSTP1表達顯著高于癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.05)，提示GSTP1基因在結直腸癌中呈現出高表達。但本研究病例較少，所得結果可能有所偏倚，后續仍需大樣本研究，挖掘其臨床價值，更好地服務于臨床。

綜上所述，不同GSTP1基因類型的結直腸癌臨床病理特征無明顯差異，但對結直腸癌患者化療治療效果及預后均會產生一定的影響，野生型預后更好，在化療方案中獲益更大。臨床上應加強GSTP1基因檢測，結合患者基因型選擇合理化療方案，提升治療效果。