2014—2021 年云南省普洱市獸醫系統實驗室檢測能力比對

張容萍，魯富有，馬娜，付航，楊子江，陳景仙，張海楠

（普洱市動物疫病預防控制中心，云南普洱 665000）

動物疫病預防控制機構負責動物疫病防控策略與技術措施的制定和實施[1]，是法定的承擔動物疫病診斷、監測、流行病學調查等職能的獸醫機構。依托動物疫病預防控制機構的獸醫系統實驗室作為開展具體工作的技術支撐機構，其技術水平的高低直接影響轄區內動物疫病的防控效果，關系畜牧業的發展。因此提升獸醫系統實驗室檢測能力，對脫貧攻堅、鄉村振興以及維護公共衛生安全具有重要意義。

獸醫系統實驗室檢測能力比對是農業農村部加強各級實驗室建設和管理的重要抓手，是加強實驗室質量控制的有效方法之一[2]。按照農業農村部和云南省農業農村廳相關要求，普洱市動物疫病預防控制中心積極組織各級獸醫系統實驗室參加檢測能力比對工作。本文分析了2014—2021 年普洱市各級獸醫系統實驗室檢測能力比對結果，以期為進一步提高實驗室檢測能力，提升獸醫系統實驗室綜合水平奠定基礎[3]。

1 材料與方法

1.1 比對范圍

2014—2021 年，普洱市參加實驗室檢測能力比對的市級動物疫病預防控制機構實驗室、邊境動物疫情監測站實驗室以及縣（區）級動物疫病預防控制機構實驗室（通過考核驗收）數量見表1。

表1 2014—2021 年參比實驗室數量 單位：個

1.2 比對項目、方法和標準

每年設置3～5 個比對項目，涉及非洲豬瘟、口蹄疫、高致病性禽流感、豬瘟、小反芻獸疫、豬偽狂犬病、布魯氏菌病和馬傳染性貧血等動物疫病的病原核酸和抗體檢測。檢測方法有聚合酶鏈式反應（PCR）、實時熒光定量PCR（qPCR）、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、血凝和血凝抑制試驗（HA-HI）、虎紅平板凝集試驗（RBT）、試管凝集試驗（SAT）、瓊脂擴散試驗（AGID）等。檢測程序均依照國家標準或國家參考實驗室推薦方法（表2）進行。

1.3 比對樣品和試劑

比對樣品由云南省動物疫病預防控制中心統一制備、質控、編號、分裝和發放。每個比對項目設置5～6 份盲樣（2017 年每個比對項目設置5 份盲樣），每管分裝量為單次試驗量的3～4 倍，每份盲樣容量一致，在外觀上無差異。普洱市動物疫病預防控制中心每年派專人在規定時間內統一領取全市參比實驗室的比對盲樣和試劑，置于有冰袋的冷藏箱中，并在12 h 內送達參比實驗室。

表2 2014—2021 年普洱市獸醫系統實驗室參比項目、方法和標準

1.4 結果判定

以云南省動物疫病預防控制中心提供的檢測結果為判定標準。

1.5 比對結果報送

參加比對的獸醫系統實驗室在收到樣品3 d 內完成檢測，并將檢測結果報至云南省動物疫病預防控制中心。

2 結果

2.1 市級動物疫病預防控制機構實驗室

2014—2021 年市級動物疫病預防控制機構實驗室共參加了25 個比對項目，檢測147 份比對樣品。結果（表3～4）顯示：檢測正確樣品143份，平均正確率為97.3%；2014—2021 年正確率分別為100%、100%、100%、100%、94.4%、100%、91.7%、94.4%；不同檢測方法正確率分別為ELISA 100%、SAT 100%、AGID 100%、PCR/qPCR 94.4%、HA-HI 93.6%；不同比對項目正確率分別為新城疫病毒抗體檢測100%、O 型口蹄疫病毒抗體檢測100%、小反芻獸疫病毒抗體檢測100%、豬偽狂犬病毒抗體檢測100%、布魯氏菌抗體檢測100%、馬傳染性貧血病毒抗體檢測100%、非洲豬瘟病毒核酸檢測94.4%、H5/H7/H9亞型禽流感病毒抗體檢測92.8%。

2.2 邊境動物疫情監測站實驗室

2014—2021 年3 個邊境動物疫情監測站實驗室共參加了25 個比對項目，檢測423 份比對樣品。結果（表5～6）顯示：檢測正確樣品405份，平均正確率為95.7%；2014—2021 年正確率分別為94.4%、94.4%、94.4%、93.3%、98.1%、98.1%、98.1%、94.4%；不同檢測方法正確率分別 為SAT 100%、ELISA 98.1%、HA-HI 94.3%、AGID 88.9%、PCR/qPCR 83.3%；不同比對項目正確率分別為豬偽狂犬病毒抗體檢測100%、布魯氏菌抗體檢測100%、豬瘟病毒抗體檢測100%、小反芻獸疫病毒抗體檢測98.3%、O 型口蹄疫病毒抗體檢測96.9%、H5/H7/H9 亞型禽流感病毒抗體檢測94.4%、新城疫病毒抗體檢測94.4%、馬傳染性貧血病毒抗體檢測88.9%、非洲豬瘟病毒核酸檢測83.3%。

表3 2014—2021 年市級動物疫病預防控制機構實驗室不同檢測方法比對結果

表4 2014—2021 年市級動物疫病預防控制機構實驗室不同比對項目正確率統計 單位：%

2.3 縣（區）級動物疫病預防控制機構實驗室

普洱市共有7 個縣（區）級動物疫病預防控制機構實驗室，有6 個通過獸醫系統實驗室考核驗收，于2018 年開始參加能力比對。2018—2021年縣（區）級動物疫病預防控制機構實驗室共參加了12 個比對項目，檢測270 份比對樣品。結果（表7～8）顯示：檢測正確樣品259 份，平均正確率為95.9%；2018—2021 年正確率分別為91.7%、93.1%、100%、100%；不同檢測方法正確率分別為ELISA 100%、SAT 95.0%、HA-HI 91.1%；不同比對項目正確率分別為O 型口蹄疫病毒抗體檢測100%、豬偽狂犬病毒抗體檢測100%、小反芻獸疫病毒抗體檢測100%、豬瘟病毒抗體檢測100%、布魯氏菌抗體檢測95.0%、H5/H9 亞型禽流感病毒抗體檢測91.1%。

表5 2014—2021 年邊境動物疫情監測站實驗室不同檢測方法比對結果

表6 2014—2021 年邊境動物疫情監測站實驗室不同比對項目正確率統計 單位：%

3 分析與討論

3.1 獸醫系統實驗室以考促建成效明顯

按照云南省農業農村廳要求，考核驗收合格的獸醫系統實驗室方可參加能力比對。市級實驗室和3 個邊境動物疫情監測站實驗室均于2012 年通過了獸醫系統實驗室考核，思茅、寧洱、景東、鎮沅4 個縣（區）級動物疫病預防控制機構實驗室于2017 年通過了考核，墨江和景谷2 個縣級動物疫病預防控制機構實驗室于2018 年通過了考核。截至2021 年，全市共有10 個獸醫系統實驗室通過考核驗收。8 年間，參比實驗室范圍覆蓋了所有通過考核驗收的10 個獸醫系統實驗室。市級、邊境動物疫情監測站、縣（區）級實驗室的檢測平均正確率分別為97.3%、95.7%、95.9%，整體檢測水平較高。能力比對促進了各級實驗室的建設與升級，參比項目在原來常規的HA-HI、ELISA、SAT、AGID 等血清學項目基礎上增加了PCR 和qPCR 方法，各級實驗室檢測能力和水平得到穩步提升。

表7 2018—2021 年縣（區）級動物疫病預防控制機構實驗室不同檢測方法比對結果

3.2 HA-HI 檢測能力薄弱

HA-HI 作為禽流感病毒抗體檢測的常規方法，是每個實驗室必須過關的檢測項目，但各級實驗室的HA-HI 檢測正確率偏低，且年度間正確率表現不穩定。2014—2021 年，市級實驗室HA-HI平均正確率為93.6%，其中只有5 年的正確率為100%；邊境動物疫情監測站實驗室年均正確率為94.3%，只有1 年所有參比實驗室正確率均為100%；縣（區）級動物疫病預防控制機構實驗室年均正確率為91.1%，只有2 年所有參比實驗室均為100%。以上數據說明各實驗室對HA-HI 檢測方法的掌握和運用能力依然有所欠缺。究其原因，可能是HA-HI 屬于定量試驗，對試劑（1%雞紅細胞懸液等）、環境（溫度等）、耗材（反應板質量等）、儀器（移液器校準等）等要求較高，以致試驗正確率難以保證。

表8 2018—2021 年縣（區）級動物疫病預防控制機構實驗室不同比對項目正確率統計 單位：%

3.3 病原學檢測能力不足

在普洱市的11 個獸醫系統實驗室中，目前只有市級、瀾滄縣和孟連縣3 個實驗室可開展病原學檢測，其余實驗室均因未配備相關設施設備而無法開展此項工作。主要原因是，普洱市位于我國西南邊陲，經濟發展水平不高，本級財政不具備充分支持縣（區）級建立分子生物學實驗室的能力，導致病原學檢測能力大大不足，無法滿足動物疫病防控需求。

4 建議

經過持續8 年開展檢測能力比對工作，普洱市獸醫系統實驗室檢測水平有了很大提升，以考促建卓有成效。但普洱市地處邊境一帶，邊境線長（480 km），境外動物疫情傳入壓力大、防控難度高，實驗室的檢測能力和設施建設還有待加強。為了進一步提升實驗室綜合水平，更好地為動物疫病防控和維護公共衛生安全提供技術支撐，提出如下建議。

4.1 培養專業素質強的實驗工作人員

當前基層獸醫系統實驗室面臨工作人員少，平均年齡大，理論知識過于落后，操作儀器設備不熟練，優秀人才激勵政策過于單一等問題。有關部門應重視基層隊伍的發展建設，通過政策傾斜，職稱評定等鼓勵措施調動工作人員積極性，通過招聘、培養高校畢業生，實現團隊梯度建設和人才儲備。業務部門需加強實驗室人員技術培訓，開展相關法律法規、實驗室生物安全、技術標準和實驗操作等專題培訓，加強與上下級、平級單位間的學習交流，建立一支業務專、素養高的實驗室檢測人才隊伍。

4.2 加大實驗室工作經費投入力度

普洱市地處我國西南邊陲，經濟發展水平不高，部分縣（區）未把監測經費納入財政預算，導致實驗室無固定監測經費或經費不足。應提高對基層實驗室的重視，加大對動物疫病監測資金的投入，按照實際情況，根據畜禽養殖比例確認資金份額，每年歸納至各級政府的財政預算；同時，畜牧獸醫主管部門制定針對性監督措施，保證監測資金在基層專款專用，落實到實處，避免資金被占用或挪用。

4.3 加快獸醫系統實驗室的管理體系建設

大多數基層實驗室缺乏完善的管理體系或不能按體系有效運行。應根據實際工作條件，不斷完善實驗室質量管理體系，實現對儀器設備、檢驗人員、培訓考核、檔案資料、糾正與預防、質量保障、試劑耗材等的全面規范化管理；同時，加快完善生物安全管理體系，優化《實驗室廢棄物及污染物無害化處理制度》《儀器設備使用管理制度》《藥品試劑使用管理制度》《實驗室生物安全管理制度》《菌（毒）種管理制度》等管理制度，并嚴格按照技術標準、實驗室管理規范開展實驗室工作。